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心肌肽溶液纳米膜过滤法去除猪细小病毒研究
目的：研究纳米膜过滤去除猪细小病毒的可行性。方法：用Viresolve Prefilter和孔径20nm的Viresolve Pro纳米膜两级串联过滤，滤膜面积为3.1cm2，使用压力30psi。结果：三批加载猪细小病毒的心肌1肽溶液样品病毒降低量均≥3.44 logs.滤后样品经盲传三代实验后未出现细胞病变。结论：该方法可有效去除猪细小病毒。
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纳米技术在膜技术方面的应用
在膜技术方面，用纳米材料制成独特的纳米膜，能过滤、筛去制剂的有害成分，消除因药剂产生的污染，从而保护人体。在抗癌的治疗手段方面，德国一家医院的研究人员将一些极其细小的氧化铁纳米颗粒，注入患者的癌瘤里，然后将患者置于可变的磁场中，使患者癌瘤里的氧化铁纳米颗粒升温到45～47℃，这温度足以烧毁癌瘤细胞，而周围健康组织不会受到伤害。
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重组人凝血因子Ⅷ制备工艺中纳米膜的选择
目的 选择适用于重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ,rhFⅧ)制备工艺中的纳米膜.方法 将rhFⅧ收获液Ⅰ(含吐温80)和收获液Ⅱ(不含吐温80)经4种不同型号的滤器(Duropore(R)、Kleenpak(R)、Minisart(R)、Virosart(R) max)进行预过滤,检测样品活性回收率及蛋白回收率.用不同厂家的20 nm孔径纳米膜(Nanol～Nano7)对预过滤样品进行过滤,检测样品的活性回收率、蛋白回收率及过滤通量.以粒径约20 nm的细小病毒(minute virus of mice,MVM)作为指示病毒,对筛选出的纳米膜进行病毒去除验证.结果 确定佳预过滤膜为minisart(R),收获液Ⅰ和收获液Ⅱ的活性收获率分别为87.9％和99.1％,蛋白回收率分别为97.3％和98.2％.确定收获液Ⅰ的佳过滤纳米膜为Nano6,样品活性回收率为100％,蛋白回收率为92.6％,过滤通量为16.44 L/(m2·h);收获液Ⅱ的佳纳米膜为Nano7,样品活性回收率为98％,蛋白回收率为86％,过滤通量为26.54 L/(m2·h).Nano6和Nano7的病毒去除验证均合格.结论 筛选的纳米膜可用于rhFⅧ的产业化生产工艺中.
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静注人免疫球蛋白新生产工艺病毒灭活/去除效果的验证及评估
目的 对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估.方法 选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力.结果 辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上.结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体.
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自身不净，焉能净水--净水器行业乱象令人忧心
在众多电器大卖场，各种品牌的净水器正在“争奇斗艳”。有的宣称是进口技术，有的宣称是专利产品，纳米膜、纯晶技术、能量活水机……各种品牌让人眼花缭乱。
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壳聚糖/藻酸盐纳米膜在促进小鼠全层损伤皮肤创面愈合中的作用
目的 评价复合生物材料壳聚糖/藻酸盐纳米膜作为组织工程的细胞支架材料,通过促进小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在其表面的粘附、迁移、增殖及分化,从而加速皮肤创面修复的效果.方法 实验动物为BALB/c小鼠,8周龄,于各小鼠背部制备皮肤缺损创面模型.实验先分2组,实验组小鼠背部创面以壳聚糖/藻酸盐纳米膜覆盖,对照组不予该纳米膜覆盖创面,直接粘贴手术贴巾,并分别围绕创缘皮下注射等量绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的骨髓间充质干细胞(GFP-MSCs),在术后进行小动物活体成像观察绿色荧光蛋白信号强度,用流式细胞仪检测阳性GFP-MSCs比例,并取创面新生组织行冰冻切片观察GFP-MSCs生长情况;再分别设置空白对照组、纳米膜组、MSCs注射组和纳米膜+MSCs注射组,观察术后各组小鼠创面愈合情况.结果 实验组小鼠术后第7天的创面GFP信号强度[(25.97 ±6.98) ×104]明显高于对照组[(6.00±2.84)×104,P＜0.05];流式细胞仪检测创面GFP-MSCs水平,术后第5天实验组阳性率[(66.78±7.00)％]明显高于对照组[(33.58±3.62)％,P＜0.01],第7天实验组阳性率[(53.03±3.15)％]明显高于对照组[(34.20 ±7.98)％,P＜0.01];术后第14天小鼠新生组织中GFP-MSCs密度实验组[(101.00±15.51)个/视野]明显高于对照组[(25.25 ±5.07)个/视野,P＜0.05];创面愈合观察发现纳米膜+MSCs注射组创面愈合速度快于其他3组(P＜0.05).结论 壳聚糖/藻酸盐纳米膜用于皮肤创面,可促进MSCs在体内粘附、生长、分化、迁移,进而促进皮肤组织修复,加速创面愈合,是一种良好的细胞支架材料.
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人抗凝血酶Ⅲ纳米膜过滤工艺优化
目的 考察Asahi Kasei(旭化成)公司纳米膜过滤人抗凝血酶Ⅲ(Human AntithrombinⅢ,ATⅢ)的回收率,优化纳米膜过滤工艺.方法 选取旭化成公司3种不同规格型号的纳米膜Planova@15N,Planova@20N和Planova@BioEX进行ATⅢ过滤回收率考察,通过留取生产工艺中不同阶段不同蛋白浓度的制品,优化过滤蛋白总量,确定纳滤米过滤工艺位置.结果 蛋白浓度16 mg/mL的ATⅢ通过Planova@20N过滤获得蛋白总量高,ATⅢ蛋白及效价回收率也较高,为佳纳滤蛋白浓度.结论 通过本研究筛选出Planova@20N,佳纳滤蛋白浓度为16 mg/mL,经去除病毒验证其对细小病毒的去除率LRV ＞4.0,终确定纳滤工艺在人抗凝血酶Ⅲ工艺中超滤浓缩后,既符合生产工艺要求并可获得高回收率.
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静电纺丝石墨烯/丝素蛋白纳米膜的构建及体外生物相容性研究
目的 探索以石墨烯(graphene,Gr)和丝素蛋白(silk fibroin,SF)为原料,采用静电纺丝技术制备Gr-SF纳米膜方法,并评价Gr-SF纳米膜体外生物相容性.方法 取Gr和SF溶于甲酸溶液,按照不同Gr质量分数(0、5％、10％、15％、20％)配制静电纺丝溶液,测定溶液静态接触角.采用静电纺丝技术制备0、5％、10％、15％、20％ Gr-SF纳米膜(分别为A、B、C、D、E组),光镜和扫描电镜观察其结构,电化学工作站循环伏安法测定电导率,正己烷溶液置换法测定孔隙率,采用L929细胞以细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法评价细胞毒性.取原代培养的SD大鼠雪旺细胞与各组Gr-SF纳米膜共培养3d,甲苯胺蓝染色观察雪旺细胞生长形态和分布,CCK-8法检测细胞黏附情况,EdU/Hoechst33342染色检测细胞增殖情况.结果 静态接触角检测显示随Gr质量分数增大,Gr-SF静电纺丝溶液亲水性降低.光镜和扫描电镜观察示Gr-SF纳米膜具有纳米纤维结构,Gr颗粒分散在纳米膜中,Gr质量分数增加会促使颗粒聚集.孔隙率检测示Gr-SF纳米膜均具有高孔隙率(＞65％),随Gr质量分数增加,Gr-SF纳米膜的孔隙率和电导率均逐渐增加,C、D、E组均高于A组(P＜0.05).体外L929细胞毒性检测显示Gr-SF纳米膜具有良好生物相容性.甲苯胺蓝染色、CCK-8检测及EdU/Hoechst33342染色示,Gr质量分数在10％以内的Gr-SF纳米膜可支持共培养的雪旺细胞成活和增殖.结论 采用静电纺丝技术制备的10％Gr-SF纳米膜具有合适的亲水性、导电性、孔隙率等理化特性,同时具有良好的体外生物相容性,可用于组织工程神经制备.
