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医用胶原修复膜病毒灭活/去除工艺的验证和评价
目的 验证和评价医用胶原修复膜制备工艺中过氧化氢溶液、低pH孵放和γ射线辐照灭活/去除病毒的可行性.方法 以水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,vSV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、呼肠弧病毒Ⅲ(respiratory enteric orphan virusⅢ,Reo 3)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)作为指示病毒,采用非洲绿猴肾细胞(Vero)和猪肾细胞(PK-15)进行病毒增殖和感染性评价,Karber法测定病毒滴度;分别对牛腱片样品进行3％过氧化氢、低pH孵放处理(pH 3.4±0.3),检测病毒灭活/去除效果;将医用胶原修复膜中间品进行∞Co γ射线辐照(剂量为25 kGy),检测病毒灭活/去除效果.结果 经3％过氧化氢溶液处理1h后,样品VSV和PRV的病毒灭活值均大于4 Logs;经低pH孵放处理14 d后,样品中已检测不到VSV和PRV,病毒灭活值分别为6.55和5.59 Logs;经25 kGy剂量60Co γ射线辐照处理后,样品中VSV、PRV、Reo3和PPV均被有效灭活,病毒灭活值分别为5.64、4.35、4.87和5.36 Logs.结论 医用胶原修复膜制备工艺中的3种灭活/去除病毒步骤均有效,经灭活/去除病毒后的产品质量安全可靠.
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静注人免疫球蛋白新生产工艺病毒灭活/去除效果的验证及评估
目的 对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估.方法 选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力.结果 辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上.结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体.
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重组人IL-12病毒去除/灭活工艺的建立及验证
目的 建立重组人白细胞介素-12 (recombinant human IL-12,rhIL-12)的病毒去除/灭活工艺,并进行验证.方法 采用预过滤器(Viresolve Shield,纳米滤膜3.1 cm2)和除细小病毒过滤器(Viresolve Pro,纳米滤膜3.1 cm2)串联过滤,样品体积为90 ml,过滤时间为2h,安全系数为1.88,压力为30 psi,建立rhIL-12病毒去除工艺,分析该工艺对产品的比活性及回收率的影响,并以猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒去除效果验证;采用低pH孵放法(用1 mol/L HC1调pH值至3.8±0.1,室温放置180 min后,用1 mol/L NaOH调pH值至7.4)建立rhIL-12病毒灭活工艺,分析该工艺对产品的蛋白含量及比活性的影响,并分别以水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒灭活效果验证.结果 纳米膜串联过滤病毒去除工艺中,蛋白回收率为95.14％,比活性为过滤前的95.12％,对rhIL-12活性基本无影响;当滤出液达90 ml时,PPV下降滴度均大于4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求.低pH孵放法病毒灭活工艺中,rhIL-12的蛋白含量在病毒灭活前后分别为359和338μg/ml,生物学活性分别为3.392×106和3.356×106 IU,均无明显变化;室温处理180 min后,指示病毒PRV、VSV的下降滴度均＞4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求.结论 建立的rhIL-12膜过滤病毒去除工艺和低pH孵放法病毒灭活工艺均可有效地去除/灭活病毒,保证了产品的质量及安全性.
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采用低pH法灭活人乙型肝炎免疫球蛋白中的病毒
目的考察人乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)于低pH孵放下,其病毒灭活情况,及对抗-HBs效价、IgG组份的影响.方法将HBIG原液调pH至4.0于24℃±1℃孵放21 d,以及将成品于2～8℃放置3年比较抗-HBs、IgG各组份指标的变化.结果HBIG原液按上述条件病毒灭活效果可达到7.00logTCID50/0.1 mL以上,抗-HBs效价、IgG单体与二聚体(D+M)的含量均有所下降.成品2～8℃放置3年,抗-HBs效价、IgG单体与二聚体的含量较稳定.结论人乙型肝炎免疫球蛋白经低PH灭活病毒法灭活病毒有效,灭活后,抗-HBs效价、IgG单体与二聚体之和均有所下降,但其成品放于2～8℃,抗-HBs效价、IgG单体与二聚体含量较稳定.
关键词： 低pH孵放 人乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG) -
巴氏法结合低pH孵放法在IVIG制备中的应用
目的:进一步提高IVIG的安全性和稳定性.方法:在Cohn's低温乙醇法分离制备IVIG的基础上,引入液态及无保护剂状态下的巴氏法结合低pH孵放法的两次病毒灭活工艺,并对该工艺制备的IVIG的IgG纯度、Sephadex G-200层析、SDS-PAGE及圆二色谱分析,对病毒灭活有效性、制品稳定性及其它生物学活性检测.结果:制品的所有质量指标均符合<中国生物制品规程>要求.结论:巴氏法结合低pH孵放法病毒灭活效果优于单一的巴氏灭活法或低pH孵放法以及其它方法,IVIG制品在液体状态下具有良好的稳定性.
关键词： 静脉注射人血免疫球蛋白 巴氏法 病毒灭活 低pH孵放 保护剂 -
S/D法和低pH孵放法在富含IgM免疫球蛋白中脂包膜病毒的灭活研究
目的 以水泡性口炎病毒(VSV)、辛德毕斯病毒(Sindbis)和伪狂犬病毒(PRV)为指示病毒,验证S/D和低pH孵放2种处理方法对富含IgM制剂的脂包膜病毒灭活效果.方法 将指示病毒加入富含IgM制剂中,在无保护剂状态下,分别经S/D和低pH孵放处理后,测定残余病毒滴度,以病毒滴度下降数代表灭活效果.结果 S/D法使PRV和Sindbis的病毒滴度下降分别为2.94和5.25 Logs；低pH孵放使PRV和VSV的病毒滴度下降分别为6.03和4.94 Logs.结论 S/D法和低pH孵放2种处理方法对脂包膜病毒的模拟病毒VSV、Sindbis和PRV病毒,均能有效灭活.
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不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响
目的 比较不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白质量和收率的影响.方法 以相同品质的FⅡ沉淀溶解液为原料,分别经低pH孵放、纳米膜过滤、巴氏消毒和S/D病毒灭活工艺处理后来制备原液,比较原液质量及蛋白收率.结果 4种工艺所制备原液的主要质量指标相互间均符合<中国药典>标准,蛋白纯度、IgG单体+二聚体、PKA、抗体以及热稳定等质量指标相互间无显著差异(P＞0.05).采用巴氏消毒工艺制品的抗补体活性明显低于其它3种产品(P＜0.01).4种工艺的蛋白收率差异较大,采用巴氏消毒工艺制备的制品低,仅为(72.7±5.6)%.结论 不同病毒灭活工艺对静注免疫球蛋白的质量有一定影响,而对蛋白收率的影响较大.
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低pH孵放病毒灭活效果回顾性验证评价
目的 回顾和评价连续2次低pH病毒灭活工艺验证效果,为静注人免疫球蛋白制品病毒灭活工艺提供进一步技术支持.方法 将一定量指示病毒加入IVIG中,在pH4.1±0.3,24±1c条件下孵放24 d,并在灭活过程中的不同时间节点取样进行残余病毒滴度检测.结果 低pH孵放法可有效灭活VSV、Sindbis、HIV指示病毒,3种指示病毒滴度下降均大于4个Logs,符合国药监注[2002] 160号文件要求.结论 低pH孵放病毒灭活工艺能有效地增加静注人免疫球蛋白的安全性.
