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三种去除人巨噬细胞迁移抑制因子(HuMIF)重组蛋白内毒素方法的比较
运用3种方法(C8反相柱层析-复性法、多步层析法和本实验室改进的C8反相柱层析-非复性法)去除重组HuMIF蛋白的内毒素,比较其所得蛋白内毒素含量、酶活性以及蛋白回收率等,评价这3种去内毒素方法的优劣.结果表明,C8反相柱层析-复性法蛋白回收率很低,酶活性低但内毒素去除效果好;多步层析法蛋白回收率高,酶活性高但内毒素去除效果稍差;而本实验室改进的C8反相柱层析-非复性法蛋白回收率稍差,酶活性较好且内毒素去除效果不错.由于C8反相柱层析-非复性法内毒索去除方法简单有效,适合实验室范围内推广.
关键词： 巨噬细胞迁移抑制因子 内毒素 蛋白回收率 酶活性 -
注射用重组人新型白介素-2(欣吉尔)研制和应用
本项目是用基因工程的方法生产新型白介素-2(125A1a),属生物技术领域.产品是肾癌、恶性黑色素瘤、癌性胸腺水等恶性肿瘤的生物治疗制剂.白介素-2作为一种淋巴因子,可提高人体对肿瘤细胞、病毒和细菌等感染的免疫应答,是一种免疫增强剂.项目包括几个部分:①定点突变的基因克隆及高表达菌株的构建;②中试及生产工艺的研究;③临床前药理、药效、毒理学评价;④临床多中心评价;⑤项目的推广应用.项目主要技术关键是克隆125位Cys突变成A1a的人IL-2基因并在大肠杆菌中获稳定、高效表达,特点和技术创新在于菌株125A1a IL-2表达率达30%～50%,定点突变后产品更易于复性且活性蛋白回收率高,比活性、热稳定性增加,体内半衰期延长.
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重组人凝血因子Ⅷ制备工艺中纳米膜的选择
目的 选择适用于重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ,rhFⅧ)制备工艺中的纳米膜.方法 将rhFⅧ收获液Ⅰ(含吐温80)和收获液Ⅱ(不含吐温80)经4种不同型号的滤器(Duropore(R)、Kleenpak(R)、Minisart(R)、Virosart(R) max)进行预过滤,检测样品活性回收率及蛋白回收率.用不同厂家的20 nm孔径纳米膜(Nanol～Nano7)对预过滤样品进行过滤,检测样品的活性回收率、蛋白回收率及过滤通量.以粒径约20 nm的细小病毒(minute virus of mice,MVM)作为指示病毒,对筛选出的纳米膜进行病毒去除验证.结果 确定佳预过滤膜为minisart(R),收获液Ⅰ和收获液Ⅱ的活性收获率分别为87.9％和99.1％,蛋白回收率分别为97.3％和98.2％.确定收获液Ⅰ的佳过滤纳米膜为Nano6,样品活性回收率为100％,蛋白回收率为92.6％,过滤通量为16.44 L/(m2·h);收获液Ⅱ的佳纳米膜为Nano7,样品活性回收率为98％,蛋白回收率为86％,过滤通量为26.54 L/(m2·h).Nano6和Nano7的病毒去除验证均合格.结论 筛选的纳米膜可用于rhFⅧ的产业化生产工艺中.
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牡蛎酶解工艺的研究
目的 获得佳牡蛎蛋白的酶解工艺及以期提高酶解液水解度和蛋白回收率.方法 综合考虑蛋白回收率、水解度和腥、苦味及澄清度,进行佳酶的筛选;正交试验确定酶的佳水解条件;以水解度和蛋白回收丰为指标,研究热处理、超声处理和微波处理对酶解的影响.结果 与结论菠萝蛋白酶比较适合牡蛎蛋白质的水解,其佳条件为:pH6,温度55℃,料水比为1:3,加酶量为800U/g,酶解时间4h,在此条件下酶解产物水解度为29.86%,蛋白回收率为67.55%;热处理、超声处理和微波处理不利于牡蛎蛋白的水解.
