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Progerin作用的伴侣蛋白和核纤层蛋白问的相互作用:在早老症中Mel18与emerin的相互作用
Objective :The Hutchinson-Gilford progeria syndrome (HGPS or progeria) is a childhood disorder with features of premature aging and is caused by mutations in the lamin A gene resulting in the production of an abnormal protein, termed progerin. To investigate the underlying pathogenic mecha-nism, we studied the nuclear co-localization and association of progerin interactive partner proteins (PIPPs) with lamina proteins. Methods:Both wild-type (WT) and progeria fibroblasts were studied by various methods including eonfocal microscopy, immunopreeipitation and Western blot. Results:All PIPPs discovered so-far co-localized with lamin A/C. In addition, the PIPPs were selectively associated with lamina proteins. An increased immunofluorescent staining signal was found for Mel18 in HGPS as com-pared to WT cells. An association of Me118 with emerin was observed in HGPS, but not in WT cells.Conclusion: Based on these findings, we propose that PIPPs, along with associated lamina proteins may form a pathogenic progerin-containing protein complex.
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细胞核成熟mRNA的转运
细胞核内成熟mRNA向胞浆的转运是制约细胞内蛋白质表达的重要环节,该过程由核被膜核苷酸三磷酸酶(NTPase)水解核内三磷酸核苷酸以提供转运所需的能量.目前细胞核mRNA转运的调控,尤其是疾病时mRNA转运的变化尚不清楚.我们观察到,在腹主动脉缩窄性大鼠心肌肥厚模型上,心肌细胞核被膜NTPase活性和mRNA转运均上调,提示mRNA转运水平的提高可能促进了心肌肥厚相关蛋白的表达.24月龄大鼠肝细胞核被膜NTPase活性和mRNA转运均下调,提示机体衰老时蛋白质合成降低与mRNA转运水平降低有关.盲肠穿孔引起的脓毒血症时,大鼠肝细胞核被膜NTPase活性与mRNA转运都呈早期升高、晚期下降的双向变化,这与脓毒血症早期血糖升高的高代谢型变化和晚期血糖降低的低代谢型变化相平行.
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人工合成的固有防御调节肽对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜的影响
目的 探讨不同浓度固有防御调节肽(IDR-1018)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)成熟生物被膜的破坏作用以及对MRSA生物被膜形成的抑制作用.方法 将MRSA以1×105 CFU/ml均匀接种于96孔板,48 h后建成生物被膜模型.给予用胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB)倍比稀释的不同浓度的IDR-1018溶液作为实验组,使其加入细菌悬液后的浓度达到3.75～1000 mg/L.红霉素倍比稀释制成不同浓度梯度的药液后,与低浓度(15 mg/L)IDR-1018联合作为混合组.等量TSB作为空白对照组.24 h时结晶紫染色半定量法,测吸光度(A)值,检测生物被膜的生长情况.采用SPSS 18.0统计软件对数据进行统计分析.结果 与对照组(A595=1.764±0.026)相比较,IDR-1018对成熟的MRSA生物被膜发挥了较为显著的破坏作用,且IDR-1018对生物被膜的影响存在一定的剂量依赖关系,即随着药物浓度的不断降低,其对生物被膜的破坏作用出现了一定幅度的下降.当浓度低至15 mg/L时,A595=0.946±0.047(t=32.955,P<0.01);浓度为7.5 mg/L时,A595=1.211±0.054(t=12.731,P<0.05);浓度为3.75 mg/L时,A595=1.360±0.066(t=4.843,P<0.05),与对照组相比差异仍具有统计学意义.对于尚未成熟的生物被膜,与对照组(A595=1.689±0.068)比较,当浓度低至15 mg/L(A595=0.846±0.057,t=34.127,P<0.01)时,IDR-1018对MRSA生物被膜的形成过程仍具有较为显著的抑制作用;而浓度降至7.5 mg/L(A595=1.402±0.181,t=5.240,P<0.05)时,对生物被膜的抑制作用出现了一定幅度的下降,但与对照组比较差异仍具有统计学意义.浓度为3.75 mg/L(A595=1.631±0.190,t=0.913,P>0.05)时,这种抑制作用出现了较明显的下降.当低浓度(15 mg/L)的IDR-1018和不同浓度的红霉素联合使用时,其对MRSA生物被膜的破坏与抑制作用明显高于单独使用红霉素,亦优于单独使用IDR-1018时的效果.结论 在MRSA生物被膜生成过程中,IDR-1018可以起到较好地抑制作用;对于已经成熟的MRSA生物被膜,IDR-1018可以起到较好地破坏作用.
关键词： 肽类 抗甲氧西林金黄色葡萄球菌 核被膜 -
大鼠心肌肌浆网和核被膜ryanodine受体动力学特性的比较
目的:观察大鼠心肌浆网(sarcoplasmic reticulum, SR)和核被膜(nuclear envelope, NE) ryanodine受体(RyR)与配体结合特点及其蛋白质磷酸化调节.方法:采用差速和等密度梯度离心分离心肌SR和NE,用放射受体分析法研究RyR的特征.结果:NE上存在高亲和力RyR,其大结合(Bmax)为SR RyR的1.7%,解离常数(Kd)为SR的60%.分别用PKA和PKC磷酸化后,SR上该受体的Bmax各增加3.7和1.2倍,而NE上的该受体Bmax各增加2.2和3.1倍,Kd均无显著改变.结论:NE上存在比SR密度低但亲和力高的RyR,能被PKA和PKC激活,而且对PKC较PKA更敏感.
关键词： 心肌 核被膜 肌浆网 Ryanodine受体 磷酸化 -
心肌肥厚大鼠心肌肌浆网和核被膜ryanodine受体变化的研究
目的: 观察心肌肥厚大鼠心肌肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)和核被膜(nuclear e nvelope,NE)的ryanodine受体(RyR)的变化,进一步探讨心肌肥厚发生机制.方法 :采用腹主动脉缩窄术制作心肌肥厚模型.用差速离心和密度梯度离心法分离心肌 SR和NE,用同位素标记配体研究RyR的动力学特征.结果:心肌细胞NE上也存在RyR,其大结合(Bmax)为SR的1/68,而离解常数(Kd)为SR的61%.与假手术组相比,术后4周大鼠心肌显著肥厚,左室重量指数增加44%,左心功能代偿性增加,心肌SR的RyR大结合增加20%,而NE的该受体Bmax则增加1倍,SR与NE的Bmax比值显著降低(P<0.01);Kd与对照组接近.结论:大鼠心肌细胞NE上存在低密度、高亲和RyR,心肌肥厚时心肌SR和NE的RyR均上调,而NE的受体增加幅度更大,这些改变可能参与心肌肥厚时心功能代偿和核反应异常的发生.
关键词： 心肌肥厚 Ryanodine受体 核被膜 肌浆网 -
核被膜蛋白及其抗体的临床意义
自身抗体在风湿免疫性疾病的发生、发展中起着重要作用,对疾病的诊断和预后有指导意义.近年,国外对环型(ring-like pattern)抗核抗体(antinulear antibody,ANA)的研究发现其抗原成分为核被膜蛋白(nuclear envelope protein),并发现其中的抗gp210抗体、抗板层素B受体(lamin B receptor,LBR)抗体对原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)有高度的特异性,特别是对抗线粒体抗体(antimitochondrial antibody,AMA)阴性的PBC患者的诊断具有重要意义.
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败血症大鼠心肌核被膜和肌浆网ryanodine受体的变化
为观察败血症时心肌肌浆网(SR)和核被膜(NE)的ryanodine受体的变化,采用结扎及穿刺盲肠(CLP)制作败血症动物模型,用密度梯度离心分离SR和NE,用放射配体结合法研究ryanodine受体的特征.结果表明,大鼠早期败血症(CLP后9h)时,SR的ryanodine受体的大结合(Bmax)增加23%,NE的ryanodine受体的Bmax则增加1倍,二者比值降低39%(P<0.01); 在晚期败血症(CLP后18h)时,SR ryanodine受体的Bmax降低了38%,NE的ryanodine受体的Bmax增加1.6倍,二者比值降低76%; SR和NE ryanodine受体的离解常数无显著改变.败血症时,SR ryanodine受体早期上调,晚期下调,而NE ryanodine受体均上调,这些变化可能与休克时相有关.
关键词： 败血症 肌浆网 核被膜 Ryanodine受体 -
内皮细胞功能紊乱的跨核被膜调控
一、细胞核被膜的结构和功能真核细胞核被膜(NE)的外层膜与内质网连接,内层膜与核骨架连接,两层之间为核被膜间.两层膜在核孔复合体(NPC)融合.NPC为＞100 MD的超大分子,由100多种不同蛋白成分组成,直径约130 nm.其中央孔道即核孔是已知的细胞胞浆和核浆之间唯一的直接交通通路,所有改变基因表达的细胞信号或核信号都必需通过核孔.静息状态其孔径约9 nm,转运时可达26 nm.＜10 kD的小分子或离子可自由通过核孔转运;对＞70 kD的大分子转运需要被转运分子的核定位序列或信号(NLS)和ATP水解提供能量;对10～70 kD的中等分子的转运不需要NLS和GTP,但与NE间隙的Ca2+贮存和NPC构象密切相关.转录因子向核内转位及与DNA靶序列结合还受磷酸化修饰及其相关激酶的调控.
