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救脑宁注射液对缺氧/缺糖神经细胞凋亡的影响
研究救脑宁注射液对缺氧/缺糖致神经细胞凋亡的影响。采用人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5H)，建立缺氧/缺糖诱导凋亡模型，以流式细胞技术和活细胞荧光双染色法观察凋亡的发生及救脑宁注射液抑制细胞凋亡的作用。结果：缺氧/缺糖培养能诱导神经细胞凋亡，流式细胞仪检测，在G1峰前出现显著的凋亡峰，凋亡率42.99%±7.73%。荧光双染色后，荧光显微镜下观察到凋亡时细胞核染色质凝聚。中大剂量救脑宁注射液能降低细胞凋亡率，与模型组相比差异显著（P<0.01），与神经生长因子组相比差异无统计学意义。结论：救脑宁注射液可抑制缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡，具有神经细胞保护作用。
关键词： 救脑宁注射液 凋亡 神经细胞 人神经母细胞瘤细胞株 -
蕨麻醇提取物对缺氧诱发的神经母细胞瘤细胞损伤效应的拮抗作用
目的 探讨蕨麻醇提取物对硫代硫酸钠(Na2S204)诱发的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞株缺氧损伤的拮抗作用.方法 取处于生长对数期的SH-SY5Y细胞,分别设空白对照(D-Hank液)组、缺氧模型(1 mmol/L连二亚硫酸钠)组及1、0.25、0.062 5g/L蕨麻醇提取物拮抗缺氧(1 mmol/L连二亚硫酸钠)组,于5％ CO2、37 ℃孵育4h后,采用MTT试验检测细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力,采用悬浮芯片蛋白法测定细胞内单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平7种细胞因子水平.结果 与空白对照组比较,缺氧模型组和各剂量蕨麻醇提取物拮抗缺氧组SH-SY5Y细胞活性下降,LDH外漏量和空泡细胞率增大,MCP-1、IL-1β、IFN-γ和TNF-α水平升高,VEGF、IL-6和IL-10含量下降.与缺氧模型组比较,各剂量蕨麻醇提取物拮抗缺氧组细胞活性升高,LDH外漏量和空泡细胞率减少,细胞因子水平发生逆转,其中,MCP-1、IL-6、IFN-γ的改变以1g/L组为明显,IL-1β、IL-10、TNF-α、VEGF的变化以0.062 5 g/L组明显.结论 蕨麻醇提取物可拮抗连二亚硫酸钠所致SH-SY5Y细胞缺氧损伤效应.
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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用
目的 探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法 先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40 μg/ml NaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变.结果 与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡.结论 NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡.
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1-甲基-4-苯基吡啶离子对入神经母细胞瘤细胞株哺乳动物雷帕霉素靶位信号通路的影响
目的 研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞哺乳动物雷帕霉素靶位(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响.方法 体外培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组、MPP+ 0.25 mmol/L组、0.5 mmol/L组及1 mmol/L组,各MPP+组细胞与含相应浓度的MPP-培养24 h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞相对存活率；应用免疫印迹法检测各组细胞中mTOR蛋白、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、mTOR调控相关蛋白(Raptor)、雷帕霉素不敏感的mTOR伴侣蛋白(Rictor)以及与自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、Beclinl蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,各MPP+组细胞相对存活率显著降低(P＜0.05～0.001)；mTOR、p70S6K、Raptor、Rictor表达明显降低(P ＜0.05～0.001);LC3Ⅱ和Beclin1表达显著升高(P ＜0.05～0.001),均呈现出明显的量效关系.结论 MPP+通过抑制细胞中mTOR信号通路,诱导SH-SY5Y细胞自噬性死亡,并且与MPP+的浓度相关；这可能是MPP+导致PD动物模型发病的机制.
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细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在 SH-SY5Y 细胞中的表达
目的：探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在 SH-SY5Y 细胞中的表达及其与泛素表达的定位关系。方法：采用不同浓度的 MG-132蛋白酶体抑制剂（0、0.5、1、2.5和5μmol/L）处理体外培养人神经母细胞瘤细胞株 SH-SY5Y 细胞。处理24 h 后，采用 In-cell Western 法和 Western Blot 法检测 SH-SY5Y 细胞中 CD147蛋白的表达，采用免疫荧光双标法检测 CD147和泛素的共表达。结果：不同浓度的 MG-132蛋白酶体抑制剂处理 SH-SY5Y 细胞，CD147蛋白的含量呈浓度依赖性增加。当抑制剂浓度为5μmol/L 时，CD147的含量明显高于抑制剂浓度为0μmol/L 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。SH-SY5Y 细胞中同时存在 CD147和泛素的表达，而且存在共表达部位。结论：CD147可能通过泛素-蛋白酶体途径降解。
