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鼻咽癌CNE1细胞株中EB病毒LMP1 cNDA的克隆及LMP1胞外段稳定性研究
目的:克隆鼻咽癌细胞株CNE1中EBV-LMP1 cDNA,载入质粒载体pGEM中,并检测CNE1细胞株LMP1胞外肽段表达的稳定性.方法:运用免疫组化的方法检测CNE1细胞潜伏膜蛋白(LMP1)的表达情况,通过RT-PCR技术从CNE1细胞中扩增EBV-LMP1基因全长,并载入质粒载体pGEM,转化JML09菌.提取质粒,利用引物上的BamH1与Hind3酶切位点限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳鉴定.扩增CNE1细胞中含有LMP1三段胞外段的序列并测序.结果:免疫组化显示CNE1细胞高表达LMP1,扩增的LMP1 cDNA长度为1158 bp,测序结果与已知序列有部分变异.连续传代的CNE1细胞LMP1胞外段表达稳定.结论:成功克隆了EBV-LMP1 cDNA,并载入质粒载体,证实LMP1胞外段表达稳定,为研究LMP1在鼻咽癌致病机制中的作用,并进一步研制LMP1胞外段特异性单克隆抗体,为其在鼻咽癌放疗靶区功能显像的研究中奠定基础.
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顺铂增加BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞凋亡
目的:通过对3种不同鼻咽癌细胞的BCL-2蛋白表达、细胞存活率和凋亡率的观察,探讨提高顺铂治疗鼻咽癌疗效的新方法.方法:采用Western blot技术检测3种不同鼻咽癌细胞CNE1、C666-1及SUNE1的BCL-2蛋白的表达情况;采用MTT法及流式细胞技术,检测并比较顺铂对3种鼻咽癌细胞的细胞存活率和凋亡率的影响.结果:BCL-2蛋白在CNE1及C666-1细胞上高表达,在SUNE1上几乎无表达(P＜0.05);经顺铂干预后,CNE1及C666-1细胞的细胞凋亡率明显升高,存活率明显低于对照组(P＜0.05);SUNE1细胞的细胞凋亡作用较弱(P＜0.05).结论:BCL-2蛋白在不同类型的鼻咽癌细胞上表达量不同,提示顺铂对BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞的杀伤作用更强.
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鼻咽癌CNE1细胞株中EB病毒LMP1胞外肽段稳定性的研究
目的 检测鼻咽癌CNE1细胞株潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段表达的稳定性.方法 运用免疫组化的方法检测CNE1细胞LMP1的表达情况,通过RT-PCR技术扩增CNE1细胞中含有LMP1三段胞外段的序列并测序.结果 免疫组化显示CNE1细胞高表达LMP1, 扩增LMP1胞外段的序列并测序,测序结果显示与已知序列相同,连续传代的CNE1细胞LMP1胞外段表达稳定.结论 证实LMP1胞外段表达稳定,为进一步研制LMP1胞外段特异性单克隆抗体,并为其在确定鼻咽癌放疗靶区的功能显像的研究奠定基础.
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pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体的构建及其对人鼻咽癌细胞增殖的影响
目的：构建 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体并观察其对鼻咽癌细胞株 CNE1体外增殖的影响。方法：提取 CNE1细胞中总 RNA，RT －PCR 扩增 NPRL2并克隆至 pEGFP －N1载体，鉴定出阳性克隆送测序，以重组质粒转染 CNE1细胞。通过 Western blot 检测转染细胞中 NPRL2蛋白的表达，CCK －8法检测细胞增殖的变化。结果：成功构建了 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体，Western blot 法检测到 NPRL2蛋白的表达， CCK －8法检测发现 NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖（P ＜0．05）。结论：成功构建 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体并转染至 CNE1细胞，NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖。
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小干扰RNA沉默HIF-1α基因表达对对人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响
目的 探讨CNE1对人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响.方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将HIF-1αsiRNA转染入CNE13细胞中.WB法测定CNE1细胞内HIF-1α的表达.流式细胞仪及Hochest荧光染色测定细胞凋亡率的变化.WB法测定CNE1细胞内BCL-2的表达.结果 干扰HIF-1α能有效地促进CNE1细胞的凋亡,同时可下调BCL-2的表达.结论 体外实验初步证明HIF-1α因在人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡方面扮演重要角色,可通过下调BCL-2的表达来诱导凋亡.
