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糖基化终末产物损伤冠状动脉平滑肌细胞Kv通道
目的 研究糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对大鼠冠状动脉平滑肌细胞电压门控性钾离子(voltage-gated K+,Kv)通道电流的影响.方法 分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞,分为空白对照组、糖基化牛血清白蛋白(AGE-bull serum albumin,AGE-BSA)组、AGE-BSA+抗AGE受体抗体(anti-receptor of AGEs immunoglobulin G,anti-RAGE IgG)组进行干预.采用膜片钳技术检测各组细胞Kv通道电流,采用Western blotting、实时荧光定量PCR方法检测各组细胞Kv1.2和Kv1.5通道蛋白及mRNA的表达.结果 AGE-BSA直接干预冠状动脉平滑肌细胞明显抑制了平滑肌细胞的Kv电流达32.7％,并使Kv1.2和Kv1.5通道蛋白及mRNA的表达明显下调.而给予anti-RAGE IgG预处理30 min后再加入AGE-BSA刺激,平滑肌细胞的Kv电流密度及Kvl.2和Kvi.5通道蛋白及mRNA的表达与空白对照组相比,差异无统计学意义.结论 AGEs通过结合RAGE损伤冠状动脉平滑肌细胞Kv通道.
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不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制
目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制.方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞.采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化.结果:0.01～1.00 μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05) μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00～10.00 μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化.在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 mV条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 μmol/时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P＞0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10 μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P＜ 0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10) μmol/L.结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活.
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二十二碳六稀酸对大鼠冠状动脉平滑肌细胞BKCa单通道的作用
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)大电导钙激活性钾通道(BKca)的影响.方法 采用酶消化法获得大鼠CASMCs,用膜片钳技术以单通道内膜向外模式记录在跨膜电位60 mV下,加入0、10、20、30、40、50、60、70和80μmol/L DHA后,大鼠CASNXs的BKca单通道开放概率(Po)、电流幅度值(Am)、平均开放时间(To)、平均关闭时间(Tc)的变化.结果 在跨膜电位60mV时,当DHA浓度＞10/μmol/L时,BKca通道的Po增大,且呈浓度依赖性,Po从(0.072±0.003)(0 μmol/L DHA,n=6)增至(0.606±0.089)(80μmol/L DHA,μ=10)(P＜0.05),EC50是(36.11±0.08)μmol/L,当DHA浓度＜10μmol/L时,Po增加不明显;加入不同浓度的DHA时,对通道Am及To的作用不明显,通道Tc明显缩短,Tc由(492.91±42.12)ms(0μmol/L DHA,n=6)缩短至(72.39±6.97)ms(80μmol/L DHA,n=10)(P＜0.05).结论 DHA能直接激活BKca通道而产生舒张血管、增加血流量的效应.
关键词： 二十二碳六烯酸 冠状动脉平滑肌细胞 大电导钙激活性钾通道 -
IL-1β对人冠状动脉平滑肌细胞妊娠相关血浆蛋白A分泌的影响
目的 探讨IL-1β对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)分泌妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的影响.方法 培养HCASMC,至第5～7 代时,分别加入20μg/L和0 μ,g/L的IL-1β(0 μg/L组为对照组),分别孵育2、4、8、24、36 h后,收集细胞培养上清液;采用IL-1β(0、5、20、40 μg/L)刺激HCASMC 6 h后分别收集细胞和细胞培养上清液.用ELISA法检测细胞培养上清液内PAPP-A的表达量.结果 IL-1β组PAPP-A表达量在2 h时开始增加,8、24和36 h时其浓度显著高于对照组(P均＜0.05);随着IL-1β剂量增加,PAPP-A的表达量不断升高,其中20 μg/L和40 μg/L组的浓度均显著高于0 μg/L组的浓度(P均＜0.05).结论 IL-1β可使HCASMC分泌PAPP-A增加,并呈时间和剂量依赖性.
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Genistein对大鼠冠状动脉平滑肌细胞BKCa调控机制研究
目的 探讨Genistein对大鼠冠状动脉平滑肌细胞BKCa的调控机制.方法 通过急性酶分离法获取SD大鼠冠状动脉平滑肌细胞,并经由全细胞膜片钳技术分析Genistein对BKCa通道电流的调控机制.结果 电流幅度、通道开放概率、平均开放时间与膜电位相关(P<0.05);有钙外液中行10-5 mol/L Genistein干预后外向电流(+60 mV)为(303.58±70.36)pA,显著高于对照的(173.02±42.68)pA(P<0.05),而无钙外液孵育0.5 h后行Genistein干预后外向电流与对照比较无显著差异(P>0.05);四乙胺+Genistein干预后外向电流(65.32±6.34)pA,显著低于Genistein干预的(303.58±70.36)pA(P<0.05);BAPTA-AM加入后给予Genistein干预,两组外向电流比较无显著差异(P>0.05).结论 大鼠冠状动脉平滑肌细胞BKCa单通道开放概率、电流幅度与膜电位密切相关;Genistein能快速激活BKCa通道,可能与促使内钙释放有关.
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高血压大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的变化
目的 研究在高血压背景下大电导钙激活钾(BK)通道的功能改变及其机制.方法用酶解消化方法分离12～16周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCS),采用膜片钳全细胞模式记录SHR和WKY大鼠CASMCS BK电流,SHR和WKY大鼠BK α亚基和β1亚基mRNA水平用实时定量取聚合酶链式反应和凝胶电泳测定,蛋白水平表达用免疫组化的方法测定.结果 SHR大鼠CASMCS(n=6)BK电流密度比WKY(n=7)高2.03±0.62(P<0.01);在mRNA水平,BK β1亚基表达SHR组明显高于WKY组5.534±1.03倍(n=4,P<0.05),BK α亚基表达则无明显差异(1.266±0.12,n=4,P>0.05 );BK β1亚基和α亚基的表达SHR大鼠高于WKY大鼠.结论 SHR大鼠CASMCS BK电流密度比WKY大鼠增大,在mRNA和蛋白水平上BK β1亚基表达也比WKY大鼠增强,这种变化可能是机体在高血压时自我调节的结果.
