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CXCR4及NDRG1蛋白在前列腺癌中的表达及其与侵袭转移的相关性分析
目的 探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)及N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)在前列腺癌组织及细胞系中的表达情况,明确其与前列腺癌恶性程度及转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测CXCR4蛋白在前列腺癌(46例)、良性前列腺增生(15例)及正常前列腺组织(10例)中的表达,分析其与前列腺癌病理分级及转移的关系.免疫印迹(Westem blotting)法检测不同前列腺癌细胞系中CXCR4及磷酸化NDRGl (pNDRG1)表达差异.结果 免疫组织化学检测发现CXCR4蛋白在前列腺癌组织(30例)中过度表达,表达率为65.2％,其表达水平与前列腺癌病理分级及Gleason评分无显著相关性(P =0.081),而CXCR4蛋白表达与肿瘤转移密切相关,前列腺癌转移患者表达率明显高于无转移患者,差异有统计学意义(P=0.002).Western blotting法检测在正常前列腺上皮细胞和不同前列腺癌细胞系中CXCR4及NDRG1蛋白表达不同,高转移潜能的去势抵抗前列腺癌细胞(PC3和DU145)中CXCR4表达较高,而作为转移抑制因子的pNDRG1表达则明显降低.结论 趋化因子受体CXCR4及转移抑制因子NDRG1可能参与调控前列腺癌的进展和转移,对前列腺癌的临床诊断和治疗有重要价值.
关键词： 前列腺癌 趋化因子受体4 N-myc下游调节基因1 转移 -
绿原酸抑制结肠癌HCT116细胞的机制研究
目的 探讨绿原酸对结肠癌HCT116细胞抑制作用的机制.方法 以绿原酸处理HCT116细胞,未处理组为对照组,通过基因表达谱芯片筛选出处理前后的差异表达基因,应用Real-time PCR技术对胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT1)、雄性性别决定基因相关高迁移率族盒基因(SOX4)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)4个基因进行验证,Western blotting法检测上调基因中NDRG1的蛋白表达水平.结果 基因表达谱芯片检测表明,经绿原酸处理后的结肠癌细胞中表达上调的基因为161个(差异倍数大于2),表达下调的基因为64个(差异倍数小于0.5).这些基因主要涉及细胞信号转导、生物过程、细胞组分等功能.Real-time PCR检测证实IGFBP3、NDRG1基因经绿原酸处理后表达明显上调(P＜0.05).Western blotting检测表明,经绿原酸处理后NDRG1基因的蛋白表达水平上调.结论 基因表达谱芯片结合Real-time PCR技术筛选出绿原酸处理后的差异表达基因,为揭示绿原酸抑制结肠癌细胞的作用机制提供依据.
关键词： 绿原酸 结肠癌 HCT116细胞 基因表达谱芯片 N-myc下游调节基因1 -
行为学干预对血管性痴呆大鼠神经再生及脑组织N－myc下游调节基因1蛋白表达的影响
目的：探讨不同干预方法对血管性痴呆（VD）大鼠神经再生及脑组织 N－myc 下游调节基因1（NDRG1）蛋白表达的影响。方法雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组，模型组，训练组，bFGF 组。采用两血管阻断加硝普钠降压法制作大鼠 VD 动物模型，用 HE、TTC 染色法和免疫组织化学方法检测海马组织 NDRG1蛋白的表达及穿梭箱训练和 bFGF 的干预作用。结果脑缺血再灌注第7天缺血海马神经元 NDRG1阳性细胞明显增多，且随缺血再灌注时间的延长逐渐增多，第21天达高峰。应用穿梭箱训练和 bFGF 的干预后 NDRG1阳性细胞明显增加。结论穿梭箱训练和bFGF 促进神经再生作用可能由 NDRG1信号介导。
关键词： 行为学训练 N-myc下游调节基因1 神经再生 增殖 -
N-myc下游调节基因1在乳腺癌中表达的临床病理意义
目的:搛讨N-myc下游调节基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)在乳腺癌中表达.方法:收集乳腺癌病例及相应的临床资料包括随访资料,应用免疫组织化学技术检测良性病变(BBD)47例,无淋巴结转移乳腺癌(NMBC)83例,有淋巴结转移乳腺癌(MBC)107例及配对淋巴结转移灶(PLNM)107例中NDRG1的表达,分析NDRG1表达与乳腺癌临床病理指标间(患者年龄、肿块大小、临床分期、组织学类型和分级、淋巴结转移、雌孕激素受体和c-erbB2水平、绝经史)及生存状态的关系.结果:通过免疫组化技术检测乳腺癌中NDRG1的表达,结果显示阳性表达率分别为BBD(95.7％,45/47),NMBC(96.4％,80/83),MBC(98.1％,105/107),PMLN(90.7％,97/107),MBC组织中NDRG1阳性表达率显著高于PMLN中阳性表达率(P =0.021).NDRG1与组织学分级相关(P =0.041),即分化越差的癌表达NDRG1越强.NDRG1的表达状态与乳腺癌患者的生存预后无显著性相关(P=0.196).结论:NDRG1表达与乳腺癌淋巴结转移和分化有一定关系.
关键词： N-myc下游调节基因1 乳腺癌 临床病理 -
PTEN、HIF-1α和NDRG1在子宫内膜样腺癌中的表达和相关性研究
目的 探讨PTEN、HIF-1α和NDRG1蛋白的异常表达在子宫内膜样腺癌发生、侵袭和转移中的作用及意义.方法 采用免疫组织化学方法,结合组织芯片技术,检测124例Ⅰ型子宫内膜癌、28例内膜不典型增生、35例正常内膜组织中PTEN、HIF-1α和NDRG1的表达水平,结合临床病理因素进行分析.结果 PTEN、HIF-1α和NDRG1在子宫内膜样腺癌中的阳性表达率分别为29.8%、61.3%、52.4%,与正常内膜组和不典型增生组比较,差异有统计学意义(P<0.01).PTEN表达下调和NDRG1过度表达与肿瘤分化程度明显相关(P<0.05),HIF-1α蛋白表达与肿瘤分化、肌层浸润和淋巴结转移明显相关(P<0.05).子宫内膜样腺癌组织中PTEN和HIF-1α和NDRG1的表达存在负相关关系(r=-0.314,P<0.01,r=-0.296,P=0.001),而HIF-1α蛋白与NDRG1的表达正相关(r=0.237,P=0.008).结论 PTEN缺失可能上调HIF-1α和NDRG1蛋白的表达,在子宫内膜样腺癌发生、侵袭和转移中起重要作用,联合检测对于判断子宫内膜癌的恶性程度和预后有重要意义.
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上调NDRG1基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响
目的:建立稳定转染N-myc下游调节基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)的A549细胞株,探讨NDRG1对A549细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:经脂质体介导将含有NDRG1的重组表达质粒转染人肺腺癌A549细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹鉴定;qRT-PCR和蛋白质印迹检测阳性细胞克隆P21及鼠双微体基因2(murine doubleminute 2,MDM2)的表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测阳性细胞克隆凋亡率.结果:成功建立高表达NDRG1的阳性A549细胞克隆(N11);N11细胞P21表达及细胞凋亡率显著增高(P＜0.05),而MDM2表达及细胞增殖显著降低(P＜0.05).结论:上调A549细胞NDRG1表达后,细胞凋亡增加而细胞增殖降低,其作用机制可能与P21表达增高而MDM2表达降低有关.
关键词： N-myc下游调节基因1 p21 鼠双微体基因2 细胞增殖 细胞凋亡 -
转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响
目的:通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制.方法:经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定；蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变；噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性.结果:成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆(N-12),并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低.结论:NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用.
关键词： N-myc下游调节基因1 环氧合酶-2 血管内皮生长因子 细胞增殖 人宫颈癌细胞 -
NDRG1、P21及VEGF在肺腺癌组织中的表达及临床意义
目的:观察N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene1,NDRG1)、P21及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在肺腺癌中的表达及在肺腺癌发生、发展中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学法检测20例正常肺组织和94例肺腺癌组织中NDRG1、P21及VEGF蛋白的表达情况,并分析三者表达与临床病理参数及患者预后的相关性.结果:在正常肺组织及肺腺癌组织中,NDRG1阳性率分别为90.0％ (18/20)和52.1％ (49/94),P21阳性率分别为80.0％ (16/20)和33.0％ (31/94),VEGF阳性率分别为20.0％ (4/20)和53.2％ (50/94),3种蛋白阳性率比较差异均具有统计学意义(P均＜0.05).肺腺癌组织中NDRG1、P21及VEGF的表达与肺腺癌患者年龄、性别、组织分化程度及TNM分期均无相关性(P均＞0.05),而与淋巴结转移明显相关(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,NDRG1、P21和VEGF表达与生存明显相关(P均＜0.01).结论:肺腺癌组织中NDRG1和P21表达下调,而VEGF表达上调,联合检测三者的表达可能对判断预后具有重要价值.
关键词： 肺腺癌 N-myc下游调节基因1 p21 血管内皮生长因子 -
LSD1、NDRG1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响及两者的关系
目的 观察赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响,并探讨两者的作用关系.方法 取人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA方法建立诱导型干扰LSD1的SKOV3细胞株(LSD1-shRNA-SKOV3),将其分为对照组、Dox组、转染组和联合组.对照组用水处理,Dox组用100 ng/mL Dox处理,转染组转染NDRG1 siRNA,联合组转染NDRG1 siRNA的同时加入100 ng/mL Dox处理.采用实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测4组LSD1、NDRG1基因mRNA和蛋白表达;染色质免疫沉淀ChIP法和实时荧光定量PCR法分析对照组和Dox组NDRG1基因启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)程度;Transwell小室测算4组细胞迁移率.结果 Dox组、转染组、联合组、对照组LSD1 mRNA表达分别为0.407±0.029、0.936±0.024、0.413±0.018、0.941±0.035,蛋白表达分别为0.306±0.013、0.879±0.036、0.341±0.057、0.893±0.052,Dox组、联合组与对照组相比,P均<0.05.Dox组、转染组、联合组、对照组NDRG1 mRNA表达分别为0.791±0.045、0.107±0.016、0.165±0.021、0.239±0.027,蛋白表达分别为0.907±0.005、0.130±0.006、0.216±0.019、0.358±0.062,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05.Dox组、对照组细胞NDRG1基因启动子区H3K4me2水平分别为3.32±0.41、0.83±0.17,两组相比P<0.01.Dox组、转染组、联合组、对照组细胞迁移率分别为21.75%±1.816%、79.13%±2.561%、40.13%±2.039%、68.91%±3.167%,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05.结论 LSD1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力降低,NDRG1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力升高;LSD1通过降低NDRG1基因启动子区域H3K4me2水平,抑制NDRG1的表达,从而促进卵巢癌SKOV3细胞转移.
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三叶因子2和N-myc下游调节基因1在不同子宫内膜组织中的表达
目的 探讨三叶因子2(TFF2)和N-myc下游调节基因1(NDRG1)在不同子宫内膜组织中的表达,为早期诊断子宫内膜癌提供新的生物学指标.方法 收集珠海市人民医院经手术切除并经病理检查确诊为子宫内膜癌组织157例,另选择同期经手术切除并经病理检查确诊的子宫内膜不典型增生组织30例及其他病因手术切除的正常子宫内膜20例,分别检测其TFF2和NDRG1蛋白的表达情况,并分析TFF2和NDRG1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系.结果 与正常子宫内膜和子宫内膜不典型增生组织比较,TFF2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著降低(P＜0.05),但NDRG1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著升高(P＜0.01).TFF2在Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05);高、中分化子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著高于低分化组织及其他类型(P＜0.01).与深肌层浸润的子宫内膜癌比较,浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高(P＜0.05);与有淋巴结转移的子宫内膜癌比较,无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高(P＜0.01).而高、中度分化的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于低分化及其他类型(P＜0.05).浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于深肌层浸润(P＜0.01),与无淋巴结转移的子宫内膜癌比较,有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著升高(P＜0.01).结论 在子宫内膜组织中,TFF2表达的缺失及NDRG1蛋白的高表达可能与子宫内膜癌的发生发展有重要关系,有望在子宫内膜癌的早期诊断、判断是否存在侵袭转移等临床评估中发挥作用.
关键词： 子宫内膜癌 三叶因子2 N-myc下游调节基因1 -
增殖细胞核抗原和细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1在乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1(NDRG1)在乳腺癌中的表达.方法 选择乳腺手术切除标本90例进行切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测45例乳腺癌组织、23例乳腺增生组织、22例癌旁正常乳腺组织中PCNA和NDRG1蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌生物学行为的关系.结果 PCNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为36.3％、62.5％和88.9％,PCNA在癌旁正常乳腺组织中的表达明显低于乳腺增生组织(P＜0.05)和乳腺癌组织(P＜0.05).NDRG1在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为63.6％、30.4％和15.5％,NDRG1在癌旁正常乳腺组织中的表达明显高于乳腺增生组织(P＜0.05)和乳腺癌组织(P＜0.05).PCNA与NDRG1表达呈负相关(r=-0.679,P＜0.05).结论 PCNA与NDRG1共同参与乳腺癌的发生与发展,联合检测PCNA和NDRG1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度.
关键词： 乳腺癌 增殖细胞核抗原 N-myc下游调节基因1 -
沉默DNA甲基转移酶上调N-myc下游调节基因1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响
目的 观察小于扰RNA(siRNAs)沉默DNA甲基转移酶(DNMTs)上调N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响.方法 使用siRNAs分别抑制DU145细胞中DNMT1、DNMT3b及DNMT1+ DNMT3b的表达;使用Western blot、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达改变;通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、Muse凋亡检测仪、划痕实验和Transwell侵袭实验,检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的改变;筛选上述改变显著组DU145细胞,抑制细胞中NDRG1表达,再次检测上述细胞生物学行为.结果 Western blot及RT-qPCR结果显示,与对照组比较,DNMT1抑制组、DNMT3b抑制组及联合抑制组的NDRG1 mRNA(1.59±0.03,1.23±0.01,1.36±0.11比0.90±0.15,1.00±0.03)和蛋白(1.07 ±0.16,0.49 ±0.01,0.92±0.09比0.23 ±0.04,0.30±0.07)表达显著增加(P＜0.05).CCK-8结果显示,在24、48、72 h,DNMT1抑制组吸光度(A)值为0.189±0.030、0.266±0.048、0.419±0.058:DNMT3b抑制组为0.221±0.023、0.318 ±0.072、0.498±0.064;联合抑制组为0.199±0.021、0.284±0.062、0.488±0.091,与对照组比较,显著减少(P＜0.05).凋亡检测结果显示,DNMT1抑制组凋亡率为(22.40±1.36)％、DNMT3b抑制组为(14.20±0.80)％、联合抑制组为(17.60±0.74)％,与对照组比较,显著增加(P＜0.05).划痕实验结果显示,DNMT1抑制组划痕面积愈合率为(53.01±3.22)％、DNMT3b抑制组为(70.97±2.12)％、联合抑制组为(63.93±4.42)％,与对照组比较显著减少(P＜0.05).Transwell实验结果显示,DNMT1抑制组侵袭细胞数为(16±3)个、DNMT3b抑制组为(32±5)个、联合抑制组为(20±4)个,与对照组比较,显著减少(P＜0.05).其中,DNMT1抑制组效果显著(P＜0.05),联合抑制未见显著协同效应.与对照组比较,NDRG1-siRNA可显著逆转由DNMT1-siRNA引起的DU145细胞生物学行为改变(P＜0.05).结论 通过抑制DNMT1、DNMT3b在前列腺癌DU145细胞中的表达,可部分恢复NDRG1的表达,并可显著抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,减弱细胞迁移及侵袭能力,其中单独抑制DNMT1效果显著,联合抑制无明显协同效应,提示DNMT1可以成为前列腺癌去甲基化治疗的一个有效靶点.
关键词： N-myc下游调节基因1 DNA甲基化 DNA甲基转移酶 RNA干扰 前列腺癌 -
结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与NDRG1表达的关系
目的 探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与NDRG1的相关性.方法 构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2.1-U6-siRNA并鉴定,采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞,低氧培养24 h,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α、NDRG1 mRNA表达.Western blots检测NDRG1蛋白表达.采用原位杂交技术检测人结直肠腺瘤和腺癌组织中HIF-1α mRNA,应用免疫组织化学方法检测NDRG1蛋白的表达.结果 siRNA从转录水平抑制了HIF-1α基因表达.同时,NDRG1 mRNA、蛋白表达也显著受抑制.结直肠腺癌组织中HIF-1α mRNA阳性表达率为67.7%(42/62),腺瘤为44.4%(8/18).从Dukes A期到Dukes C+D期演变过程中HIF-1α mRNA表达阳性率不断增加(P＜0.05).腺癌组NDRG1阳性表达率显著高于腺瘤组.结直肠腺癌中NDRG1阳性表达与Dukes分期显著相关.HIF-1α与NDRG1均呈正相关(P＜0.05).结论 HIF-1α可能通过上调NDRG1表达参与了结直肠腺的进展.
关键词： 缺氧诱导因子-1α N-myc下游调节基因1 小干扰RNA 结直肠癌 -
NDRG1在宫颈癌中的表达及意义
目的 探讨宫颈癌组织中NDRG1 mRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系.方法 分别采用逆转录酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法(streptavidin-perosidase,SP)法检测20例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN组,分化程度Ⅰ级9例,Ⅱ级8例,Ⅲ级13例)、20例宫颈癌(宫颈鳞状细胞癌)组织中NDRG1 mRNA、蛋白的表达.结果 从正常宫颈鳞状上皮组织到宫颈低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变,直到宫颈鳞癌的发生发展过程中NDRG1蛋白的表达逐渐降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR结果显示NDRG1 mRNA的表达与NDRG1蛋白的表达相一致,即相比正常宫颈鳞状上皮组织,在宫颈鳞癌组织中NDRG1 mRNA的表达显著降低(P＜0.01).结论 NDRG1 mRNA与蛋白在宫颈鳞癌组织中的下调表达提示NDRG1基因可能与宫颈鳞癌的发生发展及转移有关.
关键词： N-myc下游调节基因1 宫颈癌 基因表达 免疫组织化学 -
下调NDRG1表达对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响
目的：探讨NDRG1在胰腺癌细胞中的表达及其与MMP-7的关系。
方法：检测NDRG1与MMP-7蛋白与mRNA在4种胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990）表达；构建靶向NDRG1的干扰质粒siNDRG1，转染PANC-1细胞，检测转染后PANC-1细胞NDRG1与MMP-7蛋白与mRNA的表达，以及增殖与调亡情况。
结果：4种细胞株中均有NDRG1与MMP-7蛋白与mRNA的表达，且两者的表达水平随着细胞分化程度的降低而升高（均P<0.05）；PANC-1细胞转染siNDRG1后，NDRG1与MMP-7的蛋白与mRNA表达均明显降低、细胞增殖明显抑制、凋亡率明显升高（均P<0.05）。
结论：NDRG1的表达与胰腺癌细胞的分化程度密切相关，且可能通过上调MMP-7表达促进胰腺癌细胞的生长。关键词： 胰腺肿瘤 N-myc下游调节基因1 细胞分化 -
上调N-myc下游调节基因1表达对胰腺癌细胞增殖及凋亡的作用
目的 观察磷酸化增强型绿色荧光蛋白-N-myc下游调节基因N3(pEGFP-NDRG1-N3)上调N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达的胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响并探讨其机制.方法 以Westernblot法对PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990细胞中NDRG1表达进行检测;构建过表达质粒pEGFP-NDRG1-N3转染CAPAN-2细胞,以免疫荧光、Western blot法及实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上调效率;采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后细胞增殖;碘化丙啶(PI)法检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 Western blot显示,NDRG1在4组细胞株中均有表达,而在低分化细胞(PANC-1)中的表达量要高于中分化(BXPC-3)及高分化细胞株(CAPAN-2、SW1990)(P＜0.05);免疫荧光显示,pEGFP-NDRG1-N3组荧光细胞数占总细胞数＞70％,NDRG1在蛋白及mRNA水平表达上调;在mRNA水平,NDRG1表达上调后Parp、Cleaved Parp、p-P53、Cleaved-Capase3无改变(t=1.456、1.164、2.914和1.075,P＞0.05).在蛋白水平,Parp表达下调,Cleaved Parp表达上调,p-P53下调,Cleaved-Capase3下调(t=6.104、12.273、3.691和14.227,P ＜0.05);MTT显示,在96和120 h与pEGFP-N3组比较,pEGFP-NDRG1-N3转染后CAPAN-2细胞增殖能力增强(t =8.176和2.246,P＜0.05);PI法显示,转染pEGFP-NDRG1-N3的CAPAN-2细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少,与pEGFP-N3组比较,差异有统计学意义(t=3.651、4.133和3.092,P ＜0.05);pEGFP-NDRG1-N3凋亡低于pEGFP-N3组,差异有统计学意义(t=9.161,P＜0.01).结论 胰腺癌细胞NDRG1表达上调促进胰腺癌细胞增殖,抑制凋亡,促进细胞进入G1期,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.
关键词： N-myc下游调节基因1 胰腺癌 凋亡 细胞周期 -
Egr-1通过上调NDRG1诱导骨髓间充质干细胞成骨分化
目的 探究早期生长因子1(Egr-1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响.方法 采集成年男性骨髓组织,分离培养原代BMSCs并在显微镜下观察其形态,流式细胞术鉴定BMSCs表面标志物;pcDNA3.1/Egr-1转染BM-SCs,MTT检测BMSCs的增殖,茜素红钙染色试剂盒检测细胞基质内钙结节的形成,ALP活性测定试剂盒检测细胞内ALP的活性,实时定量qPCR和Western blot分别检测细胞内EgR-1、Runx2、NDRG1 mRNA和蛋白表达;Egr-1 siRNA转染BMSCs,检测细胞内ALP活性、Egr1、Runx2和NDRG1 mRNA及蛋白表达.结果 离体培养的BMSCs高表达CD90和CD29,而CD34和CD45呈阴性表达;pcDNA3.1/Egr-1转染对BMSCs增殖无明显作用,却能促进细胞基质内钙结节的形成,上调ALP活性和Egr-1、Runx2、NDRG1的表达,而Egr-1 siRNA则作用相反.结论 Egr-1通过上调NDRG1诱导BMSCs的成骨分化.
关键词： 骨质疏松 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 早期生长因子1 N-myc下游调节基因1
