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三种梅毒血清学检测方法的实验室评价
我们采用甲苯胺红不加热血清学实验(TRUST)、梅毒密螺旋体血凝实验(TPHA)和酶联免疫吸附实验(ELISA).对250例患者的血清进行检测,以探讨这三种方法的临床应用价值,报告如下.
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梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达
目的 克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据.方法 PCR法扩增TP0684编码基因.T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定.结果 PCR法扩增出了1 212 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致.转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量约43 000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础.
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梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达
目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白.方法 采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 PCR法扩增出约1 000 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在.经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础.
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酶切与PCR联用合成梅毒抗原TpN17全长DNA及其表达活化和ELISA检测
目的 在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原.用其建立梅毒诊断血清学方法.方法 酶切与PCR联用,合成全长TpN17基因,亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达.亲和层析纯化.纯化rTpN17包被微孔板,ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份阴性血清.结果 获得了重组表达并纯化的TpN17,ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别,特异性100%,灵敏度100%.结论 证明了该重组蛋白具有良好的免疫反应性,可用于梅毒感染的血清学检测.
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国外梅毒重组抗原研究综述
概括叙述了目前国外梅毒重组抗原的研究现状.
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血清梅毒抗体检测方法的临床意义
梅毒的抗体检测主要分为特异性和非特异性梅毒抗体检测.不同抗体检测对于梅毒的诊断和治疗各具有极其重要的价值.本文对当前梅毒抗体的检测方法及其临床应用作一详述.以探讨如何正确地联合使用梅毒抗体检测在梅毒诊断和治疗中的临床应用.
关键词: 梅毒密螺旋体 特异性和非特异性梅毒抗体 诊断 -
梅毒螺旋体TpN17抗原全长表达纯化和ELISA检测
目的 在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原,用其建立梅毒诊断血清学方法.方法 酶切与PCR联用,合成全长TpN17基因,亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达.亲和层析纯化.用纯化的rTpN17包被微孔板,ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份梅毒阴性血清.结果 获得了重组表达并纯化的TpN17,ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别,特异性100%,灵敏度100%.结论 该重组蛋白具有良好的免疫反应性,能鉴别梅毒阳性血清,有望进一步应用于梅毒感染的血清学检测.