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可溶性共刺激分子sCTLA-4和sCD28在SLE病人的表达
目的 探讨T细胞可溶性共刺激分子sCTLA-4和sCD28在SLE病人血清中的表达及与SLE疾病活动的意义.方法 用ELISA法测定所收集的138例活动性或非活动性SLE病人血清中可溶性共刺激分子sCTLA-4和sCD28的含量,评价其与疾病活动的相关性.结果 所有SLE病人血清中sCTLA-4和sCD28浓度分别为5.99(3.10～7.80)ng/ml和6.30(3.46～8.3)ng/ml,均显著高于其对照组2.84(2.25～3.54)和5.2(3.30～7.8)ng/m,血清sCTLA-4浓度与疾病活动指数呈正相关(r=0.32,P=0.004),血清sCTLA-4浓度与sCD28浓度呈正相关(r=0.35,P=0.001).结论 可溶性T细胞共刺激分子sCTLA-4和sCD28在SLE的致病方面具有重要意义,sCTLA-4可能是一功能性受体,其水平有望成为SLE疾病活动的指标之一.
关键词： 系统性红斑狼疮 CD28 细胞毒T细胞相关抗原4 -
CD28:CTLA-4/B7协同刺激分子在脓毒症发病机制中的作用
脓毒症发病机制非常复杂,内容涉及感染、炎症、免疫、凝血及组织损害等一系列基本问题,并与机体多系统、多器官病理生理改变密切相关.T细胞功能失调与脓毒症发病密切相关.CD28:CTLA-4/B7是T细胞重要的协同刺激分子,对调节免疫具有非常重要的作用,可能在脓毒症发生和发展中起着关键作用.
关键词： 脓毒症 CD28 细胞毒T细胞相关抗原4 -
TNF-α对老年COPD患者调节性T细胞CTLA-4表达的影响
目的 研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)上的细胞毒T细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4)在老年COPD急性加重期患者中的表达水平及变化,以及在COPD中,TNF-α对CTLA 4表达的影响.方法 收集成年组(47～64岁)、老年组(65～88岁)COPD急性加重期患者及正常对照组的外周血,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测TNF-α在外周血血清中的含量;用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),抗体孵育后用流式细胞术检测Treg中CTLA-4的比例,RT-qPCR检测外周血单个核细胞中TNF-α mRNA的相对表达量.收集成年COPD患者外周血,以免疫磁珠法分选Treg,加入重组人TNF-α与Treg共培养,Western blot及RT-qPCR检测CTLA 4及其mRNA的表达水平.结果 ELISA检测显示:成年COPD组[0.96 (0.54～1.38)]外周血Treg中的CTLA-4的表达比例较成年对照组[0.01(0.00～0.03)]明显升高(P ＜0.05),而老年COPD组[0.03 (0.01～0.04)]较老年对照组[0.06 (0.04～0.09)]下降(P ＜0.05),老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组却低于成年COPD组(P＜0.05).RT-qPCR检测显示与成年对照组(0.97±0.66)比较,TNF-α在外周血单个核细胞中mRNA的相对表达量在成年COPD组(5.88±1.52)升高(P＜0.05),老年COPD组(12.78±3.50)较老年对照组(3.77±2.72)升高(P＜0.05),而老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组高于成年COPD组(P＜0.05);ELISA检测显示与成年对照组(61.38±22.61)比较,TNF-α在外周血血清中的浓度在成年COPD组(183.78±58.99)升高(P＜0.05),老年COPD组(280.00±67.64)较老年对照组(123.31±36.13)升高(P＜0.05),而老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组高于成年COPD组(P＜0.05).相关关系:在正常对照组中,年龄与外周血血清中TNFα的浓度呈正相关(r=0.673,P＜0.05),而排除年龄因素,成年组FEV1％pred与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=-0.848,P＜0.05),老年组FEV1％ pred与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=0.791,P＜0.05).在COPD患者中,外周血Treg中CTLA 4的比例与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=-0.904,P＜0.05).RT-qPCR检测显示与处理前(1.19±0.25)及对照组(1.02±0.02)比较,Treg中CTLA-4 mRNA的相对表达量在TNF-α处理120 min组(0.34±0.10)下降(P＜0.05),对照组与处理前比较差异无统计学意义(P≥0.05);Westernblot检测显示与处理前(0.50±0.06)及对照组(0.49±0.10)比较,Treg中CTLA-4的含量在TNDα处理120 min组(0.21±0.02)下降(P＜0.05),对照组与处理前比较差异无统计学意义(P≥0.05).结论 COPD急性加重期患者外周血血清中TNF-α的浓度及外周血Treg上CTLA-4的比例升高;重组人TNF-α可能使COPD患者体内CTLA-4的表达减少;炎症机制及细胞免疫机制之间能相互影响,并影响到COPD的发生发展.
关键词： 慢性阻塞性肺疾病 调节性T细胞 肿瘤坏死因子α 细胞毒T细胞相关抗原4 -
基因修饰后树突状细胞吲哚胺2,3二氧化酶表达变化及其对T细胞增殖的影响
背景:研究表明,吲哚胺2,3二氧化酶的表达可以降低机体的免疫应答反应,保护细胞和组织移植物,参与同种异体移植免疫耐受.细胞毒T细胞相关抗原4可以抑制T细胞的活化,在维持周边免疫耐受的过程中起着关键性的作用,但其作用机制尚不清楚.目的:观察转染细胞毒T细胞相关抗原4基因前后树突状细胞上吲哚胺2,3二氧化酶表达水平及其活性对T淋巴细胞增殖的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2005-09/2007-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科实验室和眼科实验室完成.材料:成年雌性Lewis大鼠和F344大鼠购自北京维通利华实验动物种子中心,体质量180～200 g.方法:采用脂质体转染的方法将质粒pG/细胞毒T细胞相关抗原4转入F344大鼠髓源性树突状细胞中,将转染前、转然后24,柏,72 h树突状细胞分为4组,反转录-聚合酶链反应检测转染前后骨髓源树突状细胞中吲哚胺2,3二氧化酶mRNA的表达,反相高效液相色谱法检测吲哚胺2,3二氧化酶活性.以Lewis大鼠T淋巴细胞为反应细胞,丝裂霉素C灭活的转染前后不同时间F344大鼠骨髓源树突状细胞为刺激细胞建立混合淋巴细胞培养体系.有或无L-色氨酸存在下,CCK8试剂盒检测T淋巴细胞增殖率,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡.主要观察指标:①树突状细胞吲哚胺2,3二氧化酶mRNA的表达及吲哚胺2,3二氧化酶活性.②混合淋巴细胞培养CCK8及AnnexinV-FITC细胞凋亡检测结果.结果:转染细胞毒T细胞相关抗原4后树突状细胞中吲哚胺2,3二氧化酶的表达较转染前高(P＜0.01),且转染后48 h树突状细胞的吲哚胺2,3二氧化酶活性高(P＜0.01).高表达吲哚胺2,3二氧化酶的树突状细胞在体外能诱导同种异体T细胞凋亡,抑制T细胞增殖,混合淋巴细胞培养体系中加入L-色氨酸后T淋巴细胞的凋亡率明显下降(P＜0.01).结论:树突状细胞上的吲哚胺2,3二氧化酶表达水平与T淋巴细胞的增殖密切相关,树突状细胞在体外可能通过吲哚胺2,3二氧化酶活性发挥免疫抑制作用.
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尖锐湿疣患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的检测
目的 探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)表型和功能改变所致的细胞免疫抑制效应在尖锐湿疣发病机制中的作用.方法 采用免疫荧光标染技术,经流式细胞仪检测46例尖锐湿疣患者和43例正常人外周血CD4+CD25+T细胞转录因子Foxp3及细胞毒T细胞相关抗原4(CTLA-4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)、程序性死亡1(PD-1)等抑制性膜分子的表达水平.同时,用免疫磁珠细胞分选技术从外周血中分选出高纯度的CD4+CD25+T细胞,经体外刺激后分析胞内分泌白介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)阳性细胞数.结果 尖锐湿疣患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量比正常人对照组显著增加(P＜0.01),CD4+CD25+T细胞表面抑制性膜分子CTLA-4、PD-1表达明显增强(P分别为＜0.05及＜0.01),胞内TGF-β阳性细胞增多(P＜0.001).结论 人乳头瘤病毒感染可诱导CD4+CD25+Treg细胞活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答.
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血复生浸膏对重型再生障碍性贫血患者骨髓T细胞表面CD28和CTLA4表达的影响
目的:研究血复生对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓T细胞表面分化决定簇28(cluster of differentiation 28, CD28)和(或)细胞毒T细胞相关抗原4(cytotoxic T cell antigen 4, CTLA4)表达的影响,探讨血复生治疗AA的作用机制.方法:将2006年6月至2008年6月江苏省中医院血液科门诊及住院的30例重型AA患者随机分为两组,治疗组使用血复生加环孢菌素治疗,对照组单用环孢菌素治疗.10名自愿者骨髓为正常对照组.观察时间为3个月,双色免疫荧光法测定治疗组及对照组治疗前后及正常对照组骨髓T细胞表面CD28、CTLA4表达的变化.结果:AA患者治疗前CD28的水平较正常人显著升高,差异有显著性(P<0.05),CTLA4水平有所上升,但差异无显著性(P>0.05).治疗组及对照组CD28水平较用药前显著下降(P<0.05),治疗组较对照组下降更显著(P<0.05).结论:血复生可增强环孢菌素的免疫调节作用,对AA的治疗起到增效作用.
