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靶向抑制CPEB4对鼻咽癌细胞的影响及放射增敏的机制研究
目的 本研究于2016年3～6月期间探讨靶向抑制CPEB4对鼻咽癌细胞生物学行为以及放射敏感度的影响.方法 利用RNAi技术构建慢病毒载体靶向抑制CPEB4基因的干扰序列;采用CCK-8法绘制CNE-2-shCPEB4、5-8F-shCPEB4、CNE-2及5-8F的生长曲线(增殖能力);采用Transwell法检测CNE-2-shCPEB4、5-8F-shCPEB4迁移能力的改变;采用流式细胞术法检测CNE-2-shCPEB4、5-8F-shCPEB4凋亡率的改变;采用克隆形成实验检测CNE-2-shCPEB4、5-8F-shCPEB4、CNE-2及5-8F细胞的放射敏感度差异.采用Western blot法检测CNE-2-shCPEB4,5-8F-shCPEB4、CNE-2及5-8F细胞EMT相关蛋白表达改变.结果 CNE-2-shCPEB4、5-8F-shCPEB4分别与CNE-2及5-8F对照,增殖速度以及迁移能力减弱;凋亡率无明显改变,放射敏感度增加.Western blot法检测了CPEB4靶向抑制后EMT表型相关蛋白表达改变,结果提示E-cadherin表达上调,slug、snail以及vimentin的表达下调相关,推测靶向抑制CPEB4后鼻咽癌放射敏感度增强可能与EMT相关蛋白及因子的表达改变相关.结论 靶向抑制CPEB4蛋白表达后,鼻咽癌细胞系的增殖能力、体外迁移能力显著减弱,放射敏感度明显增强,其机制可能与CPEB4抑制EMT表型相关,E-cadherin表达上调,vimentin表达下调,E-cadherin表达上调可能与抑制E-cadherin表达的转录因子slug、snail表达下调相关.
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CPEB4在非小细胞肺癌中表达及其对预后的预测价值
目的:胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)是胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白家族之一,与多种肿瘤发生发展密切相关,但在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的研究相对较少.方法:收集2007年6月至2012年12月郑州大学附属洛阳中心医院实施肺癌根治术102例患者临床病理资料.实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织及细胞株中CPEB4 mRNA的表达,Western blot检测CPEB4在组织及细胞株中蛋白的表达,免疫组织化学法检测NSCLC患者石蜡标本中蛋白的表达.进一步分析CPEB4与NSCLC患者临床病理因素及预后的关系.结果:CPEB4 mRNA和蛋白(P<0.05)在NSCLC细胞株H322,H1975和A549表达明显高于WI-38正常肺细胞株,同时CPEB4 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)在肺癌组织中高于邻近正常肺组织.免疫组织化学法检测CPEB4阳性表达率为38.2%.相关分析显示N分期为CPEB4表达的独立相关因素.预后生存分析结果显示T、N分期和CPEB4表达与本组NSCLC患者预后密切相关.结论:CPEB4在NSCLC患者中高表达,并且与预后密切相关,可作为潜在靶点.
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胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4调控NOTCH信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响
探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4 (cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)调控NOTCH信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响.收集人脑胶质瘤组织及对应的瘤旁组织,Western blotting检测组织中CPEB4蛋白水平.以人脑胶质瘤细胞U87为研究对象,通过细胞转染的方法将CPEB4小干扰RNA(CPEB4 siRNA)和对照小干扰RNA(siRNA control)转染至U87细胞中,同时设置对照组,对照组细胞中只加入转染试剂.Westem blotting检测细胞中CPEB4水平.流式细胞仪检测细胞凋亡情况.Western blotting检测NOTCH1受体胞内段基因NICD1、NOTCH2受体胞内段基因NICD2、NOTCH通路下游靶基因HES1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Cleaved Caspase-3)蛋白水平.人脑胶质瘤细胞经20 μmol/L的NOTCH信号通路抑制剂S2188作用48 h后,检测细胞凋亡及NICD1、NICD2、HES1、Cleaved Caspase-3蛋白水平.人脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白水平明显高于瘤旁组织(P＜0.01).siRNAcontrol组细胞中CPEB4、NICD1、NICD2、HES1、Cleaved Caspase-3蛋白水平和细胞凋亡率与对照组相比没有明显变化(P＞0.05).CPEB4 siRNA组细胞中CPEB4水平明显低于对照组(P＜0.01).CPEB4 siRNA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.01).CPEB4 siRNA组细胞中NICD1、NICD2、HES1蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.01).NOTCH信号通路抑制剂作用后的人脑胶质瘤细胞凋亡情况同CPEB4siRNA组一样.由此可知CPEB4在人脑胶质瘤组织中表达上调,抑制CPEB4的表达能够促进人脑胶质瘤细胞凋亡,其作用机制与NOTCH信号通路有关.
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CPEB4对脑胶质瘤细胞增殖、迁移的影响
目的:探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(CPEB4)对脑胶质瘤细胞增殖、迁移的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法检测40例脑胶质瘤组织及对应的癌旁正常组织中CPEB4 mRNA的表达水平.分别将CPEB4 siRNA及无义siRNA转染至脑胶质瘤细胞U87中,Western blot法检测细胞中CPEB4、MMP-9、MMP-2、STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白的表达水平,MTT法检测细胞存活率,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,以未处理细胞作对照.使用50μmol/L特异性JAK2抑制剂AG490作用于转染CPEB4 siRNA的U87细胞48 h后,检测细胞存活率及迁移距离,以未处理细胞和AG490处理的U87细胞作对照.结果:脑胶质瘤组织中CPEB4 mRNA表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05).与对照组及无义siRNA组相比,CPEB4 siRNA组细胞CPEB4蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞存活率、迁移距离降低(P<0.05),MMP-9、MMP-2、STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表达水平下降(P<0.05).与对照组相比,AG490组与AG490+CPEB4 siRNA组细胞存活率和迁移距离均降低(P<0.05);与AG490组相比,AG490+CPEB4 siRNA组细胞存活率与迁移距离降低(P<0.05).结论:CPEB4在脑胶质瘤组织中高表达,可能通过上调JAK/STAT3信号通路促进脑胶质瘤细胞的增殖与迁移.
关键词： 脑胶质瘤 CPEB4 增殖 迁移 JAK/STAT3信号通路 -
人脑胶质瘤组织中 CPEB4的表达及与细胞迁移和侵袭的关系
目的：探讨CPEB4在人脑胶质瘤组织中的表达及其与细胞迁移和侵袭能力的关系。方法：收集30例人脑胶质瘤患者的新鲜胶质瘤组织和瘤旁正常组织标本，应用Western blot法检测CPEB4的表达；分析CPEB4表达与患者临床病理特征的关系；分别应用siRNA基因干扰系统和质粒过表达系统下调和上调人脑胶质瘤细胞SKMG-4和T98中CPEB4表达；应用Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力；应用Western blot检测差异表达CPEB4后MMP2和MMP9的表达。结果：30例患者中，22例患者的胶质瘤组织中CPEB4表达高于瘤旁正常组织；CPEB4在脑胶质瘤组织中的高表达与KPS评分和病理分级有关（P＜0．05）；下调SKMG-4细胞CPEB4表达后，siCPEB4＃2组迁移细胞数和侵袭细胞数均高于siControl组（P＜0．001），且MMP2和MMP9表达降低；上调T98细胞CPEB4表达后，CPEB4过表达组迁移细胞数和侵袭细胞数均低于对照组（P＜0．05），且MMP2和MMP9表达增高。结论：CPEB4在脑胶质瘤组织中呈高表达；CPEB4可通过调控MMP2和MMP9表达影响脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。
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CPEB4和VEGF-C在胃癌中的表达及其临床意义
目的:分析胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)在胃癌中的表达及其与临床病理因素及预后的关系.方法:Western印迹检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中蛋白的表达,免疫组织化学分析胃癌石蜡标本蛋白的表达,运用统计学方法研究蛋白表达与胃癌临床病理的相关性.运用相关分析分析蛋白表达与临床相关性,Log-rank单因素分析和Cox多因素分析对预后进行分析.结果:Western印迹检测CPEB4和VEGF-C蛋白在GES-1胃黏膜细胞株相对表达量明显低于HGC-27,SGC7901和MGC803胃癌细胞株,差异具有统计学意义(P<0.05).CPEB4阳性表达率为55.0%,VEGF-C阳性表达率为41.4%;相关分析显示肿瘤大小、肿瘤部位和T分期与CPEB4表达相关,肿瘤大小和N分期与VEGF-C表达密切相关,预后生存Cox多因素分析结果显示分化程度、淋巴结转移N分期、CPEB4表达与VEGF-C表达是胃癌患者的独立预后因素.结论:CPEB4和VEGF-C表达在胃癌的侵袭中起重要作用,其表达为胃癌预后独立因素,可作为胃癌预后指标.
