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砷甲基转移酶与亚砷酸治疗急性早幼粒细胞白血病关系研究进展
急性早幼粒细胞白血病曾经是预后差的急性髓细胞白血病中的一种,应用亚砷酸治疗初发及复发难治急性早幼粒细胞白血病均已经取得了非常好的效果,且得到了国内外学者的认可,越来越多的学者开始研究亚砷酸在人体内的代谢过程、代谢相关酶——砷甲基转移酶及砷甲基转移酶与亚砷酸疗效和不良反应的关系,本文将对目前这些研究进展进行综述.
关键词： 亚砷酸 急性早幼粒细胞白血病 砷甲基转移酶 砷代谢 -
不同价态砷对DNA和砷甲基转移酶的影响
目的 观察不同价态、不同剂量砷染毒大鼠肝脏中DNA甲基转移酶和砷甲基转移酶mRNA的表达情况,寻找两者间的相关性及不同价态砷(iAs3+和iAs5+)体内甲基化间的差异.方法 将35只健康清洁级Wistar雄性大鼠按体重随机分为7组,分别为正常对照(去离子水)组和低剂量(1/45 LD50,2.33 mg/kg)、中剂量(1/15 LD5o,6.67 mg/kg)、高剂量(1/5LD50,20.00 mg/kg)砷酸氢钠(iAs5+)染毒组以及低剂量(2.33 mg/kg)、中剂量(6.67 mg/kg)、高剂量(20.00 mg/kg)亚砷酸钠(iAs3+)组,每组5只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒90 d.采用实时荧光定量PCR法测定肝脏中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)和砷甲基转移酶(As3MT) mRNA的表达情况.结果 与对照组相比,各染毒组大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量较高,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量较低,高、低剂量亚砷酸钠染毒组和高剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1mRNA的表达量均较高,中剂量亚砷酸钠染毒组和低剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1mRNA的表达量均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈上升趋势,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量呈下降趋势；随着砷酸氢钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈下降趋势,DNMT3A、DNMT3B、DNMT1mRNA的表达量呈上升趋势.As3MT的表达量与DNMT3A和DNMT3B表达量呈负相关(P＜0.01)；与DNMT1表达量无相关关系(P＞0.01).结论 长期亚慢性暴露iAs3+和iAs5均可促进As3MT的表达,抑制DNMT3A及DNMT3B的表达,但iAs3+和iAs5+间在剂量-效应关系上呈反向性；机体As3MT表达上调与DNMT3A和DNMT3B表达抑制间具有协同效应,并可导致基因低甲基化.
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三价砷甲基转移酶基因在 UROtsa 细胞系的转导及表达研究
目的：构建人源三价砷甲基转移酶（ AS3MT）的基因逆转录病毒表达载体，转导UROtsa细胞，建立稳定表达的细胞系。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR），从人源HEK293细胞基因库中扩增出AS3MT基因，将AS3MT基因克隆到逆转录病毒表达载体pRetroX－IRES－ZsGreen1中，经病毒包装后，转导UROtsa细胞，荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，采用流式细胞仪筛选阳性克隆，半定量RT－PCR法检测AS3MT mRNA表达水平，免疫印迹法检测AS3MT蛋白表达水平。结果经RT－PCR扩增AS3MT基因、限制性双酶切及基因测序鉴定，证实AS3MT基因正确插入逆转录病毒表达载体。以该载体转染病毒包装细胞RetroPack PT67后获得的病毒液滴度＞106 cfu／mL。将病毒转导UROtsa细胞，转导效率达50．00％。经3次流式细胞分选仪筛选，获得成功转染并稳定表达GFP的URO－RetroX－AS3MT细胞株；半定量RT－PCR和免疫印迹检测结果均表明所转导的AS3MT基因在UROtsa细胞中成功表达。结论成功构建能高水平稳定表达AS3MT基因的UROtsa细胞系，为研究AS3MT在砷的代谢、毒性和致癌性中的作用机制奠定基础。
