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病毒转导文献资料
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三价砷甲基转移酶基因在 UROtsa 细胞系的转导及表达研究
目的：构建人源三价砷甲基转移酶（ AS3MT）的基因逆转录病毒表达载体，转导UROtsa细胞，建立稳定表达的细胞系。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR），从人源HEK293细胞基因库中扩增出AS3MT基因，将AS3MT基因克隆到逆转录病毒表达载体pRetroX－IRES－ZsGreen1中，经病毒包装后，转导UROtsa细胞，荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，采用流式细胞仪筛选阳性克隆，半定量RT－PCR法检测AS3MT mRNA表达水平，免疫印迹法检测AS3MT蛋白表达水平。结果经RT－PCR扩增AS3MT基因、限制性双酶切及基因测序鉴定，证实AS3MT基因正确插入逆转录病毒表达载体。以该载体转染病毒包装细胞RetroPack PT67后获得的病毒液滴度＞106 cfu／mL。将病毒转导UROtsa细胞，转导效率达50．00％。经3次流式细胞分选仪筛选，获得成功转染并稳定表达GFP的URO－RetroX－AS3MT细胞株；半定量RT－PCR和免疫印迹检测结果均表明所转导的AS3MT基因在UROtsa细胞中成功表达。结论成功构建能高水平稳定表达AS3MT基因的UROtsa细胞系，为研究AS3MT在砷的代谢、毒性和致癌性中的作用机制奠定基础。
