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宁夏回族自治区2000年医药卫生科研进展
一、基础医学1.寄生虫病学:包虫病是一种人兽共患性寄生虫病,是我自治区南部山区的多发病、地方病.为研究探索一种既具有临床早期准确诊断价值又简便易行可供普查及基层使用的诊断方法,宁夏医学院的王兰珍老师通过对斑点免疫结合试验(DIBA)诊断泡球蚴病的应用研究,在ELISA方法的基础上,经过改进,使之较目前公认的诊断包虫病的ELISA法具有相同的高特异性和灵敏度外,还具有稳定性好,使试验时间缩短至2小时,更经济实用方便;为进一步解决抗原试剂制备中人棘球蚴液来源缺乏的问题,又对人源棘球蚴液与动物源棘球蚴液间在检测泡球蚴病人血清抗体的敏感性和特异性方面进行了比较研究.
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应用RAPD技术分析52株肺炎克雷伯氏菌DNA多态性
肺炎克雷伯氏菌是一种能引起严重的医院内感染,且能迅速流行的条件致病菌.用传统方法对其分型存在分型不完全、重复性不佳、分辨力差、结果解释不可靠及试剂制备困难等缺点.作者采用90年代发展起来的RAPD(randomly amplified polymorphic DNA)技术对52株该菌进行分型,获得有意义的结果.现报告如下.
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提高龙心素活性测定的重复性
龙心素是采用地龙为原料,用生物技术加工而成抗心脑血管疾病的药物.其质量标准(滇Q/WS1112-1995)采用龙心素溶液点样于纤维蛋白板上产生溶斑的大小测定其活性,此法重复性较差.＃1标准中方法的局限性1.1标准法中所用试剂质量标准规定,取已消毒的培养皿2只,分别加入2 mg@ml-1的纤维蛋白质溶液10ml,快速加入凝血酶溶液(每1 ml含牛凝血酶40单位)0.5ml,混匀、室温静置10 min,即成纤维蛋白板.方法中不同批号的纤维蛋白原试剂所含可凝蛋白的量不等,可凝蛋白量高的纤维蛋白原试剂制备成纤维蛋白板测试的溶斑明显小于可凝固蛋白量低的纤维蛋白原试剂制备成纤维蛋白板测试的溶斑.但不同批号纤维白原试剂含可凝蛋白不一致,以纤维蛋白原为定量依据会使制成的纤维蛋白浓度不一致而导致活性测定的重复性差.另外标准未对培养皿的尺寸作出规定,采用不同规格的培养皿也会导致测定结果的差异.
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成熟心肌细胞的培养技术
成熟心肌细胞的培养,首先要成功地无菌分离成熟的心肌细胞,这比单纯地分离成熟心肌细胞或单纯地培养胚胎期和新生期心肌细胞较困难.一般可作典型的Langandorff装置,配合无菌操作要求来得到用于培养的无菌成熟心肌细胞.实验动物等都经消毒灭菌,分离仪器保存在分层的通风橱中,以免在分离过程上空气传播的污染物污染溶液.其它预防污染的方法有:①用70%酒精彻底清洗分离装置,用无菌去离子水冲洗,在心脏灌流之前至少要进行两次冲洗;②在即将开始分离之前,对易于拆卸的装置进行灭菌,然后重新装好.分离用灌流液、酶液、保存液及培养液均用纯水和高浓度试剂制备,并经过常规灭菌.所有器械及操作均需无菌,若培养物遭受微生物感染,培养基中的pH平衡也会破坏,还可能产生对心肌细胞有害的活性物质.如细菌感染,可向培养基中加入抗生素,但由于真菌对心肌细胞的高度毒性,处理真菌或酵母污染,应以预防为主.
