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Ndfip1对Mpp+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的 探讨Ndfip1对MPP+(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)诱导的帕金森病(Pkarkinson's disease,PD)细胞模型(人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞)的保护作用.方法 利用已建立好的Ndfip1内源性表达(野生型,WT-SY5Y)、过表达(4HT诱导,SY5Y-N)、显性负表达(显性负载体,SY5Y-D)及抑制表达(Ndfip1 shRNA载体瞬时转染,SY5Y-Ⅰ)四种不同SH-SY5Y细胞模型,采用Mpp+诱导上述细胞形成PD细胞模型,利用MTT法在酶联免疫检测仪上测量OD490吸光值以计算细胞的存活率,采用Annexin V凋亡检测试剂盒和流式细胞仪测定细胞的凋亡率.结果 0.3 mmol/L浓度的Mpp+可降低WT-SY5Y细胞存活率,增加细胞凋亡率,其他细胞模型的细胞存活率及细胞凋亡率也与此类似;当加入4HT时,SY5Y-N细胞中因Ndfip1大量表达可明显增加细胞存活率,抑制细胞凋亡率,与WT-SY5Y相比,差异有统计学意义(P＜0.05);而此时SY5Y-D和SY5Y-Ⅰ细胞中因Ndfip1的表达被抑制不能明显增加细胞存活率,降低细胞死亡率(P＞0.05).结论 Ndfip1对Mpp+诱导的PD细胞模型具有明显的神经保护作用及抗凋亡作用,研究结果有助于对PD发病机制的研究,为PD的临床治疗开辟了新的思路.
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Ndfip1蛋白对神经细胞凋亡的保护作用探讨
目的 探讨神经细胞损伤后高表达的Ndfip1蛋白对神经细胞凋亡的抑制作用及其可能机制.方法 以SN-MC-1细胞(过表达Ndfip1的神经母细胞瘤细胞)及SH-SY5Y细胞作为研究对象,分别经过细胞培养及奥沙利铂作用后,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 MTT法检测细胞增殖发现奥沙利铂对SH-SY5Y细胞、SN-MC-1细胞的增殖具有抑制效应,且具有剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测细胞凋亡实验发现高表达Ndfip1的SH-SY5Y(SN-MC-1)细胞凋亡率有所下降.结论 奥沙利铂能够抑制神经细胞增殖,其增殖抑制效应可能是通过诱导细胞凋亡而实现,SN-MC-1细胞过表达的Ndfip1可能与NEDD4家族蛋白结合,通过泛素化清除错误折叠的蛋白,通过抗凋亡作用来保护神经细胞.
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Ndfip1对神经细胞铁超载损伤的保护作用及机制探讨
目的 探讨Ndfip1过表达对神经细胞SH-SY5Y铁超载损伤的保护作用及机制.方法 以SH-SY5Y细胞为细胞模型,并成功构建Ndfip1质粒.应用Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞,建立实验组和对照组.MTT法检测不同浓度FeSO4作用下,SH-SY5Y细胞存活率的变化,确定铁超载浓度;Ndfip1质粒转染SH-SY5Y细胞,确定转染效率;Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞,MTT法检测2组细胞存活率的变化;应用Calcein AM法处理细胞,荧光显微镜下观察2组细胞的荧光强度,以确定细胞内铁离子的含量;荧光分光光度计检测2组细胞的荧光强度变化,以确定细胞铁摄入能力的改变.结果 随着FeSO4浓度增加,SH-SY5Y细胞存活率逐渐降低.200μmol/L FeSO4可导致SH-SY5Y细胞存活率明显下降.Ndfip1质粒转染可明显增加SH-SY5Y细胞Ndfip1蛋白表达量,提高SH-SY5Y细胞铁超载损伤后的存活率,减少细胞内铁离子含量及细胞对铁离子的摄入.结论 铁超载对神经细胞造成损伤,导致其存活率降低;Ndfip1可减少铁离子进入神经细胞,减轻神经细胞内铁蓄积,降低铁超载对神经细胞的损伤作用,提高细胞存活率,从而发挥其保护作用.
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桂皮酸联合Ndfip1对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖与凋亡的协同效应
目的 通过分别检测不同浓度不同作用时间的桂皮酸联合Ndfip1蛋白对人肝癌SMMC -7 721细胞增殖及凋亡作用的影响,阐述中药桂皮酸与Ndfip1蛋白对该肿瘤细胞的作用.方法 采用MTT法检测不同浓度不同作用时间的桂皮酸单独及联合Ndfip1对人肝癌细胞SMMC -7 721增殖作用的影响；采用流式细胞术检测不同浓度不同作用时间的桂皮酸单独及联合Ndfip1对人肝癌细胞SMMC -7 721凋亡作用的影响.结果 不同浓度的桂皮酸单独及联合Ndfip1作用于人肝癌SMMC-7 721细胞均可造成对细胞增殖的抑制及对细胞凋亡的促进,且联合作用优于单独作用,2者相比具有显著性差异.结论 桂皮酸联合Ndfip1蛋白作用时,对人肝癌SMMC -7 721细胞增殖的抑制及对凋亡的促进均较桂皮酸单独作用有明显增强,表明2者的作用可能具有协同效应,这为进一步探索桂皮酸联合Ndfip1蛋白对肝癌细胞的作用奠定了基础.
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人Ndfip1基因在转染MES23.5细胞中的表达
目的 应用携带人Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)基因的质粒pCMV6-XL5-Ndfip1转染MES 23.5多巴胺能神经细胞,检测其在细胞中的表达.方法 应用Lipofectamine法转染MES 23.5细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MES 23.5细胞中Ndfip1 mRNA的表达.结果 该表达载体转染MES23,5细胞后,细胞内Ndfip1 mRNA的表达水平明显增加(t=-8.295,P＜0.01).结论 Ndfip1基因可在MES23.5细胞内表达,从而为进一步研究Ndfip1在神经元保护中的作用奠定了基础.
