首页 > 文献资料
-
小鼠睾丸曲细精管生精上皮的分离及形态观察
目的 寻找一种简单可行的研究精子发生过程中蛋白质定位的方法.方法 将新鲜的小鼠睾丸去除白膜,通过胶原酶Ⅰ及DNA酶Ⅰ的作用分离各种细胞.细胞经简单处理后以合适的浓度铺片,进行荧光染色,并于共聚焦荧光显微镜下观察.结果 通过分析特异的染料对顶体和细胞核染色的结果,可以分辨出各个阶段的生精细胞.结论 建立了一种研究精子发生过程中蛋白质定位的简单、可靠的方法.
-
精子发生过程中的组蛋白变化与雄性不育
男性不育的许多病理现象与生精细胞的表观遗传改变关系密切.表观遗传在精子发生过程中调控着生精细胞的有丝分裂、减数分裂和精子形成过程,其中,作为表观遗传的一个重要研究内容--组蛋白,在精子发生过程中会发生多位点和多种形式的氨基酸残基修饰,不同的修饰方式在精子发生的不同阶段精确地调控着生殖细胞的发育过程,且在精子形成阶段发生鱼精蛋白和组蛋白的替换.此外,在精子发生过程中,组蛋白修饰的异常改变还可能会损伤精子的发育过程,导致雄性不育.本文总结了精子发生过程中组蛋白修饰的变化、对生殖细胞发育的调控作用,以及组蛋白的异常改变与雄性不育的关系.
-
大鼠精子发生中一种新的阶段性表达基因全长cDNA的分离
精子发生是一系列基因严格按照时空顺序相继转录表达的过程.寻找和研究不同时期、不同发育阶段的差异表达基因,将有助于终阐明精子发生的机理.由于大鼠生精细胞在曲细精管内的排列极为有序,本研究采用曲细精管分段分离结合差异显示PCR(DDRT-PCR)的方法,寻找精子发生中差异表达的基因.
-
GnRH脉冲输注与HCG/HMG联合肌注对男性IHH患者生精治疗效果比较
目的 比较促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式皮下输注和人绒毛膜促性腺激素/人绝经期促性腺激素(HCG/HMG)联合肌注治疗男性特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(IHH)生精疗效.方法 回顾性分析2010年5月至2014年10月在北京协和医院内分泌科门诊就诊的92例男性IHH患者资料.患者自愿选择一种治疗方案,并据此将IHH患者分为GnRH脉冲式治疗组(GnRH组,40例)和HCG/HMG联合治疗组(HCG/HMG组,52例).观察GnRH组在治疗第1周和每个月的血清黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平;每月随诊观察两组患者血总睾酮(TT)水平、睾丸体积(TV)和精子生成率的变化情况,比较两组患者在治疗过程中TT水平、TV和精子生成率的差异.结果 所有患者均治疗3个月以上.GnRH组和HCG/HMG组随访中位时间分别为8.2(3.0～18.4)和9.2(3.0～18.6)个月,差异无统计学意义(P =0.413).GnRH组治疗1周时,LH[(0.5±0.6)比(3.4 ±2.4)U/L,P＜0.01]和FSH[(1.3±1.1)比(5.8 ± 3.8) U/L,P＜0.01]水平较治疗前显著升高.GnRH组患者末次随诊TT水平[(7.4±5.2)比(1.0±1.0) nmol/L]和TV[(8.1±4.0)比(2.3±1.5)ml]分别较治疗前显著升高和增大,均P＜0.01.HCG/HMG组末次随诊TT水平[(14.4±8.0)比(0.8±0.6)nmol/L]和TV[(7.6±4.2)比(2.3±2.1)ml]分别较治疗前显著升高和增大,均P＜0.01.GnRH组和HCG/HMG组分别有50.0％ (20/40)和28.8％ (15/52)患者生成精子,组间差异有统计学意义(P =0.038).精子初现时间方面,GnRH组为(6.5±3.1)个月,短于HCG/HMG组的(10.8±3.7)个月(P=0.001).结论 GnRH脉冲式皮下输注治疗男性IHH比HCG/HMG联合肌注更早产生精子.
-
大鼠睾丸组织中抑制素B表达下调与生精功能障碍的关系
目的 探讨精索静脉曲张对大鼠睾丸组织表达抑制素B的影响及其与生精功能障碍之间的关系.方法 SPF级SD雄性大鼠20只,按随机数字表法分为对照组和实验组.实验组采取左肾静脉部分结扎法制造精索静脉曲张的模型,对照组只做精索内静脉分离,不做结扎,其余同实验组.通过组织化学评价各组大鼠的生精功能及分析抑制素B表达情况,反转录(RT)-PCR检测抑制素B、Fas及Fas配体(FasL) mRNA的表达情况,Western印迹检测抑制素B蛋白的表达.结果 大鼠左侧睾丸生精功能比较:实验组Johnsen评分小于对照组[(9.79±0.05)比(9.97 ±0.02)分,P=0.023];实验组生精上皮厚度低于对照组[(48.35±0.99) μm比(57.58±1.98) μm,P=0.000];实验组的左侧附睾精子计数少于右侧[(933±161)×106个/(ml·g)比(1 552±184)×106个/(ml·g),P=0.017].Western印迹灰度分析显示实验组抑制素B的表达(0.407±0.053)低于对照组(0.608 ±0.076) (P =0.038).免疫组化检测亦显示实验组抑制素B的表达(0.161±0.004)低于对照组(0.183±0.005)(P=0.008).RT-PCR检测实验组的抑制素B mRNA表达量比对照组下降(0.522±0.050比1.106±0.210,P=0.003);实验组的Fas mRNA表达量比对照组下降(P=0.019);实验组FasL mRNA表达量比对照组升高(P=0.015).结论 精索静脉曲张可引起大鼠睾丸组织抑制素B表达下降和生精功能障碍,抑制素B表达下调与生精功能障碍有密切关系,抑制素B在精索静脉曲张引起不育的机制中发挥重要作用.
-
哺乳动物血睾屏障相关细胞连接及连接蛋白的研究进展
在雄性哺乳动物的睾丸中,紧密连接是血睾屏障中的主要结构,为相邻Sertoli细胞之间的一种联系,并与基部外胞质特殊结构和细胞桥粒连接共同存在.血睾屏障在生理上将生精上皮分为两个腔室:基底小室和近腔小室.基底小室内主要有精原细胞和早期精母细胞,而近腔小室有精子发生过程中各个阶段的生精细胞.前细线期精母细胞为了能够进入近腔小室必须穿过血睾屏障,该过程涉及多种分子以及相关的信号传导通路.分析目前与血睾屏障相关的细胞连接及连接蛋白的研究结果,进一步探讨这些细胞连接及连接蛋白对前细线期精母细胞穿越血睾屏障过程的作用.
-
LncRNAs与miRNAs在非梗阻性无精症中的研究进展
非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia,NOA)约占男性不育的10％～15％.然而,非染色体性NOA病因复杂,发病机制尚不清楚.精子生成过程受到转录因子、基因或信号通路的调控.其中长链非编码RNAs(lncRNAs)为长度大于200个核苷酸的调控性非编码RNA,通过转录、转录后修饰和表观遗传水平等多种机制调节基本的生化和细胞过程.微小RNAs(miRNAs)通过碱基互补配对的形式与mRNA结合,促使mRNA降解或阻碍其翻译,进而抑制目的蛋白的表达,在多种生物过程中发挥作用,包括发育、分化、细胞增殖和细胞凋亡.LncRNAs与miRNAs的异常表达可导致精子正常发育过程的紊乱.深入研究NOA相关的lncRNAs与miRNAs及其作用机制,有助于探讨NOA的病因和发病机制.
-
人类Y染色体异常对精子发生的影响
Y染色体数目和结构的改变导致男性精子生成功能的异常.大量研究表明,Y染色体短臂上SRY基因的存在与否直接决定着睾丸的发育,Y染色体长臂特有的AZF(又分AZFa、AZFb和AZFc)位点上分布着DBY、USP9Y、RBM和DAZ/SPYG等基因,它们在精子生成过程中起着重要的作用,其微小改变都将直接影响精子的正常发生.
-
运动对男性生殖影响的研究进展
运动对男性生殖的作用具有双重性,即合理运动有益于生殖内分泌,超负荷运动却常会损害男性的生育力.合理运动量的体能锻炼,卵泡刺激素(FSH)水平相比锻炼前上升,黄体生成激素(LH)和睾酮(T)水平显著上升;改善睾丸局部微环境,还改变生殖细胞的表观遗传修饰,有利于后代健康.超负荷运动则使睾丸微环境的温度显著上升,热应激可损伤精子的结构和功能并终导致男性生育力下降;超负荷运动还抑制促性腺激素释放激素(GnRH)神经元和垂体功能,干扰生殖激素分泌.此外,运动还使精子DNA CpG岛相关基因发生明显的去甲基化,影响微小RNA(miRNA)表达水平,影响表观遗传.综述运动对男性生殖的影响及其机制.
关键词： 男(雄)性 精子发生 生殖 运动(Exercise) 肥胖症 -
长链非编码RNA与精子发生
长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一类长度超过200个核苷酸的不编码蛋白的RNA分子.近年来的研究发现,lncRNAs在转录水平、转录后水平以及表观遗传水平广泛参与调控基因表达以及染色质重塑等.简述lncRNAs的分类与3种主要的作用机制(诱导、引导和支架),总结近年来通过二代测序技术以及基因芯片技术鉴定到的在精子发生过程中表达的lncRNAs,重点介绍Mrhl、Tsx、HongrES2、Dmr、Tbca16、NLC1-C等lncRNAs在生殖细胞增殖、分化、成熟过程中的功能及作用机制,并对lncRNA的功能研究策略作出展望.
-
辅助生殖实验室技术研究进展
自从1978年首例试管婴儿诞生以来,辅助生殖技术(ART)取得了重大进展.显微操作仪的使用,使胞浆内单精子注射(ICSI)治疗严重男性不育成为可能.显微操作技术还可用于辅助孵化、胚胎活检和核移植.序贯培养液的使用,使胚胎体外培养至囊胚期未成熟卵母细胞的体外培养以及体外精子发生也取得了许多进展.另外,玻璃化技术的应用简化了卵子及胚胎的冻存,提高了卵子的冷冻存活和妊娠率.生殖医学领域的基因治疗尚处于基础试验阶段.
-
精子发生减数分裂相关基因表达
精子发生是一个复杂而独特的细胞增殖与分化的过程，其中包括精原细胞的有丝分裂增殖，精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程，终形成成熟的精子。减数分裂是配子发生过程中重要且特异的环节。参与精子发生减数分裂的基因和因子非常多，包括DAZ基因、HSP70热休克蛋白基因、原癌基因、M期促成熟因子等许多性染色体和常染色体的基因。
-
蛋白质乙酰化与精子DNA稳定性和精子活力
表观遗传学参与调节精子发生和精子形成，其中组蛋白及非组蛋白乙酰化对生精细胞染色质结构重建以及精子活力起关键作用。环磷酸腺苷（cAMP）反应元件连接蛋白（CREB）的结合蛋白（CREB-binding protein，CBP）和p300是两个乙酰化酶，能使核心组蛋白发生乙酰化，其乙酰化作用能被乙酰化酶抑制剂（INHAT）所抑制。睾丸特异的布罗莫结构域（BRDT）蛋白为保守的核蛋白，能够识别乙酰化和非乙酰化的组蛋白。在精子发生早期，BRDT调节基因转录；在精子形成阶段，BRDT识别高度乙酰化组蛋白，接着组蛋白被鱼精蛋白替代，从而使精子形成致密的染色质。非组蛋白α微管蛋白（α-Tubulin）去乙酰化则降低精子活力，在少弱精患者精子中乙酰化α微管蛋白（acetylatedα-tubulin，Ac-α-Tu）明显下降。
-
SET蛋白对精母细胞株(GC-2spd)增殖和组蛋白乙酰化的影响
目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用.方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定.琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合.分别转染空载腺病毒(AdH1-siRNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(AdH1-siRNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Red time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测mRNA以及蛋白的表达.结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合.转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P＜0.01).与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P＜0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖.SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成.
-
抑制素B与人类生殖
抑制素B(INH-B)由生殖系统细胞分泌,在女性可以较直接地反映卵巢储备,而了解卵巢储备能预测辅助生殖技术过程中卵泡对垂体促性腺激素的反应及预后.近年来,有较多学者研究了抑制素B与卵巢储备在辅助生殖技术中的意义,估计预后,采取佳的超促排卵(COH)方案,以提高低反应者的妊娠率.近年还发现抑制素B参与男性精子的发生,在男性不育患者中预测无精症患者精子获得率等方面也有重要意义.
-
精原干细胞移植的研究进展
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞.精原干细胞(SSC)是一种成体干细胞,是哺乳动物成体睾丸生精上皮中唯一可复制的多能二倍体细胞,能在体外分离纯化、培养、冻存,可进行同体或异体移植.1994年Brinster和Zimmermann首次进行SSC移植试验,有关SSC的研究越来越多,SSC成为生殖领域巾的研究热点.主要以小鼠为例,就SSC的生物学特征、增殖与分化和移植及其相关研究进行综述.
-
胱蛋白酶抑制剂超家族成员CRES的研究进展
胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(cystain-related epididymal spermatogenic,CRES)蛋白是胱蛋白酶抑制剂(cystatin)家族中的一个亚类,在结构上与cystatin家族具有一定的同源性,但缺少胱氨酸蛋白酶抑制活性必需的保守序列,主要在睾丸及附睾中表达.探究CRES亚类的表达调控及其生物学功能将有助于阐明精子发生与成熟的分子机制,为解决精子成熟异常引起的不孕症提供分子基础,也为开发一些阻断精子成熟的男性避孕药物提供新的设计思路.
关键词： 胱蛋白酶抑制剂超家族 CRES 睾丸 附睾 精子发生 -
抑制素B对精子发生障碍的诊断参考价值
抑制素B是睾丸分泌的一种糖蛋白激素,受垂体卵泡刺激素(FSH)特异调控,具有昼夜分泌节律性并随年龄增加而变化.成年男性抑制素B几乎全部来自于睾丸,且其组装过程大部分在生精细胞内完成,而后释放到循环和精浆,因此血清和精浆抑制素B水平与精子发生同步.由于使用高特异性抗体,酶联免疫吸附法(双抗体夹心ELISA法)可精确测定具有生物活性的抑制素B,满足科研和临床的需要.抑制素B的浓度在精子发生障碍时会出现变化,通过测定其浓度可对精子发生状态作出评估,在鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症方面也具有较高的特异性与敏感性.
-
SET在小鼠睾丸组织中的表达
目的:检测不同年龄段小鼠睾丸组织中SET蛋白和mRNA的表达,讨论其在精子发生及睾酮生成方面的潜在功能.方法:实验中用1周龄的ICR雄性小鼠作为幼年期组(相当于人类幼年期,n=12),4周龄的ICR雄性小鼠作为性发育期组(相当于人类的青春期前,n=12),12周龄的ICR雄性小鼠作为成年期组(相当于人类成年期,n=12),12个月龄的ICR雄性小鼠作为中老年组(相当于人类的中老年,n=12).免疫组织化学法观察SET在各年龄段小鼠的定位表达;实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western Blot)分别检测睾丸中SET mRNA和蛋白水平表达.结果:SET蛋白表达定位于生精小管中的精原细胞、精母细胞,在性发育期组和成年期组的单倍体和四倍体生殖细胞中高表达;成年期组和中老年组的睾丸间质细胞中也有SET的表达;支持细胞中很少量表达.性发育期组SET mRNA与幼年期组相比表达量升高(P=0.020),而成年期组小鼠睾丸中SET蛋白的表达水平高.结论:SET主要表达于精原细胞和精母细胞,少量表达于支持细胞,表明SET可能与精子发生有关.SET还表达于睾丸间质细胞,与睾酮生成有关.
-
精子变形中相关蛋白的研究进展
精子变形(spermiogenesis)是指精子发生过程中由圆形精细胞转变为蝌蚪形精子的变态过程,同时也是精子发生的后分化阶段.其过程包括细胞核浓缩、顶体形成、尾部形成、残余体丢失以及短暂出现精子领结构等.近年来,随着基因敲除、表达和功能研究等生物技术的发展和应用,发现了许多与精子变形相关的基因与蛋白,其中有些已被证明在精子变形过程中具有重要作用.综述精子变形的新进展,包括与精子变形相关的重要蛋白及功能,如高尔基体蛋白、鞭毛相关蛋白、残余体相关蛋白等.
