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15-HETE及其代谢产物对大鼠离体肺动脉环作用的比较
目的 通过比较15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)及其两种代谢产物15-酮基二十碳四烯酸(15-KETE)、8(S),15(S)-二羟基二十碳四烯酸[8(S),15(S)-diHETE]对缺氧组与正常组大鼠的肺动脉环张力的影响,以探讨15-HETE的两种代谢产物在缺氧性肺动脉高压形成中的作用.方法 16只健康SD大鼠,体重为(220±20)g,随机分为两组(n=8),一组置于正常的培养箱中,其吸入氧(FiO2)浓度为21%,作为正常组;一组置于缺氧的培养箱中,吸入氧(FiO2)浓度为10%,作为缺氧组.9 d后将两组大鼠处死,采用组织浴槽血管环法观察15-HETE、15-KETE、8(S),15(S)-diHETE对正常组和缺氧组大鼠肺动脉环收缩的影响.结果 (1)在正常组和缺氧组,15-HETE、15-KETE、8(S),15(S)-diHETE都以浓度依赖方式使大鼠肺动脉环张力增加;(2)15-HETE、15-KETE使缺氧组大鼠肺动脉环张力较正常组显著增高,而8(S),15(S)-diHETE使正常组和缺氧大鼠肺动脉环张力无明显差异;(3)正常组大鼠肺动脉环对15-KETE、8(S),15(S)-diHETE反应力显著高于15-HETE,而缺氧组大鼠肺动脉环对15-KETE反应力显著高于15-HETE、8(S),15(S)-diHETE.结论 15-KETE、8(S),15(S)-diHETE可能在缺氧性肺动脉高压形成中起一定的作用.
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15-HETE对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响
用肺动脉环和全细胞膜片钳技术研究15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响.新出生的幼兔分两组,一组放入吸氧分数为0.12的低氧舱内;另一组保持正常氧环境.9 d后,称重、取肺动脉进行细胞培养并制作肺动脉环.分别加入4-氨基吡啶(4-aminopyridione,4-AP)、四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、glyburide(GLYB)三种特异性钾离子通道阻断剂,观察15-HETE对兔肺动脉平滑肌钾离子通道的作用变化,同时采用全细胞膜片钳测定钾电流.结果显示:5 mmol/L 4-AP阻断KV通道后可以抑制15-HETE诱导的缺氧兔肺动脉收缩;TEA和GLYB分别阻断大电导型钙激活钾通道(BKCa)和KATP通道后并不影响15-HETE诱导的缺氧兔肺动脉收缩;15-HETE可降低兔肺动脉平滑肌细胞钾电流幅度.上述结果提示:缺氧兔肺动脉中,15-HETE阻断电压依赖钾通道(KV通道),引起膜去极化,可能是缺氧性肺血管收缩的机制之一.
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15-羟廿碳四烯酸对缺氧性肺血管收缩电压门控性K+通道的作用机制
缺氧性肺血管收缩(HPV)是机体的一种保护功能,但其机制至今尚不完全清楚.15-羟廿碳四烯酸(15-Hydroxyei-cosatetrienoic acid,15-HETE)是15-脂质氧化酶(15-LO)代谢花生四烯酸(AA)的产物,其对肺动脉平滑肌细胞(PSMVC)电压门控性K+通道(Kv)有抑制作用,使细胞去极化,细胞内钙离子浓度增加,进而导致细胞收缩,产生HPV,故15-HETE可能是形成HPV的始发介质.
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在大鼠中15-LO/15-HETE参与缺氧对KV1.5表达的抑制作用
目的 采用分子生物学技术从组织和细胞水平上观察阻断15-LO/15-HETE后,缺氧对KV1.5表达的影响.方法 通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs)和大鼠肺动脉,应用Western blot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平上观察在15-LO阻断剂CDC和NDGA作用下,缺氧对KV1.5表达的影响.结果 从组织和细胞水平上,用CDC和NDGA阻断15-LO即阻断了内源性15-HETE的产生,KV1.5的表达量在蛋白质水平和mRNA水平与未阻断组比较都增加.在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低.说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量.但在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低.说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量.结论 上述结果表明,从大鼠肺动脉组织和细胞水平上,内源性15-HETE介导了缺氧对KV1.5表达的抑制作用.
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花生四烯酸及其3种代谢产物对兔肺动脉环作用的比较
目的通过比较花生四烯酸(AA)及其3种代谢产物:15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)、8(S),15(S)-二羟基二十碳四烯酸[8(S),15(S)-DiHETE]、15-酮基二十碳四烯酸(15-KETE)对缺氧组与正常组幼兔的肺动脉环张力的影响,以探讨AA及其3种代谢产物在缺氧性肺动脉高压形成中的作用.方法 12只新生幼兔随机分为两组(n=6),一组置于正常的培养箱中,其吸入氧(FiO2)浓度为0.21,作为正常组;一组置于缺氧的培养箱中,吸入氧(FiO2)浓度为0.10,作为缺氧组.9 d后将两组幼兔处死,采用组织浴槽血管环法观察AA、8(S),15(S)-DiHETE、15-HETE、15-KETE对正常和缺氧幼兔肺动脉收缩的影响.结果① AA、8(S),15(S)-DiHETE、15-HETE、15-KETE以浓度依赖方式收缩正常组幼兔肺动脉环,其中15-KETE和15(S)-DiHETE收缩血管作用明显,而AA、15-HETE收缩血管作用不明显;② AA、15-KETE、15-HETE、8(S),15(S)-DiHETE使缺氧幼兔肺动脉环张力增加,AA、15-HETE使缺氧组幼兔肺动脉环张力较正常组增高;但缺氧肺动脉环对四种物质的反应力差异无显著性;③正常组幼兔肺动脉环对15-KETE的反应明显高于缺氧组.结论 15-HETE的代谢产物8(S),15(S)-Di-HETE在缺氧性肺动脉高压形成中起一定的作用,而15-KETE可能不参与慢性缺氧导致的幼兔肺动脉的收缩过程.
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PKC和血管内皮细胞在15-HETE收缩肺动脉中的作用
目的探讨蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶A(PKA)信号转导途经及血管内皮完整性在15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)收缩肺动脉中的作用. 方法采用组织浴槽血管环法与PKC、PKA抑制剂以及除去血管内皮细胞相结合的方法.结果用6.8 mmol·L-1 hypericin阻断PKC途径可使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移(P<0.01);用0.112 mmol·L-1 KT5720阻断PKA途径使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移不明显;除去血管内皮细胞可降低对照组和缺氧组肺动脉血管环对15-HETE的反应性. 结论 15-HETE收缩肺动脉的作用和PKC信号转导系统以及血管内皮细胞的完整性有关.
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15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响
目的通过阻断细胞外钙离子(Ca2+)内流,观察15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,探讨缺氧时15-HETE引起细胞钙动员的机制.方法采用组织浴槽血管环方法观察L-型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15-HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定15-HETE对细胞内[Ca2+]i的作用.结果在正常组和缺氧组,10 μmol·L-1硝苯地平和无钙液对1 μmol·L-1 15-HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的15-HETE组细胞(正常培养的细胞暴露于1 μmol·L-1 15-HETE下继续孵育8 min)与正常对照组相比,细胞内[Ca2+]i明显增加 (P<0.05).结论 15-HETE可引起肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放.
