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慢阻肺大鼠肺组织中树突状细胞表面因子的表达变化及CCL20抗体的干预作用
目的 了解树突状细胞表面因子OX62、CD83在慢阻肺大鼠肺部的表达变化,并探讨CCL20抗体的干预作用.方法 选用30只健康Wistar大鼠,随机分为健康对照组(10只)、慢阻肺模型组(10只)、CCL20单抗组(10只),用气道内注入脂多糖(共2次)联合烟雾刺激(约28 d)的方法诱导慢阻肺模型.在实验初始对单抗组大鼠以CCL20单克隆抗体腹腔注射一次.在第29天取大鼠的肺组织观察其病理学改变,用免疫组织化学技术检测肺部树突状细胞(DC)的表面因子OX62、CD83的表达变化.结果 模型组大鼠肺组织HE染色符合气道炎症和肺气肿的表现,CCL20单抗组大鼠肺部病理表现比慢阻肺组明显减轻.与健康对照组相比,慢阻肺模型组大鼠的肺组织中OX62的表达比对照组明显增多(P<0.05),而在CCL20单抗组低于慢阻肺组(P<0.05).慢阻肺模型组大鼠肺组织中CD83的表达比对照组少(P<0.05),而在慢阻肺组与CCL20单抗组之间则没有明显的差异(P>0.05).结论 慢阻肺的发病可能与肺部OX62的表达增多及CD83的表达减少有关,使用CCL20单抗能部分地抑制这一效应.
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一种简便、高效的大鼠树突状细胞的分离方法
目的寻求一种简便、高效的大鼠骨髓树突状细胞(DC)分离与培养的方法.方法处死F344大鼠1只,消毒,取四肢骨,剔除肌肉,剪去骨两端;培养基冲洗骨髓腔,收集细胞悬液,经密度梯度离心得到淋巴单核细胞,加入全RPMI 1640培养基和rrGM-CSF、rrIL-4,培养箱中培养;经倒置显微镜、电镜观察细胞形态,经流式细胞仪鉴定DC纯度,显微镜下细胞计数.结果第4天经倒置显微镜、电镜观察DC出现典型形态;流式细胞仪检测第4天OX62阳性率为8.92%、MHC-Ⅱ为20.9%、CD86为16.98%;第8天OX62阳性率为58.07%、MHC-Ⅱ为60.49%、CD86为62.94%;第15天OX62阳性率为84.68%、MHC-Ⅱ为88.03%、CD86为62.80%.显微镜下细胞计数DC数量为(1.0～2.0)×107.结论应用梯度分离加细胞培养分离纯化大鼠DC,其纯度较高(80%以上),数量大[(1.0～2.0)×107].
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大鼠脾脏来源树突状细胞的分离培养及生物学特性
目的 建立从大鼠脾脏中分离单个核细胞并诱导及纯化树突状细胞(DC)的方法,并分析其生物学特性. 方法 采用胶原酶消化并裂解红细胞获得脾细胞悬液,密度梯度离心获得单个核细胞,单次贴壁法去除淋巴细胞.在含有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4的培养基中培养诱导DC,获得贴壁细胞群和悬浮细胞群.应用流式细胞仪测定OX62、CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达. 结果 大鼠脾脏来源DC在体外培养7～8 d后OX62表达率达到高峰.在贴壁细胞中出现OX62的高表达,而CD80、CD86和MHC-Ⅱ的表达与悬浮细胞无统计学差异(P＞0.05). 结论 脾脏来源的单个核细胞经过7～8 d的培养,在贴壁细胞群中可收获大量DC,且贴壁DC更为幼稚.
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解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠OX62、Fas及TNFR1表达的影响
[目的]探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠OX62、Fas及肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)表达的影响.[方法]将30只Wistar大鼠随机分为3组,即空白组、模型组、中药组,每组10只.以D-氨基半乳糖(D-GalN)600 mg/kg联合脂多糖(LPS)20μg/kg一次性腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型.中药组大鼠在造模前5 d即开始给予解毒化瘀颗粒预处理,造模成功后24 h处死各组大鼠取肝组织,采用反转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测OX62 mRNA表达,采用免疫组织化学法检测OX62、Fas及TNFR1的表达.[结果]模型组大鼠肝组织OX62 mRNA,OX62、Fas、TNFR1蛋白表达水平显著增高,与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);经解毒化瘀颗粒干预治疗,中药组大鼠肝组织OX62 mRNA,OX62、Fas、TNFR1蛋白表达水平下降,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]解毒化瘀颗粒可能是通过下调OX62、Fas及TNFR1的表达来调控免疫反应,进而抑制细胞毒性T细胞介导的肝细胞凋亡.
