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小鼠骨髓源半成熟树突状细胞的培养与初步鉴定
目的 探索培养与鉴定小鼠骨髓来源半成熟树突状细胞 (smDC) 的可行方法.方法 分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、2 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和20ng/ml重组小鼠白细胞介素(IL)-4的RPMI-1640培养基培养9 d;再以肿瘤坏死因子-a (TNF-a)(40ng/ml)刺激24 h获得smDC,同时以脂多糖(1 ug/ml)刺激和不加刺激培养24 h获得成熟DC(mDC)和未成熟DC(iDC).扫描电子显微镜、流式细胞术、ELISA检测iDC、mDC和mDC的形态、细胞表面标志及细胞因子的表达.建立体外淋巴细胞反应模型,采用细胞计数试剂盒检测smDC对异基因淋巴细胞的活化作用.结果 smDC的体积介于iDC和mDC之间、多呈类圆形或圆形,胞体直径约为15um,树突长度多在5-10 μm.smDC、iDC与mDC均高表达CD11c,smDC表达CD40、CD80、CD86及MHC.II介于iDC和mDC之间.smDC分泌IL-1β、IL-6和IL-12显著低于mDC(P＜0.01)、分泌IL-12显著低于iDC(P＜0.05),分泌IL-Iβ、IL-6与iDC比较差异无显著性(P＞0.05);smDC、iDC与mDC分泌1L-10差异无显著性(P＞0.05).smDC对异基因淋巴细胞激活作用显著低于mDC和阳性对照(P＜0.01),而与阴性对照和iDC差异无显著性(P＞0.05).结论 smDC可能是一个功能和形态上相对独立的DC亚群,体外利用GM-CSF、IL-4和TNF-a诱导骨髓单核细胞是获得smDC的有效方法.
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半成熟树突状细胞与 Tregs 水平对ESCs分化的肝细胞移植小鼠模型免疫耐受的影响
目的：观察半成熟树突状细胞（ smDCs ）在小鼠胚胎干细胞（ ESCs ）来源的肝细胞移植中诱导免疫耐受的作用及机制，并分析smDCs与调节性树突状细胞（ regDCs ）之间的关系。方法将绿色荧光蛋白（ GFP）标记的129系小鼠ESCs按前期方法向肝细胞诱导分化，同时诱导129系小鼠骨髓单核细胞向smDCs和regDCs分化。将smDCs、regDCs分别预先输入BALB／c小鼠体内，3 d后再将ESCs分化的肝细胞移植入BALB／c小鼠肝实质内。观察移植细胞生存时间、生长状况、局部免疫反应情况；检测分析受体血CD4＋T细胞Foxp3表达情况等。结果对照组小鼠肝实质内移植细胞仅生存1周，smDCs组与regDCs组生存时间可达4周，移植部位CD3＋T细胞浸润较对照组明显减轻；smDCs与regDCs在形态和表型方面相似，二者均中度表达MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86；smDCs组受体小鼠外周血CD4＋T细胞Foxp3表达量明显升高由1.11％上升至5.38％；regDCs组Foxp3表达量亦有所升高达3.87％。结论 smDCs能诱导ESCs源性肝细胞移植耐受，其机制可能与Foxp3＋Tregs产生相关。 smDCs与regDCs作用类似，且均中度表达MHC-Ⅱ、CD40等，推测为同一类型的耐受性树突状细胞。
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供体来源半成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植 术后免疫低反应的实验研究
目的 研究供体来源半成熟树突状细胞(smDC)诱导大鼠肝移植术后免疫低反应的效果,初步分析其作用机制.方法 该实验在成功完成大鼠树突状细胞(DC)培养和鉴定的基础上,进行大鼠肝移植术前输注供体来源DC、术后使用雷帕霉素灌胃,观察大鼠术后血清白细胞介素10(IL-10)和γ干扰素(IFN-γ)、CD4+CD25+Treg的变化,并评估急性免疫排斥病理改变.结果 使用雷帕霉素后,可以改变血清细胞因子的分泌水平、促进Lewis→BN大鼠肝移植术后CD4+CD25+Treg的增殖,减轻术后免疫排斥反应,从而延长Lewis→BN大鼠肝移植术后生存时间.结合术前输注未成熟树突状细胞(imDC)或smDC,可以增强雷帕霉素的相应作用,进一步诱导大鼠肝移植术后免疫低反应,且smDC的作用强于imDC.结论 smDC可以诱导Lewis→BN大鼠肝移植术后免疫低反应.
