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肝再生研究中胆汁淤积性实验动物模型进展
肝脏具备强大的再生能力,它能在各种损伤因素致伤后部分或完全恢复肝脏结构并实现功能重建.这种肝再生理念构成了现代肝外科和肝病治疗的基础.在移植医学中,缩小体积的肝移植物、劈裂肝移植、还有活体肝移植就是基于术后受体的肝再生使肝体积增大并完成功能重建的[1-3].还有"肝桥概念(liver bridging)"已用于治疗急性肝衰,其意义就是进行暂时性的肝功能替代,如运用辅助性肝移植、肝细胞移植或人工肝辅助系统等手段,维持患者生命直到其自体肝完成再牛[4].
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肝细胞移植:细胞存活与增殖研究新进展
大量的实验表明,在治疗患有致命的肝脏疾病的患者时,肝细胞移植可能取代肝脏移植作为有效的治疗手段.但是研究者[1]发现移植的肝细胞只能提供暂时的功能帮助,移植细胞的长期存活和增殖比较困难.移植后肝细胞能否顺利的再生与增殖,使肝功能得到代偿,取决于多种因素,如肝细胞移植部位.肝细胞移植方法、免疫排斥反应以及细胞因子的影响等等.
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在治疗肝硬化时骨髓干细胞的选择与分析
肝硬化是大多数慢性肝病的共同病理结局,肝硬化进入失代偿后将导致肝功能衰竭,目前有效的方法是原位肝移植,但由于供体缺乏、手术费用高和长期使用免疫抑制剂等因素阻碍其广泛应用;生物人工肝和肝细胞移植同样因为肝细胞来源有限而存在局限性.近年来,干细胞技术研究已在医学领域中取得了令人瞩目的成果,其中骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化具有一定的效果,这也为终末期肝病的治疗提供了新思路[1-6].本文结合文献分析对治疗肝硬化时骨髓干细胞类型的选择以及是否进行移植前诱导进行了探讨,现分述如下.
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肝衰竭的细胞治疗:距离临床有多远?
肝衰竭患者因发病急、病死率高常须肝移植.除此之外,可能替代肝移植的细胞治疗是目前研究的热点.本文概述了近年来肝细胞移植、造血干细胞移植、间充质干细胞移植的基础研究进展和临床应用现况,及肝前体细胞和诱导性多能干细胞的特点和临床应用前景.
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肝细胞移植:临床应用及实验室研究
肝细胞移植(hepatocytes transplantation,HCT)为损伤肝脏的细胞重建及衰竭肝脏的功能恢复提供了一种全新的治疗.其目的一方面要改变整体器官移植的形式,即:由一个供体仅能供给一个受体形式变为由一个供体移植给几个受体[1],近,我们在国内率先将人原代肝细胞移植应用于临床,实现了不经整体肝移植而重建肝功能或桥梁治疗使肝衰竭患者等到供体肝脏[2,3];另一方面对遗传性肝脏代谢性疾病可通过新分离的肝细胞或基因修正的肝细胞做肝脏直接的基因治疗.我国人数较多的重型肝炎和肝衰竭患者为肝细胞移植的临床应用展现了广阔的应用前景.
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原代培养大鼠肝细胞的基因转染
目的:研究原代培养大鼠肝细胞的基因转染的方法.方法:采用胶原酶灌注法获取原代培养大鼠肝细胞.利用脂质体转染法将含有绿色荧光蛋白(GFP)和Neo基因的真核细胞表达载体(pEGFP-N3)转染原代培养大鼠肝细胞.用荧光显微镜观察和Neo基因原位杂交染色方法检测肝细胞内基因表达情况.结果:获取的原代大鼠肝细胞活细胞率达95%.荧光显微镜下观察可见转染基因的细胞可发出绿色荧光,原位杂交显示有Neo基因的表达.结论:pEGFP-N3基因可转入大鼠肝细胞并获得表达,可用于标记原代培养的大鼠肝细胞,有利于研究肝细胞移植后移植的肝细胞在体内的分布及功能.
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肝细胞与骨髓间质干细胞共同培养时的肝细胞功能
目的:利用原代培养的大鼠肝细胞与骨髓间质干细胞共同培养,研究骨髓间质干细胞对肝细胞功能的影响,以便更好用于肝细胞移植及生物人工肝.方法:采用低浓度胶原酶原位循环灌流法分离大鼠旰细胞,获得有活性生的肝细胞进行原代培养.台盼蓝排斥法计算细胞产量和细胞活性;光镜下动态观察细胞形态学改变,并收集不同时期培养上清检测其细胞分泌等功能.比较肝细胞单纯培养及其与骨髓间质干细胞共同培养时细胞的功能.结果:培养7 d时两组均仍然维持白蛋白分泌及尿素合成功能;共同培养组与单纯肝细胞培养组在白蛋白分泌(13.75>2.179,P<0.05)及尿素合成功能(7.27>2.179,P<0.05)存在显著性差异,共同培养组明显高于单纯培养组.结论:肝细胞与骨髓间质干细胞共同培养,可以使肝细胞维持特异性功能,提高肝细胞活性.
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聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子的制备及其对培养猪肝细胞的影响
目的:制备聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子并探讨其对培养猪肝细胞形态和功能的影响.方法:以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料,采用超声波法制备了聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子,用原子力显微镜对其进行了物理表征,用X射线光电子光谱法对其表面的化学结构进行了表征.用聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子进行原代猪肝细胞培养,并以普通培养作为对照组.观察培养后1 wk内肝细胞的形态和功能变化.结果:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子制备成功,原子力显微镜下其直径300-500nm.经过XPS光谱分析显示,C,O,N的比例分别为72.51%,23.69%,3.80%.普通培养的肝细胞,48 h后逐渐失去多边形特征.而与PLA-O-CMC共培养48 h后,肝细胞形成细胞黏附聚集的球形体,大部分肝细胞重建细胞极性,呈现较典型、均匀的多边形形态特征.培养后24 h,3 d和5 d时,纳米细胞培养组ALB含量高于普通培养组(3.53±0.052,3.48±0.075,3.57±0.137g/L vs 3.10±0.179,3.17±0.186,3.10±0.219 g/L,均P<0.05);3,5,7 d时,纳米细胞培养组ALT水平明显低于普通组(15.33±13.05,8.84±8.87,7.00±5.22 nkat/L vs 24.17±20.35,16.17±27.49,15.50±11.95 nkat/L,均P<0.05),而BUN含量虽然有所升高,但是不显著(P>0.05).结论:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子是肝细胞培养的良好材料.
关键词: 聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖 纳米材料 肝细胞 培养 肝细胞移植 -
急性肝衰竭大鼠肝细胞移植的实验研究
目的:探讨大鼠同种异体肝细胞经腹腔、脾脏、门静脉移植对药物陛急性肝衰竭大鼠的治疗作用.方法:D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭后60 h,分6组进行治疗实验.Ⅰ组:腹腔内移植2×1010/L肝细胞悬液1 mL;Ⅱ组:腹腔内注射生理盐水1 mL;Ⅲ组:经门静脉注射2×1010/L肝细胞悬液1 mL;Ⅳ组:经门静脉注射生理盐水1 mL;V组:向脾脏内移植2×1010/L肝细胞悬液1 mL;Ⅵ组:脾内注射生理盐水1 mL.移植同时各组大鼠肌肉注射环孢霉素A(CsA)10 mg/kg,观察大鼠的存活率、肝脏功能和肝脏病理变化情况.结果:Ⅰ组大鼠存活率比Ⅱ组有明显提高(60%对20%,P<0.01),肝脏功能及肝脏病理明显改善.Ⅲ组大鼠存活率与Ⅳ组无显著差异(20%对13.3%,P>0.05),肝脏功能及肝脏病理未见改善.V组与Ⅵ组比较存活率有提高(47%对20%,P<0.05).结论:经腹腔及脾脏移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,部分改善肝功能及肝脏病理;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及肝脏病理.
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移植肝细胞基因调控研究
随着基因工程和基因治疗方法的不断更新,肝细胞移植技术在基础研究和临床应用中已取得很大进展,特别是利用基因调控手段提高移植肝细胞增殖能力、改善移植肝细胞分化水平以及调控移植肝细胞特异性功能基因表达,为肝细胞移植的进一步应用展示了广阔的前景.通过对移植肝细胞某些特定靶基因表达的调控,将有可能培养出抗排斥能力强、存活时间长、功能作用全的"超级肝细胞"(superhepatocyte),上述研究的开展对于急慢性肝病、肝纤维化、肝脏功能基因缺陷性疾病等的治疗具有重要意义,并将成为肝病细胞移植治疗研究的重要领域.
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肝干细胞的研究进展
肝干细胞的存在与否曾是一个争议性问题,目前则趋于肯定,并取得重要研究进展.肝干细胞有肝源性和非肝源性两类,前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞,后者包括胚胎干细胞(ES细胞)、骨髓/血液干细胞及胰腺上皮细胞等.肝干细胞受多种细胞因子调节;卵圆细胞可通过流式细胞仪分离,经特殊培养液培养条件及遗传学改造等进行长期培养;肝干细胞与肝坏死后的再生及增生有关,也和肝细胞癌变有关.已在动物中成功进行了肝源性和非肝源性肝干细胞移植.肝干细胞是研究肝细胞发育、生长、增生、再生、纤维化及癌变等生理和病理生理过程中不可缺少的关键角色,并可能通过肝细胞移植、体外生物人工肝及肝导向基因治疗,在多种肝病及肝脏相关疾病中发挥重要作用.
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肝细胞体外培养技术的研究现状
本文综述了肝细胞原代分离、低温冻存、培养液补充物、常用肝细胞培养方法等肝细胞体外培养的有关内容,强调非实质细胞和基质生物学在维持细胞形态和功能方面的重要性.体外肝细胞培养技术及其应用方式都取得了长足进步,反映了肝组织生物学的重大进展.许多新技术已应用于临床,取得良效,如微囊肝技术用于肝细胞移植肝细胞中空毛细血管三维培养技术用于生物型人工肝支持系统等.随着肝细胞生物学和细胞培养技术以及细胞工程技术的发展,我们将能更好地模拟肝细胞的体内生长环境,从而体外大规模长期培养活力旺盛功能良好的肝细胞,应用于临床.
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肝细胞移植,糖尿病人的"救命稻草"?
人们都说得了癌症是被宣判了"死刑",而患上糖尿病等于被宣判了"无期徒刑",不但要终身药物控制,还要面对可怕的并发症,沉重的心理负担和经济负担.广大糖尿病患者无不在翘首企盼着根治糖尿病的好信息早日到来,让他们摆脱病魔的困扰.
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骨髓干细胞与肝细胞移植
肝细胞移植为治疗各种肝病提供了一种新的途径,其目的是通过移植细胞的增殖逐步替代或重建受损的肝组织结构.细胞来源是当前阻碍肝细胞移植发展的主要问题.骨髓干细胞可以分化为与其组织发育或再生来源不同的细胞类型,可望成为肝细胞移植的重要细胞来源问题.本文就近年来相关研究进行综述.
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一种肝细胞移植的新来源--骨髓干细胞可塑性的应用研究(文献综述)
逐步替代或重建受损的肝组织结构是肝细胞移植治疗肝病的终目的.骨髓干细胞可以演变成为与其组织发育或再生来源无关的细胞类型,即骨髓干细胞的可塑性(plasricity).骨髓干细胞分化为肝实质细胞的发现提示它可能参与了体内肝组织细胞的再生、及损伤的修复与替代,而这一进程与肝细胞移植的作用机制类似,本文就近年来的有关研究进行综述.
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肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭的研究进展(文献综述)
明确"肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭"领域中的概念与治疗方法具有重要意义,本文就肝细胞的紧急辅助移植治疗肝功能衰竭的原理、移植物的制备、病例选择以及手术后监测等问题给予综述.
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肝再生微环境与肝细胞移植(文献综述)
肝细胞移植治疗肝脏疾病已有20多年的历史,但移植肝细胞增殖困难一直围绕着该项研究的进展.肝细胞增殖与肝再生微环境关系密切,本文就近年来的有关研究综述如下.
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肝脏疾病外科治疗进展概述
自1963年施行全球首例肝移植手术以来,对肝移植的研究经历了不断的发展,并取得了许多新的进展.临床上用于肝移植后免疫抑制治疗的药物,经历了从咪唑硫瞟呤到一些如西罗莫司和抗IL-12受体抗体类免疫抑制药物的发展过程.肝移植术式更是呈现出了飞速的发展势头,兴起了许多有利于拓展肝源的新术式,包括常规的劈离式肝移植、活体肝移植术式以及还处于改良阶段的自体肝移植术等.此外,多米诺肝移植、肝细胞移植、异种肝脏移植等方面也得到了一定的发展.
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肝细胞移植解决α1抗胰蛋白酶缺乏
[动态]遗传性的α 1抗胰蛋白酶缺乏会引发肝病和肺气肿.肝脏合成的该蛋白的正常功能是抑制降解肺部结缔组织的中性粒细胞弹性蛋白酶.该病的典型形式是突变的α1抗胰蛋白酶低效分泌并积累在肝细胞中,因而降低了蛋白酶抑制剂的活性,导致肝损伤和肺气肿.鉴于变异蛋白的积累增加了肝细胞的压力,美国科学家近研究了向表达该变异蛋白的转基因鼠模型移植表达野生型α1抗胰蛋白酶的肝细胞能否有效.
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肝细胞体内移植治疗重型肝炎临床研究
目的 探讨肝细胞体内移植治疗重型肝炎临床应用的安全性、疗效及免疫抑制剂方案的可行性.方法 采用肝细胞分离纯化、体外培养、冷冻及复苏方法,经股动脉插管原位肝细胞体内移植.结果 7例重型肝炎病人中,2例临床治愈;2例好转出院;1例肝细胞移植后第8天等到供体肝脏行原位肝移植;2例死亡.结论 肝细胞体内移植是一项安全,近期疗效确定的治疗方法,免疫抑制剂方案有可行性,移植后的肝细胞能够在脾脏内增殖、分化,替代或部分恢复肝脏合成、解毒和代谢功能.