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肝衰竭肝细胞移植治疗时的"种子细胞"
目前,对肝衰竭治疗主要依赖于原位肝移植,但这一治疗手段因存在多方面的困难而难以广泛开展.肝细胞移植的出现以其独特的优点将成为原位肝移植的辅助治疗甚至会替代原位肝移植.但是,肝细胞移植时佳细胞来源的选择又成为我们面临的一个紧迫的课题,现用于研究的细胞来源多为骨髓干细胞(包括间充质干细胞和造血干细胞)、脐血干细胞及胚胎干细胞等,且在实验研究方面都取得了不同程度的研究进展.通过对这几种细胞分化为肝细胞的实验研究进展作综述,为肝细胞移植时"种子细胞"的选择打下理论基础.
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诱导多功能干细胞源性肝细胞治疗肝功能衰竭的研究进展
肝细胞移植治疗多种原因造成的肝功能衰竭,在临床上已取得较好的疗效.诱导多功能干细胞(iPS)及其定向分化技术的进步,为获得大量、安全及具有生物学功能活性的肝细胞移植所需的种子细胞提供了一种新的方法.对iPS定向分化成肝细胞并应用于肝细胞移植治疗肝功能衰竭的研究进展进行综述.
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肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的研究
目的:探讨同种异体肝细胞经腹腔、脾腔移植对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用.方法:采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭,诱导后60小时,分4组进行治疗实验,Ⅰ组:脾内移植2×107肝细胞,同时肌肉注射环孢霉素A(CsA)10 mg/kg;Ⅱ组:脾内注射生理盐水1 ml,同时肌注CsA10 mg/kg;Ⅲ组:经腹腔移植2×107肝细胞,Ⅳ组:经腹腔注射生理盐水1 ml,观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化情况.结果:Ⅰ组大鼠存活率与Ⅱ组有明显差异(46.7%对13.3%P<0.05),肝脏功能及肝脏病理亦有改善,Ⅲ组大鼠存活率显著高于Ⅳ组(60%对13.3%P<0.01),肝脏功能及肝脏病理均有部分改善.结果:经腹腔、脾脏移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,部分改善肝功能及肝脏病理.
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肝细胞移植:临床应用及实验室研究
目的:对肝细胞移植的临床应用进行研究,该临床应用一方面要改变整体器官移植的形式,另一方面对遗传性肝脏代谢性疾病通过新分离的肝细胞或基因修正的肝细胞做肝脏直接的基础治疗.方法:按文献报道的肝细胞移植临床评价方法对7例重型肝炎应用肝细胞移植治疗的患者进行随访评价.结果:经核磁共振检查,证实移植后的肝细胞能够在脾脏内存活、增殖.7例患者有效率达71%.结论:临床肝细胞移植临床疗效确切,肝干细胞及具有横向分化潜能的骨髓干细胞的应用尚待深入研究.
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肝卵圆细胞研究进展
1956年,Farber在研究大鼠肝细胞癌变机制时,观察到一类体积较小,核较大,呈卵圆形,胞浆少而浅染的细胞,提出卵圆细胞的名称以区别这类细胞[1].此后研究发现此类细胞可分化为肝细胞和胆管细胞,因而认为它是一种干细胞,较早的文献中也称作胆小管肝细胞(ductular hepatocyte)、新生毛细胆管(neocholangioles)、肝细胞样细胞(hepatocyto-like cell)、胆道肝细胞(biliary hepatocyte)、过渡细胞(transitional cell)等[2].就其分化能力而言,肝卵圆细胞属于二级干细胞,即前体细胞(progenitor cell).它来源于原始干细胞,又可分化为多种成熟细胞[3,4].
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微囊化异种肝细胞移植对药物性肝衰的治疗作用及免疫隔离机制的初步研究
目的:探讨微囊化异种肝细胞脾内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用;测定受体存活率、肝功能的变化及CD4,CD8的变化.方法:海藻酸钠体外包裹经胶原酶技术制备的异种(豚鼠)肝细胞为供体,SD大鼠为受体,D-氨基半乳糖(19.5ml/kg)腹腔内一次性注射,制作肝衰模型.48h后将微囊化的游离豚鼠肝细胞(1.5×107)移植于大鼠脾脏内.以豚鼠裸肝细胞(1.5×107)移植及生理盐水1.2ml脾脏注射为对照.移植后14d观察存活率、肝功能及肝脏病理情况,免疫组化 ABC法测定CD4,CD8的变化.结果:微囊化肝细胞移植组存活率80%,明显高于生理盐水组(25%)和裸肝细胞移植组(70%).(P＜0.01 V P＜0.05).微囊肝细胞移植组14d总胆红素(7.99±0.58mg/L)和ALT(55±6.7u),明显低于生理盐水组(9.63±0.83mg/L V 91±8.0u)和裸肝细胞组(8.9±0.66mg/L V 74±7.1u)(P＜0.05 V P＜0.01).移植后12h,72h,14d分别测定受体脾脏CD4,CD8淋巴细胞,微囊化肝细胞组72h,14d呈阳性.裸肝细胞组均呈阳性.结论:大鼠药物性肝衰微囊化肝细胞脾内移植后维持存活率14d,细胞免疫参与排斥反应,肝细胞微囊化处理可延迟细胞免疫的发生时间.
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可用于移植的肝细胞研究进展
肝细胞移植作为治疗暴发性肝功能衰竭及各种终末期肝病一种潜在方法,具有创伤小、安全简单、可一肝多用、重复移植、抗原性低等优点.可以用作移植的肝细胞种类很多,目前也有很多关于这方面的报道,本文就可用于移植的肝细胞的研究进展做一简单总结.
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FTY720对大鼠肝细胞移植后脾脏T细胞亚群的实验研究
目前，肝细胞移植已经成为继原位肝移植后又一治疗各类肝功能衰竭及遗传代谢性肝脏疾病的有效方法，但是如何提高肝细胞移植的成活率成为医务工作者需解决的棘手问题。新型免疫抑制剂FTY720是一种新合成的，将冬虫夏草提取物中具有免疫抑制作用的成分多球壳菌素（ISP-I）进行结构改造［1］，其在保护移植器官方面有良好的效果。本研究主要通过动物实验探究新型免疫抑制剂FTY720在保护肝脏移植方面的免疫耐受的作用机制。
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FTY720在同种肝细胞移植大鼠中的免疫抑制作用
FTY720是一种新合成的免疫抑制剂,由冬虫夏草提取物中的ISP-1经结构修饰而成,具有突出的免疫抑制功能.本实验旨在评价FTY720在大鼠肝细胞移植治疗大鼠肝功能衰竭时的免疫抑制作用及对预后的影响.
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胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估
背景:体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道,但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚.目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况.设计:随机对照动物实验.单位:中山大学附属第二医院小儿外科.材料:选用BALB/c小鼠24只为受体,鼠龄6～8周,体质量20～ 35 g,雌雄不拘购自广州市实验动物中心.实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成.小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供.方法:实验于2006-07/2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成.将24只小鼠随机分为2组:肝再生模型+干细胞移植组和肝切除+干细胞移植组,每组12只.前组分两次按50 mg/kg剂量腹腔内注射倒千里光碱(retrorsine) ,间隔2周,第2次注射4周后行70%肝部分切除制造肝损伤;然后经门静脉分别移植1×105羟基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.后组在行70%肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.主要观察指标:荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况.2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况.将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内,将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照,观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况.结果:①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况:CFDA SE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布.2周后,肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大,且可见类似肝索样结构排列.②肝功能:共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明,受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号(呈黄色荧光),肝再生模型+干细胞移植组和肝切除+干细胞移植组血清白蛋白水平则无明显差异(P > 0.05).③肝干细胞移植安全性:6周内未见畸胎瘤形成,而将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成.结论:胚胎干细胞源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能;且此移植安全性较好.
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肝细胞移植治疗慢性乙型重型肝炎:2年随访
背景:近年来发展的肝细胞移植作为肝衰竭及遗传性代谢性肝脏疾病的一种治疗措施日益受到重视.目的:随访2年评估1例人肝细胞移植治疗慢性乙型重型肝炎患者的疗效.设计:病例报告,随访2年.单位:解放军第三○二医院感染九科及生物工程研究室.对象:纳入解放军第三○二医院感染住院的慢性重型肝炎患者1例.经实验室检查等确诊.用于移植的肝脏细胞由1名24岁供体提供,该供体生前签署过肝脏捐赠协议,且肝脏健康.方法:于2004-12在解放军第三○二医院放射科完成肝细胞体内移植.分离肝脏,获得人原代肝细胞并冷冻保存,复苏后经股动脉插管移植到受体脾脏,观察治疗前后患者临床症状及血液生化指标改变及脾脏核磁共振信号的改变.患者术后每半年复诊检测1次肝功能、凝血功能、B超及胃镜检查、MRI,随访2年.主要观察指标:患者肝功能、凝血功能、影像学指标、免疫学指标、并发症和排斥反应发生情况.结果:①人肝脏可获取(1～2)×1010肝细胞,复苏后肝细胞存活率在60%以上,移植的肝细胞数为2×109个.②移植后2个月,患者临床症状明显改善,血胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶明显降低,凝血酶原活动度明显升高.移植20个月后MRI提示脾脏内可见肝细胞信号.术后2年患者血总胆红素20 μmot/L,直接胆红素7μmol/L,丙氨酸氨基转移酶416.75 nka/L,天门冬氨酸氨基转移酶533.44 nkat/L,白蛋白37g/L,凝血酶原活动度90%,较术前明显改善(474.5,340.3 μmol/L,400.08,1 200.24 nkat/L,38 g/L,25%).患者可从事正常一般家务活动及轻体力工作.未出现腹水及肝功能衰竭等并发症,未出现移植排斥反应.患者多次复查B超及胃镜均提示肝硬化及食道静脉曲张有进一步加重的趋势,曾2次因食道静脉曲张破裂出血而住院治疗.结论:肝细胞体内移植可改善肝功能,且未见移植排斥反应,但不能解决门静脉高压.
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常规及新肝移植手术的现状
背景:经典术式和背驮式肝移植是目前肝移植的常规术式.目的:对目前肝移植的常规术式及新术式的发展及特点进行总结.方法:检索1900-01/2011-01 Pubmed、CNKI及肝移植注册网中与肝移植术式相关的文献,筛选出的35篇肝移植临床研究、综述、报告等文献进行分析.结果与结论:初检得到1 251篇文献,根据纳入标准保存35篇文献进行分析.经典术式和背驮式肝移植是目前的常规术式.新的移植术式不断出现:劈离式肝移植"一肝两受",节约肝源;活体肝移植取自活体肝,使用灵活,发展较快;自体肝移植难度大,应用少;多米诺肝移植能够有效治疗FAP,但也因难度大开展不多;肝细胞移植和异种肝移植基础研究尚浅.常规术式技术较为成熟,因在利用供肝、开拓肝源方面的优势,新的移植术式应用前景广阔,但仍需手术技术和基础研究上的突破.
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肝细胞移植及临床应用进展
国外已报道多例肝细胞体内移植成功治疗肝脏遗传代谢性疾病.1998年美国批准人类肝细胞体内移植,可作为终末期肝病的一项有效的治疗技术.肝细胞体内移植又称为肝细胞种植移植,就是将获得的正常肝脏或手术切下的部分肝组织,进行体外分离纯化,将分离纯化的肝细胞植入体内,恢复或重建肝功能,以暂时支持病人等待肝脏移植,或自行恢复患者的疾病不需进行原位肝移植.
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微囊化肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究
[目的]探讨微胶囊包裹肝细胞(microencapsulated hepatocyte)腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的机制与可行性,评价生物膜功能.[方法]D-氨基半乳糖(D-gal)诱发急性肝功能衰竭大鼠模型,分成4组:Ⅰ组生理盐水组;Ⅱ组空微胶囊对照组;Ⅲ组促肝细胞生长素(hepatocyte growth factor,HGF)组;Ⅳ组微囊化肝细胞组,观察2周存活率、肝功生化指标的变化,2周后收集腹腔内微胶囊,观察其形态与功能.[结果] Ⅳ组存活率较Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ组有明显改善(分别为66.7%、20.0%、 13.3%、20.0%,P<0.05),其他组间存活率无显著性差异;Ⅳ组自移植后24 h起白蛋白 (ALB)、总胆红素(TBIL)、凝血酶原时间(PT)较其他组有明显改善(P<0.05).2周后收集的空微胶囊形态完整,微囊内肝细胞部分保持存活.[结论] 微囊化肝细胞移植可以明显改善肝功能衰竭大鼠的存活率,显著改善肝脏生化功能.生物微胶囊可以有效阻断免疫排斥作用,保护移植肝细胞,有利于其发挥生物功能.
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微囊化肝细胞移植治疗暴发性肝衰竭大鼠的疗效观察
目的 观察微囊化肝细胞腹腔移植对暴发性肝衰竭大鼠的疗效.方法 气流法制备含肝细胞的微囊.D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,设模型组、裸肝细胞腹腔移植组、微囊化肝细胞移植组,每组8只测定ALT、AST、TBil水平.样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 肝衰竭模型建立后ALT、AST、TBil迅速升高(P＜0.05),并于24h～72h达高峰.同一时间点两两比较发现,Ⅱ、Ⅲ组在48h、72h、120h均明显低于Ⅰ组(P＜0.05),Ⅲ组在48h、72h均低于Ⅱ组(P＜0.05).Ⅲ组峰值较Ⅰ组前移.模型组、裸肝组和微囊组大鼠生存率分别是26.7%(4/15)、40.0%(6/15)、73.3%(11/15),微囊组较模型组、裸肝组大鼠生存率有显著性提高(P＜0.05).结论 HCT能降低FHF大鼠ALT、AST和TBil水平,减轻肝损伤程度,可能改善FHF预后.
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肝细胞制备和培养技术
目前肝细胞的研究主要集中在肝细胞生理、病理生理研究,生物人工肝及肝细胞移植研究等方面.
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肝细胞移植治疗肝硬化的疗效
目的 建立SD大鼠药物性肝硬化模型,探讨原代肝细胞移植治疗大鼠肝硬化的疗效.方法 经四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCL4)诱导大鼠肝硬化模型,将40只模型大鼠分为2组,每组20只,Ⅰ组经脾尾注射约2×107个肝细胞,Ⅱ组经脾尾注射0.4 ml Hank's液.观察每组大鼠的存活情况及肝功能变化；HE染色观察脾脏病理变化；免疫荧光观察植入的肝细胞在大鼠脾内合成白蛋白(Serum albumin level,ALB)的功能.结果 经CCL4诱导10周后,大鼠肝脏经HE染色发现假小叶形成,表明成功建立了肝硬化模型；移植术后8周,Ⅰ组大鼠存活率(75％)显著高于Ⅱ组(35％),差异有统计学意义(P＜0.01)；Ⅰ组大鼠的血清ALB水平较Ⅱ组明显升高(P＜0.05),血氨(Serum ammonia level,AMM)水平较Ⅱ组明显降低(P＜0.05)；Ⅰ组大鼠移植术后1、8周,大量肝细胞在脾脏红髓中定植下来；Ⅰ组大鼠移植术后5周,植入的肝细胞在大鼠脾内具有合成白蛋白的功能.结论 CCL4能稳定诱导肝硬化动物模型；同种异体肝细胞移植能提高肝硬化大鼠的生存率,并改善肝性脑病和低蛋白血症.
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肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效观察
目的 观察肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效,探讨原代肝细胞提取方法,观察体外培养的大鼠肝细胞生存情况.方法 利用胶原酶消化法分离大鼠肝细胞,用D-氨基半乳糖(D-GalactosamineN,D-GalN)制作大鼠急性肝功能衰竭模型,并以此模型为基础行大鼠同种异体肝细胞移植实验.结果 分离的肝脏实质细胞(Hepatocyte)的存活率在87%-95%.平均每只大鼠肝脏可分离出7.8×107个肝脏实质细胞.肝细胞移植组大鼠7天的存活率为54.2%(13/24),对照组8.3%(2/24),移植组大鼠存活率与非移植组大鼠存活率之间具有显著性差异(P＜0.005).结论 经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善D-GalN诱导的急性肝衰竭大鼠的存活率,腹腔肝细胞移植是治疗急性肝衰竭安全有效的方法.
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聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞移植对大鼠急性肝衰竭的治疗作用
目的:探讨胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞腹腔内移植对急性肝衰竭(ALF)大鼠的治疗效果.方法:D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型.48 h后分别将培养24 h的猪肝细胞悬液(含5.0×107个肝细胞,Ⅰ组)、Ⅰ型胶原凝胶固定培养24 h的猪肝细胞(含5.0×107个肝细胞,Ⅱ组)、Ⅰ型胶原凝胶包埋的PLA-O-CMC纳米粒子培养24 h的猪肝细胞(含5.0×107个肝细胞,Ⅲ组)移植到ALF大鼠腹腔内,并以RPMI1640腹腔内注射作为对照(Ⅳ组).观察移植后大鼠14 d存活率,血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、血氨(NH3)的变化和移植肝细胞的病理变化.结果:移植后14 d ALF大鼠的存活率:Ⅰ组为56.25%,Ⅱ组为62.5%,Ⅲ组为75%,Ⅳ组为18.75%,各移植组高于对照组(P＜0.05).移植后1～5 d,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组各项肝功能指标改善明显优于Ⅳ组,Ⅲ组肝功能恢复好于同时间其它移植组,肝功能恢复从快到慢依次为Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ、Ⅳ组.Ⅲ组移植肝细胞存活时间长,炎症浸润轻.结论:应用胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞腹腔内移植治疗ALF大鼠能显著改善肝功能、提高生存率,聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子用于异种肝细胞移植具有良好的生物相客性,并能延长移植肝细胞的存活时间.
关键词： 肝细胞移植 急性肝衰竭 聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖 纳米粒子 -
肝细胞移植临床研究现状
肝细胞移植被认为是一种有前景的治疗方法.它可作为桥梁治疗,使肝衰竭患者等到供体肝脏,另一方面对遗传性肝脏代谢性疾病,可通过新分离的肝细胞或基因修正的肝细胞做肝脏直接的基因治疗.此文对近年来人体肝细胞移植的临床试验进行了回顾.
关键词： 肝细胞移植 临床试验 肝衰竭 遗传性肝脏代谢性疾病
