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红霉素耐药肠球菌的质粒接合试验
目的 研究儿童临床分离的30株肠球菌,红霉素耐药性在同属同种、同属异种和异属细菌之间的传递.方法 使用临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的琼脂稀释法筛选30株耐红霉素的肠球菌,通过滤膜接合法进行质粒接合转移试验,采用PCR检测供体菌、受体菌和接合子ermB基因和转座子Tn1545、Tn917.结果 13株粪肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到13株接合子,红霉素小抑菌浓度(MIC)≥512 μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌阴性外,其余的12株接合子全部携带ermB基因,且ermB基因均同时存在于转座子Tn1545和Tn917;16株屎肠球供体菌和1株海氏肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到17株接合子,红霉素MIC≥512 μg/ml,除原供体菌1株屎肠球菌阴性外,其余16株接合子全部携带ermB基因,并且有11株接合子ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917;30株肠球菌通过质粒接合转移试验后得到的30株金黄色葡萄球菌接合子,红霉素MIC≥512 μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌和1株屎肠球菌阴性外,其余的28株接合子全部携带ermB基因,其中ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917的为23株,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917.结论 肠球菌对红霉素的耐药性可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递;红霉素的耐药性与ermB基因存在一致,ermB基因与Tn1545和Tn917密切相关,ermB基因与Tn1545和Tn917可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递.
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一株对3种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究
目的：研究临床分离的一株肺炎克雷伯菌（K30）对碳青霉烯类抗菌药物耐药的机制。方法采用琼脂稀释法测定肺炎克雷伯菌K30对13种抗菌药物的低抑菌浓度（MIC）；用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶；聚合酶链反应（PCR）检测A类碳青霉烯酶（KPC）、B类碳青霉烯酶（NDM、IMP、VIM、SIM）、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs，CTX、TEM、SHV）、头孢菌素酶（AmpC，FOX、EBC、ACC、DHA、CIT、MOX）基因和Ⅰ类整合子；实时荧光定量PCR分析肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的mRNA表达；利用质粒接合试验研究肺炎克雷伯菌K30耐药基因的水平传播能力。结果药物敏感性试验显示，肺炎克雷伯菌K30对包括碳青霉烯类抗菌药物在内的11种抗菌药物均耐药，仅对头孢西丁钠中介，对阿米卡星敏感。肺炎克雷伯菌K30的改良Hodge试验为阳性。PCR扩增A类碳青霉烯酶基因KPC和2种ESBLs基因CTX、SHV为阳性，其PCR产物经测序后同GenBank数据库比对证实分别为KPC-2、CTX-M3和SHV-38。其余耐药基因和Ⅰ类整合子扩增均为阴性。与肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）相比，膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的表达没有降低。质粒接合试验未成功获取结合子。结论临床分离的一株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌主要耐药机制与产A类碳青霉烯酶KPC-2合并产ESBLs有关，且KPC-2可能不由质粒介导。
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肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要类型和流行病学分析
目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌（CRE）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法收集上海瑞金医院2011年5月至2013年6月对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤22 mm的CRE共114株，采用PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶基因（blaKPC 、blaIMP 、blaOXA‐48、blaVIM 、blaNDM ）并对PCR扩增产物进行测序；所有菌株均进行了质粒接合试验；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对KPC‐2检测阳性的肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果114株CRE以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和肠杆菌属细菌为主，其中98株产碳青霉烯酶，以K PC‐2酶为主要类型（78／98）、其次为IM P‐4酶（15／98）， IMP‐8酶（2／98），1株肺炎克雷伯菌同时携带有 blaKPC‐2和 blaIMP‐4基因，还发现4株产 NDM‐1酶的菌株，未见OXA‐48酶及VIM酶阳性菌株。21株（21．4％，21／98）CRE菌株转移接合试验成功。PFGE结果显示49株 blaKPC‐2阳性肺炎克雷伯菌共分为12个型，其中34株属于同一谱型（type A ）。CRE菌株主要分离自ICU ，共39株，其次为普外科14株，血液科11株，呼吸科9株，其余科室共41株。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型以blaKPC‐2为主，其次为blaIMP‐4，并发现4株blaNDM‐1阳性CRE菌株，产KPC‐2酶的肺炎克雷伯菌在外科ICU、呼吸科及胸外科等科室间存在克隆株的流行传播，应采取及时有效的防控措施。
