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氟化钠对大鼠成骨肉瘤细胞增殖活性及碱性磷酸酶活力和骨钙素mRNA表达的影响
目的 探讨氟化钠(NaF)对成骨样细胞大鼠骨肉瘤(UMR-106)细胞增殖活性及主要成骨活性标志物碱性磷酸酶(ALP)活力和骨钙素(BGP)mRNA表达的影响.方法 将处于对数生长期的UMR-106细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、5×10、102、5×102、1×103、5×103、1×104、2×104、4×104、8×104 μmol/L NaF的DMEM培养液中孵育24、48 h,采用CCK-8检测细胞活性.将处于对数生长期的UMR-106细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、1×103、2×103、4×103 μmol/L NaF的DMEM培养液(不含FBS)继续培养12、24、48 h,测定细胞培养液和细胞ALP的活力及细胞中BGP mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,1×103～8×104 μmol/L NaF染毒24 h和5×10～8×104 μmol/L NaF染毒48 h时大鼠UMR-106细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).5×10、1×103、5×103、1×104、2×104μmol/L NaF染毒48 h时大鼠UMR-106细胞的存活率均低于染毒24 h时,差异有统计学意义(P＜0.05).各浓度NaF染毒组UMR-106细胞培养液和细胞中ALP活力均较对照组高,除1×103 μmol/L NaF染毒24h的细胞培养液和1×103 μmol/L NaF染毒48 h的细胞内ALP活力外,差异有统计学意义(P＜0.05).随着NaF染毒浓度的升高,UMR-106细胞培养液和细胞中ALP活力均呈上升趋势;随着NaF染毒时间的延长,细胞培养液中ALP的活力呈上升趋势,而细胞中ALP的活力呈先升高后下降的趋势.2×103、4×103 μmol/LNaF染毒组UMR-106细胞的BGP mRNA表达水平均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05).随着NaF染毒浓度的升高,UMR-106细胞BGP mRNA的表达水平呈上升趋势;随着NaF染毒时间的延长,UMR-106细胞BGPmRNA的表达水平呈下降趋势.结论 在本实验浓度下,NaF对UMR-106细胞的增殖呈抑制作用,但可促进其成骨活性标志物ALP活力及BGP mRNA的表达.
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caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡
目的:探讨caspase-6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用.方法:应用RT-PCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中caspase-6基因的表达水平.以腺病毒adv5作载体,构建含caspase-6基因的转基因载体,用脂质体包裹法转染SOSP-9607细胞株,用RT-PCR方法检测转染后SOSP-9607细胞中caspase-6基因的表达.用MTT法检测转染caspase-6对SOSP-9607细胞株生长的影响.结果:成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中未检出caspase-6表达.RT-PCR法证实转染caspase-6后SOSP-9607中caspase-6表达显著增强,MTT检测显示对SOSP-9607细胞的生长有抑制作用,形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征.结论:caspase-6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.
关键词： 成骨肉瘤细胞 细胞凋亡 caspase-6基因 基因转染 -
解毒化瘀方对成骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究
骨肉瘤是原发于骨的恶性肿瘤,多发于青少年及儿童,约占儿童肿瘤的5%.由于术后化疗,特别是新辅助化疗的应用,过去20年内已使骨肉瘤患者的5年生存率提高到60%～70%.近年随着新辅助化疗的广泛开展,其保肢率和生成率均有明显提高,但临床上对多药耐药病例逐渐增多[1].解毒化瘀方是本院治疗骨肉瘤的经验方,临床应用能有效缓解疼痛,减轻局部肿胀,提高患者生活质量和生存率.作者观察了其对体外培养的成骨肉瘤细胞系U2-OS的生长影响.
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miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞生长增殖的影响
目的:探讨miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响.方法:运用miR-124的模拟物或抑制剂分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞,分别为实验组和对照组(脂质体2000),采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况.结果:对照组吸光度值(A值)在24h、48h和72h分别为(0.261±0.017)、(0.379±0.021)、(0.414±0.031);miR-124模拟物可抑制MG-63细胞增殖,其A值分别降至(0.149±0.006)、(0.163±0.007)、(0.212±0.009),差异具有显著统计学意义(P＜0.01)；miR-124抑制剂可促进MG-63细胞增殖,其A值分别增至(0.313±0.016)、(0.542±0.033)、(0.713±0.041),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:miR-124可抑制人成骨肉瘤细胞生长增殖活性,可作为一个抑瘤基因参与成骨肉瘤的发生与发展.
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紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡
目的:探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制.方法:应用形态学观察,MTT分析法,DNA梯状电泳,流式细胞术检测术,研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的细胞毒效应.结果:紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显,存活率明显下降.形态学观察,DNA梯状电泳,流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡.结论:紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP-9607有较强的杀伤作用,并且这种作用主要是通过诱导凋亡实现的.
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GFP共表达的重构型Caspase-3基因对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用
目的探讨GFP共表达的caspase-3基因的表达对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用.方法应用DNA重组技术将重构型caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞SOSP-9901,通过RT-PCR方法检测转染后caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化;MTT法检测转染caspase-3基因对SOSP-9901细胞生长的影响.结果 RT-PCR方法证实重构型caspase-3基因可在SOSP-9901细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,MTT法结果表明caspase-3对SSOP-9901的细胞生长有抑制作用.结论重构型caspase-3对成骨肉瘤细胞SOSP-9901的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.
关键词： 重构型Caspase-3 凋亡 成骨肉瘤细胞 -
高低不同转移特性人骨肉瘤克隆细胞株的建立
目的建立高低不同转移特性的人骨肉瘤克隆细胞株. 方法通过克隆技术和细胞电泳,从我们建立的骨肉瘤细胞系LTH-OS(简称S)中获得两株细胞S1和S2,测定两种细胞的增殖率,利用软琼脂克隆形成率和裸鼠体内成瘤实验,比较细胞的转移特性. 结果 S1的细胞电泳率高达1.0,S2低为0.70,S1的群体倍增时间为30.8 h,S2为45.0 h. 克隆形成率分别为5.2%和2.1%,裸鼠右后肢皮下接种S1和S2发现S1成瘤快,且瘤体大,原位接种时S1出现广泛的肺转移. 结论 S1和S2是从S母细胞中分离出的具有不同转移特性的细胞株.
