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副溶血弧菌的溶血毒素研究现况
副溶血弧茵可引起食物中毒、反应性关节炎和心脏疾病,其致病因子是该茵产生的多种溶血毒素,主要有不耐热溶血毒素、耐热直接溶血毒素、相对耐热直接溶血毒素.本文对这3种溶血毒素研究现况作了综述.
关键词： 副溶血弧菌 不耐热溶血毒素 耐热直接溶血毒素 相对耐热直接溶血毒素 -
副溶血弧菌不耐热溶血毒素的表达与纯化
目的表达和纯化融合表达的副溶血弧菌不耐热溶血毒素.方法将表达载体pET32a+-tlh转化大肠杆菌BL21(λDE3),诱导表达副溶血弧菌不耐热溶血毒素,表达产物用聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,8 mmol/L的尿素溶解包涵体,用6×his组氨酸蛋白质镍亲和层析树脂亲和层析纯化目的蛋白.结果诱导表达的目的蛋白以包涵体形式存在,其含量约占菌体总蛋白的10%,纯化获得了高纯度的融合表达的副溶血弧菌不耐热溶血毒素.结论转化有重组质粒pET32a+-tlh的BL21(λDE3)可稳定高效地表达目的蛋白,采用低浓度的咪唑、β-巯基乙醇和Tritonx-100等方法减少杂蛋白污染,亲和层析纯化目的蛋白,可获得高纯度的目的蛋白.
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荧光聚合酶链反应检测副溶血弧菌TLH与TDH
副溶血弧菌是引起我国沿海地区食物中毒的首要病原菌,主要致病因子是副溶血弧菌产生的溶血毒素,主要的溶血毒素有耐热性溶血毒素(TDH)和TDH相关的溶血毒素(TRH),此外,副溶血弧菌还可产生不耐热溶血毒素(TLH).本实验采用TLH、TDH基因作为副溶血弧菌的靶序列,拟采用Taqman探针技术定量检测副溶血弧菌.
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抗副溶血弧菌TLH蛋白多克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测法的研究
目的 分别制备抗副溶血弧茵及其不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)的多克隆抗体,建立检测副溶血弧茵TLH的酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法.方法 以副溶血弧茵及其TLH分别免疫健康雄性新西兰大白兔和雌性BALB/C小鼠,制备兔抗副溶血弧茵多克隆抗体及小鼠抗TIM多克隆抗体,以间接ELISA法检测两种抗体效价,并以棋盘法筛选两种多克隆抗体用于夹心检测TLH的效价.结果 兔抗副溶血孤茵多克隆抗体效价达1:6400,鼠抗TLH多克隆抗体效价为1:102 400,经筛选确定以1:800稀释的兔抗副溶血弧茵多克隆抗体包被酶标板.与1:1600稀释的鼠抗TLH抗体建立了ELISA双抗体夹心法.结论 兔抗副溶血弧茵多克隆抗体可与TLH呈特异性反应,以此建立的双抗体夹心法检测副溶血弧茵TLH可获较满意结果,此实验可为进一步建立简便、快速的副溶血弧茵检测方法奠定基础.
