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碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价
目的 从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究.方法 赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15).采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征.采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价.结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3％),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3) G1c(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖.RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性.结论 赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂.
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从喜树叶中碱法提取喜树碱新工艺
目的探讨以喜树为原料提取喜树碱的工艺条件.方法通过均匀试验设计法.结果确定了以稀NaOH溶液为溶剂提取喜树碱的佳工艺条件:提取溶剂浓度为0.3%,提取时间为3 h,NaOH溶液用量1 6 mL/g原料·次.结论首次研究了以稀NaOH溶液为喜树碱提取溶剂,从很少被利用的喜树叶中提取喜树碱的工艺条件.结果表明喜树叶的喜树碱提取率达到0.1%以上,是一个较好的喜树碱提取原料.利用此方法提取喜树碱生产成本低、提取率高、防火等级低,是相对于乙醇提取更为优秀的喜树碱提取方法.
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一大分子量香菇多糖的提取分离纯化
目的 研究从香菇子实体中提取分离纯化得到分子量在4.0×105 Da以上的精制香菇多糖.方法 用碱提-醇沉法提取香菇粗多糖,设计正交试验优化碱提工艺,并通过脱色、超滤分离纯化得到分子量在4.0×105Da以上的精制香菇多糖.苯酚-硫酸法测定总糖量,高效凝胶色谱法测定分子量,紫外光谱检测蛋白质和核酸.结果 正交试验证实碱的浓度是影响提取工艺的主要因素,优碱提工艺为提取温度为25℃,碱的质量分数为5％,提取时间为24h,苯酚-硫酸法测定超滤后香菇多糖的含糖量为95.00％,高效凝胶色谱法测定香菇多糖的重均分子量为6.054×105Da,紫外光谱中在260 nm、280 nm波长处没有吸收峰.结论 碱提-醇沉法提取香菇粗多糖工艺简单,纯化后的香菇多糖为分子量均一的多糖组分,不含核酸和蛋白质,为以后的结构研究和药理药效研究奠定了基础.
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响应面法优化超声辅助碱提大花红景天多糖
目的 采用响应面法优化超声辅助碱提大花红景天多糖.方法 以大花红景天多糖得率为指标,以NaOH溶液浓度、超声时间和超声温度为因素,按照Box-Benhnken组合试验设计来优化提取工艺.结果 佳条件为NaOH溶液浓度0.25 mol/L,超声温度47.15℃,超声时间27.28 min,得率达29.41％,较水提法和超声波辅助水提法分别增加了1.50倍和0.73倍.结论 该方法可提高大花红景天多糖的得率.
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玉米芯来源的均一木聚糖的制备方法及其结构鉴定
从玉米芯来源提取纯化得到了均一的木聚糖(UxY),并对其结构进行了鉴定.采用反复碱提醇沉的方法从玉米芯中提取出了均一的水不溶性木聚糖.采用了液相色谱法、红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱等方法确定了玉米芯来源的均一木聚糖的结构.结果表明:均一木聚糖只含木糖一种单糖;紫外光谱分析在260 nm和280 nm处没有吸收峰,证实了均一木聚糖不含有核酸和蛋白质;通过红外光谱法分析均一木聚糖除了具有一般多糖的特征吸收峰外,在890 cm-1附近有明显吸收峰,而在840 cm-1附近没有明显吸收峰,可以判定均一木聚糖为β型;1H NMR进一步确证了均一木聚糖为β型,13C NMR,H-H COSY,和HSQC明确解析出各个H和C所属的位置,证明均一木聚糖为β→1,4连接.
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碱提灰树花多糖的分离纯化及其性质研究
灰树花液体深层发酵菌丝体经热水完全提取,剩余残渣用2%NaOH浸泡提取,提取液分别经乙醇沉淀,H2O2除色素,去蛋白,透析,DEAE Sepharose Fast Flow柱层析分离纯化得到碱提水溶性多糖GAP.紫外光谱分析表明,多糖不含核酸和蛋白质.经HPLC检测GAP为单一多糖,其相对分子量为2×104.红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰,含有α-型糖苷连接键.气相色谱分析GAP单糖组成为:鼠李糖,阿拉伯糖,木糖,甘露糖和葡萄糖,其摩尔比为0.064:0.044:0.056:1.0:1.26
