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不同加工方式对鹿茸中粗蛋白与水解氨基酸量的影响研究
目的 比较不同加工方式及不同部位梅花鹿鹿茸中蛋白质、氨基酸的量差异,旨在为鹿茸的加工及综合利用提供参考依据.方法 采用杜马斯燃烧法、阳离子交换色谱法分别对不同加工方式及不同部位的梅花鹿鹿茸中粗蛋白、17种水解氨基酸的量进行测定,比较其差异.结果 带血茸粗蛋白的量粉片部位高于排血茸(P＜0.01),蜡片、蜂片部位差异均不显著(P＞0.05);排血茸与带血茸蜡片、粉片、蜂片部位氨基酸的量差异均不显著(P＞0.05).冻干茸粗蛋白的量蜡片部位低于煮炸茸(P＜0.05),粉片部位高于煮炸茸(P＜0.01),蜂片部位高于煮炸茸(P＜0.05);冻干茸氨基酸的量蜡片部位低于煮炸茸(P＜0.01),粉片部位与煮炸茸差异不显著(P＞0.05),蜂片部位高于煮炸茸(P＜0.01).鹿茸粗蛋白与氨基酸的量均表现为蜡片部位显著高于粉片、蜂片部位(P＜0.05),粉片部位与蜂片部位差异不显著(P＞0.05).结论 不同加工方式的鹿茸粗蛋白与氨基酸的量均有差异,整体表现为带血茸高于排血茸,冻干茸高于煮炸茸;蜡片部位显著高于粉片、蜂片部位,粉片与蜂片部位差异不显著;粗蛋白和氨基酸在冻干茸不同部位的分布比煮炸茸更为均匀.
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柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量比较
目的：：比较柱前衍生高效液相色谱法( HPLC法)和柱后衍生阳离子交换色谱法( AARO法)测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量的差异。方法：HPLC法采用 C18柱和2,4-二硝基氯苯(DNCB)进行柱前衍生化,加入0.1 mol?L-1硼砂缓冲液(pH=9.1),进行测定；AARO法采用强酸性阳离子交换色谱柱和柱后衍生化,直接测定。结果：柱前衍生高效液相色谱法和柱后衍生阳离子交换色谱法的重复性考察,AARO法各组分RSD为0.91%~1.84%,HPLC法RSD为1.04%~1.87%。结论：柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液种18种氨基酸,均可采用,两种方法对测定上述各氨基酸结果一致性较好,但柱前衍生HPLC法可能易造成衍生不彻底和衍生物不稳定。
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柱后衍生阳离子交换色谱法同时测定新疆产贝母中17种氨基酸的含量
目的:建立同时测定新疆产贝母中17种氨基酸含量的方法.方法:采用阳离子交换色谱柱分离17种氨基酸;采用柱后衍生阳离子交换色谱法测定药材中17种氨基酸的含量:色谱柱为LCAK 06/Na柱,流动相A为柠檬酸三钠11.9 g、柠檬酸6 g、苯酚1 g,加水溶解,再加65 mL甲醇和6 mL浓盐酸,加水定容(调pH至3.4),流动相B为柠檬酸三钠11.9 g、氢氧化钠2.8 g、苯酚1 g、硼酸5.0 g,加水溶解并定容(调pH至10.8)(梯度洗脱),流速为0.45 mL/min(A泵)、0.25 mL/min(M泵),检测波长为440 nm(脯氨酸)、570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL.结果:天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和脯氨酸检测浓度线性范围均为20~400 nmol/mL(除胱氨酸10~200 nmol/mL)(r均大于0.9890);精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2.0%;检测限除胱氨酸外(0.08 nmol/mL)其余氨基酸均为0.16 nmol/mL;加样回收率为98.5%~99.5%(RSD为0.06%~0.21%,n=6).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于新疆产贝母中氨基酸含量的同时测定.
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柱后衍生阳离子交换色谱法测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸含量
目的:建立柱后衍生阳离子交换色谱方法,测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸的含量.方法:样品加6 mol·L-1盐酸于110℃水解22 h.采用柱后衍生阳离子交换色谱法,对甘肃产紫斑牡丹花粉氨基酸的含量进行分析;色谱柱:LCAK06/Na型磺酸基强酸性阳离子交换树脂色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),梯度洗脱,其中A泵(溶液泵)流速为0.45 mL· min～1,M泵(茚三酮泵)流速为0.25 mL· min-1,检测波长为440 nm(脯氨酸)和570 nm(其余氨基酸),进样量为50 μL.结果:该测定方法中天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸的线性关系良好;精密度RSD范围为0.10％～ 1.6％,重复性RSD范围为0.20％～1.5％;平均回收率(n=6)在89.5％～98.2％之间,RSD在0.81％～2.9％之间.样品中所含氨基酸的范围为4.13～44.23 mg·g-1,破壁前后所测得氨基酸含量无显著差异.结论:所建立的分析方法可作为紫斑牡丹花粉中氨基酸的定量分析.
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平台化高通量pH梯度阳离子色谱法在单克隆抗体电荷异质性分析中的应用研究
目的:建立应用pH梯度分离的高通量、平台化高效液相阳离子交换色谱法,用于单克隆抗体电荷异质性分析.方法:利用不同pH的三羟甲基氨基甲烷、咪唑、哌嗪缓冲液组成pH梯度进行梯度洗脱,采用相同色谱柱、流动相和分离梯度对不同等电点的单抗进行分离.结果:用该法对美国药典收录的3种单抗一贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗进行检测,并与对应各论中记载的盐梯度方法比较,结果显示3种单抗主峰与酸区、碱区的分离度均有改善,贝伐珠单抗分离度分别提高了44％和500％;曲妥珠单抗分离度分别提高了83％和233％;利妥昔单抗酸区分离度由无法给出提高到0.7,碱区分离度提高了10％.针对贝伐珠单抗的方法进行再次优化(提高40％通量)并开展方法学验证.结果显示方法专属性良好,高温破坏后可观察到酸区和碱区杂质均有趋势性增加;精密度良好,重复性实验中主峰保留时间RSD为0.12％,中间精密度实验中酸区、主峰、碱区百分比峰面积RSD均小于2％;准确度良好,酸区、主峰、碱区在5个不同的浓度级别中回收率总体平均值分别为100.4％,101.0％,101.4％;线性良好,蛋白含量0.8～1.2 mg·mL-1范围内酸区、主峰、碱区峰面积均与样品浓度呈线性关系,主峰与碱区线性相关系数R2均大于0.999,酸区R2为0.988;耐用性良好,检测条件发生一定变化时,酸区、碱区和主峰的百分比峰面积测定RSD均小于3％.结论:建立的平台化pH梯度方法适用于不同单抗的电荷异质性分析,且具有良好的分离度,为单抗的研究和开发提供了一种通量更高的分离手段和分析方法.
