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重组人细胞因子基因在转基因中药细胞中的瞬时表达
目的利用转基因中药表达人细胞因子基因,探讨培育基因修饰(GM)中药的可行性.方法将体外扩增分别获得的人α-干扰素基因与RANTES基因酶切回收后插入中间载体,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定重组子.由大肠杆菌分离重组质粒并导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens,通过加入卡那霉素(Km)和利福平(Rif)筛选含重组双元载体的转化子,用叶盘共培养法转化苦瓜和夏枯草外植体.结果经RT-PCR检测到人α-干扰素基因与RANTES基因在中药转化愈伤组织中的瞬时表达.结论首次报道了重组人α-干扰素基因与RANTES基因在转基因苦瓜和夏枯草细胞中的表达,为探讨利用转基因中药抗病毒尤其是抗艾滋病开创了新途径.
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人β-趋化因子基因在植物细胞表达的定量测定
为了利用植物细胞作为生物反应器生产基因工程药用蛋白,将克隆的人β-趋化因子RANTES基因经Ti质粒衍生的双元表达载体导入根癌农杆菌(A.tumefaciens)菌株.通过共培养法转化烟草(N.tobacum)外植体,以抗生素筛选转化细胞并再生转基因植株.经生物素标记探针杂交确认RANTES基因的整合,用免疫斑点印迹法对重组基因表达水平进行定量测定.结果表明,人RANTES基因已在烟草细胞中成功地整合与表达,这为在植物细胞中大量生产基因重组药物打下了基础.
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RANTES及其受体CCR5基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究
糖尿病肾病(DN)的确切发病机制至今尚未完全阐明,除与糖尿病的病程、代谢控制不良及血流动力学改变有关外,遗传易感性已经被证实是DN发生的一个重要因素[1].我们在研究RANTES基因启动子G403A多态性与2型DN关系的基础上[2],研究同一人群CCR5基因启动子区G59029A基因多态性与2型DN的相关性,及初步探讨RANTES G403A及其受体CCR5 G59029A基因多态与2型DN的相关性.
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RANTES基因多态性表达与肺结核的相关性研究进展
为探讨RANTES基因多态性与肺结核遗传易感性的关系,采用PCR技术检测肺结核患者组和正常对照组的RANTES基因启动子-403G/A和-28C/G与内含子In1.1T/C位点的基因型,分析其多态性的表达.此研究对阐明肺结核发生的分子机制、评估其发生、发展及预后以及在预防和治疗中建立基于免疫和遗传学的个体化方案具有重要意义.本文就近年来RANTES基因多态性的表达与肺结核的相关性研究进展做一综述.
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PCR-RFLP技术检测RANTES基因启动子区-28C/G多态性的实验研究
目的 为研究PCR-RFLP技术检测RANTES基因启动子区-28 C/G多态性的适实验条件.方法 对主要影响因素设系列浓度梯度进行PCR后观察电泳结果,设置不同的体系对RFLP方法进行了研究.结果 适变性温度为94℃;适退火温度为60℃;适引物浓度为0.6 μmol/L;经济有效的酶切体系为12μL体系中加4 μL产物用3 U的酶消化.结论 佳的实验条件的摸索是进行大批量实验研究的关键.
关键词： 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 RANTES基因 实验条件 -
RANTES基因启动子区-28C/G多态性与糖尿病肾病相关性研究
目的探讨RANTES基因启动子区-28C/G多态性与中国昆明地区汉族人糖尿病肾病(DN)的相关关系.方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,在中国昆明地区汉族人中对178例2型糖尿病患者(其中正常白蛋白尿即DN0组58例,微量白蛋白尿即DN1组70例,大量白蛋白尿即DN2组50例)和67例健康对照者的RANTES基因启动子区-28C/G多态性进行检测,并比较分析各组间基因型频率和等位基因频率以及相关临床资料.结果(1)RANTES启动子区-28G等位基因频率在NC、DN0、DN1及DN2组中分别为6%、7.8%、8.6%和8.6%,各组间基因型频率和等位基因频率差异均无显著性(P＞0.05).(2)DN2组的年龄和WHR高于DN0组,空腹胰岛素水平高于DN1,DN2组的病程和SBP高于DN0和DN1组,均具有统计学意义.结论在中国昆明地区汉族人中,RANTES基因启动子区-28C/G多态性可能与DN不相关.
