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去卵巢大鼠海马 CA1/CA2区ERK1/2的基础活性和诱导活性降低
目的:观察去卵巢大鼠空间学习记忆能力的变化与海马中胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的关系.方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,饲养4个月后采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,于测试前将各组组内又分为训练组和非训练组,训练组用于测定经学习记忆训练诱发的ERK1/2的诱导活性,非训练组用于测定未经学习记忆训练时的ERK1/2的基础活性,Weatern blot方法检测海马CA1/CA2区p-ERK1/2蛋白及Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的变化.结果:①与假手术组比较,去卵巢组大鼠的空间学习记忆能力明显下降(P＜0.05).②各组中的训练大鼠p-ERK1/2蛋白水平明显高于非训练大鼠(P＜0.05).③去卵巢组训练及非训练大鼠的p-ERK1/2蛋白水平均相应低于假手术组训练及非训练大鼠(P＜0.05).④去卵巢组RKIP蛋白表达水平明显高于假儋手术组(P＜0.05).结论:雌激素缺乏大鼠的空间学习记忆能力下降与海马CA1/CA2区ERK1/2通路的基础和诱导活性降低以及该通路的抑制蛋白RKIP的表达增加有关.
关键词： 雌激素缺乏 海马 学习记忆 胞外信号调节激酶1/2 Raf激酶抑制蛋白 -
血管紧张素-(1-7)对自发性高血压大鼠颈动脉去外膜后蛋白激酶C-ζ和胞外信号调节激酶1/2蛋白表达的影响
目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对自发性高血压大鼠(SHR)一侧颈动脉外膜去除后蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)和胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响.方法 24只雄性SHR右侧颈动脉外膜去除后,随机分为3组(每组8只):对照组、Ang-1(1-7)组和Ang779[Ang-(1-7)拮抗剂]组.另选8只WKY大鼠作为WKY组.机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜,左侧作假手术对照.采用微渗泵植入技术经颈静脉给药2周,鼠尾袖法测量尾动脉收缩压(SBP),放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度.取双侧颈动脉制成光镜标本,病理图像分析系统测定颈动脉腔横截面积(LA)、内弹力层围绕面积(IELA)、外弹力层围绕面积(EELA),评价内膜和中膜增生状况.免疫组织化学方法测定双侧颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达.结果 (1)各组SBP于给药前差异无统计学意义(P＞0.05),给药2周后,Ang-(1-7)组SBP较Ang779组和对照组显著下降(均P＜0.01);(2)对照组和Ang779组颈动脉内膜增生去外膜侧较未去外膜侧差异有统计学意义(均P＜0.01),未去外膜侧和去外膜侧颈动脉内膜增生Ang-(1-7)组较对照组和Ang779组明显改善(P均＜0.01);(3)与未去外膜侧比较,去外膜侧颈动脉Ang Ⅱ浓度显著增高(P＜0.01);(4)颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达对照组和Ang779组去外膜侧较未去外膜侧显著增高(均P＜0.01),未去外膜侧和去外膜侧颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达Ang-(1-7)组较对照组和Ang779组显著减少(均P＜0.01).结论 Ang-(1-7)可通过减少PKC-ζ及ERK1/2蛋白表达而实现对SHR去外膜后颈动脉内膜增生的抑制作用.
关键词： 血管紧张素-(1-7) 外膜 颈动脉 蛋白激酶C-ζ 胞外信号调节激酶1/2 大鼠 -
磷酸化胞外信号调节激酶1/2参与雌激素对切口痛大鼠的伤害性感受调节
目的 通过大鼠切口痛模型来探讨磷酸化胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)参与雌激素对伤害性感受调节的作用机制.方法 成年Sprague-Dawley雌鼠32只,在卵巢切除术(OVX)后第15天建立切口痛模型,随机分为4组,每组8只:雌激素替代(50 μg雌二醇溶于100 μL橄榄油)+切口痛假手术组(E+S组)溶剂替代(100 μL橄榄油)+切口痛假手术组(V+S组),雌激素替代(50 μ.g雌二醇溶于100 μL橄榄油)+切口痛组(E+I组),溶剂替代(100 μL橄榄油)+切口痛组(V+I组).雌激素替代组于OVX术后第14天起每2 d腹腔注射雌激素1次至完成行为学实验,溶剂替代组注射等体积橄榄油.于OVX术前,切口痛术前当天(即OVX术后第15天),切口痛术后第1、3、5、7天(即OVX术后第16、18、20、22天)进行热痛实验,记录热缩足潜伏期(PWTL).完成行为学实验后,采用免疫印迹法检测大鼠脊髓背角pERK1/2水平.结果 V+S组OVX术后第16、18、20、22天大鼠PWTL值较E+S组显著延长(P值均＜0.05).E+I组、V+I组大鼠切口痛术后(OVX术后第16、18、20、22天)手术侧PWTL值均较切口痛术前(OVX术后第15天)显著缩短(P值均＜0.05).E+I组切口痛术后第1、3天(OVX术后第16、18天)手术侧PWTL值较V+I组缩短更为显著(P值均＜0.05).E+I组手术侧PWTL值于切口痛术后第5天(OVX术后第20天)恢复至切口痛术前水平(P＞0.05),V+I组则于切口痛术后第7天(OVX术后第22天)恢复(P＞0.05).E+S组手术侧pERK1/2水平显著高于V+S组(t=1.84,P=0.02),E+I组pERK1/2水平也显著高于V--I组(t=2.39,P=0,03);E+I组、V+I组手术侧pERK1/2水平均显著高于非手术侧(P值均＜0.05).结论 雌激素替代增加了雌性去势大鼠切口痛术后对伤害性热刺激的敏感度；pERK1/2参与了雌激素对伤害性刺激感受的调节作用.
关键词： 雌激素 切口痛 胞外信号调节激酶1/2 伤害性感受 -
胞外信号调节激酶1/2通路在阿霉素引起的心肌细胞损伤中的作用
目的 探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用.方法 应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK 1/2的活化、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及胱硫醚γ-裂解酶(CSE,为内源性硫化氢的合成酶)的表达.结果 5 μmol·L-1 DOX处理H9c2心肌细胞1~6 h,呈时间依赖性地促进ERK1/2的活化;5 μmol·L-1 DOX对心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率下降、ROS水平升高、MMP丢失及CSE表达降低;在DOX处理H9c2心肌细胞前30min,应用ERK1/2抑制剂10 μmol·L-1PD-98059预处理能明显拮抗DOX对心肌细胞的损伤作用,使ROS水平降低,细胞存活率MMP和CSE表达水平均升高.结论 ERK1/2通路参与DOX对H9c2心肌细胞的损伤作用.
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调控ERK1/2通路在H2S保护心肌细胞对抗阿霉素损伤中的作用
[目的]探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在阿霉素心肌毒性中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控ERK1/2通路抑制阿霉素的心肌毒性.[方法]应用阿霉素处理H9c2心肌细胞建立心肌细胞毒性损伤模型；CCK-8比色法测定细胞存活率；蛋白印迹法(Western blot)检测ERK1/2蛋白的表达水平；双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内的活性氧(ROS)水平；罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP).[结果]5 μmol/L阿霉素呈时间依赖性地上调磷酸化(p)ERK1/2表达水平；硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min明显地抑制阿霉素对p-ERK1/2表达的上调作用；400 μmol/L NaHS和10 μmol/L PD-98059(ERK1/2抑制剂)预处理30 min,均能对抗阿霉素引起的心肌细胞损伤,分别使H9c2的存活率增加,胞内ROS堆积和MMP丢失均减少.[结论]ERK1/2通路介导阿霉素的心肌毒性作用；通过抑制ERK1/2通路可能是H2S保护心肌细胞对抗阿霉素心肌毒性的作用机制之一.
关键词： 胞外信号调节激酶1/2 硫化氢 阿霉素 心肌毒性
