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体外转染NHE-1核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨锤头状核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+/H+交换器-1(NHE-1)表达和活性、pHi的影响,及其与细胞增殖的关系.方法:构建含锤头状核酶序列的pLXSN反转录病毒重组载体,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,G418筛选后获取含有重组载体的细胞克隆,检测细胞NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量、pHi和3H-TdR掺入量. 结果:与转染pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较,转染重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量减少,同时伴有pHi降低和3H-TdR掺入量减少,正常对照组和空载体组间无显著差异.结论:NHE-1特异性锤头状核酶可对NHE-1 mRNA进行特异性切割,减少其表达,从而诱导细胞酸化,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖.
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小牛血清和血小板源性生长因子对肺动脉平滑肌细胞Na+/H+交换器活性和细胞增殖的影响
目的:探讨小牛血清和血小板源性生长因子(PDGF)对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+/H+交换器 -1(NHE-1)表达和活性的影响,及其与细胞增殖的关系.方法:体外培养肺动脉平滑肌细胞,10%小牛血清、PDGF-BB作用24小时后检测细胞NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量、细胞内pH(pHi)和3H-TdR掺入量,观察不同浓度 NHE-1抑制剂--乙基,异丙基氨氯吡咪(EIPA)对细胞凋亡率的影响.结果:10%小牛血清、PDGF作用后24小时,肺动脉平滑肌细胞中NHE-1 mRNA 表达、22Na摄取量明显增加,同时伴有pHi增高和3H-TdR掺入量增加, 以10%小牛血清作用更为显著.随着EIPA浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡率明显增高.结论:小牛血清、PDGF等生长因子参与调节肺动脉平滑肌细胞NHE-1表达和激活,使细胞内碱化,可能在细胞增殖中起重要作用.
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Na+/H+交换器-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+/H+交换器(NHE)-1表达和活性、细胞内pH(pHi)的影响,及其与细胞增殖的关系.方法:构建含NHE-1反义RNA序列的pLXSN反转录病毒重组载体,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,G418筛选后获取含有重组载体的细胞克隆,检测细胞NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量、pHi和3H-TdR掺入量.结果:与转染pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较,转染了重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量明显减少,同时伴有pHi降低和3H-TdR掺入量减少,正常对照组和空载体组间无显著差异.结论:NHE-1反义RNA可以减少NHE-1表达,从而诱导细胞酸化,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖.
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细胞内酸化对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
目的:本实验从细胞酸化角度来探索宫颈癌细胞凋亡的情况,为临床治疗宫颈癌提供新思路.方法:使用EIPA(Na+/H+交换器的特异性抑制剂)抑制Hela细胞中的Na+/H+交换器的作用,通过细胞形态学、DNA ladder以及流式细胞检测胞内pH值和DNA亚二倍体的方法来研究Hela细胞凋亡的情况.结果:宫颈癌Hela细胞对EIPA产生了剂量依赖性的细胞酸化和凋亡.结论:提示了细胞酸化可能是宫颈癌Hela细胞发生凋亡的一个上游事件,胞内pH值的降低可以引起Hela细胞凋亡.
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Na+/H+交换器在缺氧性肺动脉高压中的作用
目的:探讨Na+/H+交换器(NHE)在缺氧性肺动脉高压大鼠模型肺动脉平滑肌细胞中的表达.方法:30只Wistar大鼠,随机分为3组,分别为:正常对照组,缺氧3周组和缺氧8周组.分离肺动脉平滑肌,测定细胞内pH(pHi),并提取总RNA,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,比较各组中NHE-1 mRNA的表达.结果:缺氧组肺动脉平滑肌细胞pHi较正常对照组显著增高(P<0.01),NHE-1 mRNA表达也显著高于正常对照组(P<0.01),缺氧两组间差异不显著.结论:Na+/H+交换器参与调节肺动脉平滑肌细胞pHi,从而在缺氧性肺动脉高压形成和发展中可能起重要的作用.
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核酶对大鼠肺动脉平滑肌NHE-1活性及细胞增殖的作用
目的探讨锤头状核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+/H+交换器-1表达和活性、pHi的影响,及其与细胞增殖的关系.方法构建含锤头状核酶序列的pLXSN反转录病毒重组载体,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,G418筛选后获取含有重组载体的细胞克隆.检测细胞NHE-1 mRNA表达、pHi、pHi恢复速率、22Na摄取量和3H-TdR掺入量变化.结果与转染pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较,转染了重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE-1 mRNA表达、22Na摄取量减少,同时伴有pHi降低、pHi恢复速率下降和3H-TdR掺入量减少.结论所设计的锤头状核酶可对NHE-1 mRNA进行特异性切割,减少其表达,使其活性下降,从而诱导细胞酸化,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖.
