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ATM缺失介导的U937细胞凋亡敏感性与异常细胞周期蛋白依赖性激酶活性的关系
目的探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因(ATM)定向灭活增强细胞凋亡敏感性的关键蛋白分子.方法以U937的变异细胞系U937-ASPI3K(ATM阴性)和U937-pEOSV2(+)(野生型ATM阳性)作为细胞模型.用核小体免疫酶联检测试剂盒定量分析细胞凋亡.用 Western blotting分析总p34cdc2、161位苏氨酸(Thr161)磷酸化的p34cdc2和14位苏氨酸(Thr14)、15位酪氨酸(Tyr15)磷酸化的p34cdc2,并检测细胞核内cdc25A、cdc25B、cdc25C的蛋白丰度.用RT-PCR方法分析cdc25A、cdc25B、cdc25C转录水平的表达.结果蛋白合成抑制剂不能阻断U937-ASPI3K因ATM缺失诱导的细胞凋亡敏感性增强效应.而蛋白丝氨酸-苏氨酸磷酸酯酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂可阻断该凋亡敏感性增强效应.U937-pZEOSV2 (+)细胞经放射线照射后,p34cdc2 Thr14和Tyr15被磷酸化而处于灭活状态,该磷酸化修饰与U937-pZEOSV2(+)胞核内三种酸酯酶cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白水平于受照后呈现显著的反应性降低有关.在U937-ASPI3K细胞,ATM缺失抑制受照后细胞cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白反应性降低,p34cdc2激酶Thr14和Tyr15低磷酸化而处于激活状态.这种抑制效应发生在转录后水平上.结论 ATM缺失使受照后细胞核内cdc25蛋白反应性降低被阻断,进而导致CDK的异常激活是ATM缺失介导凋亡敏感性增强的关键环节.
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G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的差异
目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化.方法:用免疫印迹(Western blot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化.结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中带;而MⅡ期表现为中、下带.结论:可以用电泳迁移率的变化作为观察p34cdc2磷酸化状态的一种方法.
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p34cdc2和cyclin B1在宫颈癌中的表达及临床意义
目的:研究细胞周期蛋白p34cdc2和cyclin B1在官颈癌组织中的表达水平,并探讨它们的表达与宫颈癌患者临床病理资料之间的相关性.方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)法和Western印迹法,对62例原发性宫颈癌和15例对照宫颈组织进行检测,定量分析p34cdc2和cyclin B1的mRNA和蛋白质的表达水平.结果:在宫颈癌组织中p34cdc2和cyelin B1的mRNA和蛋白质表达水平明显高于对照宫颈组织(P=0.004,P=0.013和P=0.016,P=0.029),而且主要表现为过表达.p34cdc2和cyclin B1之间存在显著性正相关,mRNA和蛋白质表达的相关系数分别为0.527(P=0.001)和0.432(P=0.022).p34cdc2和cyclin B1的mRNA表达与官颈癌淋巴结转移之间存在密切关系(P=0.02,P=0.001),但与患者的年龄、临床分期、病理类型和分化程度无关(P＞0.05).结论:p34cdc2和cyelin B1是宫颈癌中的重要调控分子,可促发癌细胞克服细胞周期G2/M期控节制点进入M期,促进肿瘤的发生与发展.p34cdc2和cyclin B1的高表达可能成为研究宫颈癌发生机制和淋巴转移的新的分子标志.
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鼻咽良恶性病变中EBV-LMP1、CyclinB1、P34cdc2和Survivin的表达及意义
目的:探讨P34cdc2、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和颈部淋巴结转移灶中的表达及意义,并分析与EBV-LMP1表达的相互关系.方法:应用免疫组化检测30例鼻咽粘膜慢性炎、30例鼻咽癌和30例鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中LMP1、P34cdc2、CyclinB1和Survivin的表达.结果:LMP1、P34cdc2、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为20.0%(6/30)、10.0%(3/30)、10.0%(3/30)和3.3%(1/30);在鼻咽癌中的阳性率分别为63.3%(19/30)、73.3%(22/30)、50.0%(15/30)和36.7(11/30),与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性(P＜0.01);在鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中的阳性率分别为70.0%(21/30)、80.0%(24/30)、76.7%(23/30)和43.3%(13/30),与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性(P＜0.01),与鼻咽癌相比较均有所增高,但仅CyclinB1有统计学意义(P＜0.05).在鼻咽癌及其颈部淋巴结转移灶中,LMP1与P34cdc2和CyclinB1的表达均有显著相关性(分别P＜0.01,P＜0.05).结论:鼻咽癌中存在P34cdc2、CyclinB1和Survivin蛋白过表达,LMP1与P34cdc2和CyclinB1可能协同致病.
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细胞周期调控蛋白P34cdc2与cyclin B1在头颈部鳞癌中的预测价值
头颈部鳞癌是一种较常见的恶性肿瘤.p34cdc2及cyclin B1是调控G2/M期的重要蛋白,可以促进G2/M期转换而加速细胞周期进程.关于p34cdc2及cyclin B1与头颈部鳞癌的发生发展及预后的研究目前已相当普遍.本文就它们在头颈部鳞癌中的预测价值进行综述.
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P34cdc2与人卵巢癌顺铂耐药的关系研究
卵巢癌顺铂耐药是导致晚期卵巢癌患者复发原因之一，逆转顺铂耐药是卵巢癌治疗中亟待解决的难题。细胞周期蛋白依赖性激酶2（P34cdc2激酶）在细胞周期调控中起着调控G2至M 期的作用［1］，过度表达，可使细胞周期进程紊乱，DNA修复系统异常，导致细胞恶性增殖，使顺铂化疗诱导的细胞凋亡减少，从而产生耐药。为探讨 P34cdc2过度表达与卵巢顺铂耐药相关性，我们应用RT‐PCR及免疫印迹法检测卵巢癌顺铂敏感细胞株与耐药细胞株中P34cdc2 m RN A及蛋白表达的差异。
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cyclinB1、p34cdc2在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义
目的:探讨细胞周期调控因子cyclinB1、p34cdc2在卵巢肿瘤发生、发展及预后中的作用.方法:应用免疫组化SP法对正常卵巢、卵巢良性上皮性肿瘤及恶性肿瘤中cyclinB1、p34cdc2的表达进行检测.结果:cyclinB1和p34cdc2在正常卵巢、良性肿瘤和恶性肿瘤中的阳性表达呈递增趋势,在恶性肿瘤的阳性表达率显著高于正常卵巢和良性肿瘤(P＜0.05);并且cyclinB1和p34cdc2的表达与肿瘤的分化程度、临床分期及预后明显相关(P＜0.05).结论:cyclinB1和p34cdc2在卵巢肿瘤的进展、诊断和判断预后方面有一定的意义.
