首页 > 文献资料
-
TGF-β诱导及病毒感染获得iTreg细胞的方法学研究
目的:建立MSC V-Foxp3感染法和TGF-β诱导法获取诱导性调节性T淋巴细胞(iTreg)的方法,并初步探讨两种iTreg的作用机制异同.方法:分别用MSCV-Foxp3感染和TGF-β诱导获取iTreg,流式细胞术和PCR检测两种iTreg的产率和Foxp3mRNA表达,CFSE染色观察iTreg的免疫抑制作用.ELISA检测iTreg的IL-10和TGF-β分泌,PCR检测iTreg颗粒酶A和B的mRNA水平.结果:感染法和诱导法iTreg产率分别可达49.12％和41.08％,但前者Foxp3 mRNA表达高于后者(P＜0.05).两种iTreg均具有一定的免疫抑制活性,IL-10分泌水平较原始CD4+T细胞上升(P＜0.05),但颗粒酶B在诱导组iTreg的表达显著高于感染组(P＜0.05).结论:病毒感染法与TGF-β诱导法均可成功获得具有免疫抑制功能的iTreg,但前者Foxp3mRNA表达高于后者.两种iTreg发挥免疫抑制功能可能都有IL-10参与,而颗粒酶B可能只与诱导组iTreg有关.
-
调节性T细胞获得及其免疫抑制作用的实验研究
目的:制备诱导性调节性T淋巴细胞(iTreg),探讨iTreg的免疫抑制功能及其作用机制. 方法:免疫磁珠分选获取CD4+CD25-T淋巴细胞,TGF-β诱导法获取iTreg,流式细胞术和实时定量PCR方法检测iTreg的得率及其叉头状/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA水平,活性染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色和流式细胞术方法观察Treg细胞对CD4+T淋巴细胞体外增殖能力的影响.利用ELISA和流式细胞术方法分别检测iTreg的IL-10、TGF-β分泌以及胞内因子IL-2、IL-4、IL-17、干扰素-γ(IFN-γ)水平. 结果:TGF-β诱导法iTreg得率可达42.10%,TGF-β诱导后获得的iTreg Foxp3 mRNA水平明显升高. 获得的iTreg可以抑制自体CD4+T淋巴细胞增殖,IL-10和TGF-β分泌水平较原始CD4+T细胞上升(P<0.05),但几乎不分泌IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ. 结论:利用TGF-β诱导法制备获得的iTreg具有明显的免疫抑制功能,其发挥免疫抑制功能过程可能均有IL-10和TGF-β的参与.
-
蛋白激酶Cα对T细胞生物学功能影响的研究
目的：探讨蛋白激酶Cα（PKCα）对T细胞增殖、凋亡、分化、细胞因子的生成、诱导性调节性T细胞（iTreg）生成的影响。方法分离野生型（PKCα+/+组）或PKCα基因敲除（PKCα-/-组）小鼠T细胞，体外培养，在T细胞表面受体（TCR）信号刺激下，利用3H胸腺嘧啶掺入法、CSFE/Annexin V染色结合流式细胞技术检测T细胞增殖及凋亡情况；收集细胞培养上清，用ELISA方法检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-17的生成。分离PKCα+/+组或PKCα-/-组小鼠CD4+T细胞，在TCR信号刺激下，按Th17细胞、iTreg分化条件进行体外诱导，用流式细胞技术检测细胞分化结果。结果与PKCα+/+组相比，PKCα缺失时，在TCR信号刺激下，T细胞的增殖降低，IL-2生成增多，IL-4和IL-17生成减少，Th17细胞分化减少，iTreg生成增加（均P<0.05）。结论 PKCα具有促炎作用。
-
miRNA-155对调节性T细胞表型和功能的影响
目的：探讨微小核糖核酸（miRNA）-155对调节性T细胞（Treg）的两种亚型诱导性Treg（iTreg）和天然性Treg（nTreg）的影响。方法采用健康成人外周血分离获取的外周血单个核细胞（PBMC），利用磁性细胞分选法分别获取幼稚T细胞和nTreg。培养阶段将细胞分为3组：对照组（幼稚T细胞加入白细胞介素-2培养）、iTreg组（幼稚T细胞加入白细胞介素-2和转化生长因子-β培养）和nTreg组（nTreg加入白细胞介素-2培养）。每组再分为3个亚组：未处理亚组、scramble亚组和miRNA-155拮抗剂亚组（每亚组3个孔）。采用低密度芯片分析方法检测3组中的未处理亚组细胞中miRNA-155的基因表达水平。采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的表面标志物CD25、Foxp3、CD127水平。采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的CD4＋CD25＋Foxp3＋SOCS1＋Treg比例；采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的Treg抑制功能。结果与对照组和iTreg组比较，nTreg组细胞的miRNA-155表达水平明显降低，差异有统计学意义（均为P＜0.05）。与对照组和iTreg组比较，nTreg组的SOCS1表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。加入miRNA-155拮抗剂后并未导致Foxp3、CD127和CD25等Treg重要表面标志物发生明显的变化。与对照组和 iTreg组比较， nTreg组的SOCS1表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。iTreg组中的未处理亚组细胞miRNA-155表达水平较低，而拮抗剂抑制其表达之后（miRNA-155拮抗剂亚组），能够使其SOCS1表达升高。iTreg组中，与未处理亚组比较，miRNA-155拮抗剂亚组的 Treg抑制功能在1∶8、1∶16、1∶32的比例时，显示出了更强的抑制功能（均为P＜0.05）。结论体外拮抗miRNA-155对nTreg的抑制功能无明显影响，但是能够增加iTreg的SOCS1表达水平和体外抑制功能。
-
诱导性CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展
诱导性CD4+CD25+调节性T细胞(iTreg)是调节性T细胞的一个重要亚群,在维持机体免疫稳态和免疫相关疾病的发生发展中起重要作用.本文综述了iTreg的分子标记、外周诱导、稳定性以及与疾病的关系等相关方面的研究进展.
