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NALP3炎性复合体和肺纤维化
NALP3炎性复合体作为胞内模式识别受体,在免疫及炎症反应中起着重要的调控作用.肺纤维化是肺损伤及炎症导致的终结果,炎症反应是肺纤维化的第一环节.近年来研究发现NALP3炎性复合体与多种疾病相关,与肺纤维化的发生发展也有密切的关系.本文就NALP3炎性复合体的结构和功能、作用机制以及它和肺纤维化的关系作一综述.
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞产生IL-1β和IL-18
目的：探讨沙眼衣原体（ Chlamydia trachomatis，Ct） pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用，并初步分析其分子机制。方法：用0、3、6、12、24、36μg／ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞，并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞，ELISA检测IL-1β和IL-18的含量；Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平，Western blot鉴定Caspase-1活化状态；分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA 转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂（ Z-YVAD-FMK）预处理THP-1细胞30 min后，再用24μg／ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h，ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果：pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg／ml时，IL-1β和IL-18的表达水平高，分别为491 pg／ml、186 pg／ml；同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18，两者分别在24 h和16 h达到峰值。 pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC 和Caspase-1 mRNA的表达，促进Caspase-1的活化；NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组（ P＜0.05）。结论：pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
关键词： 沙眼衣原体 pORF5质粒蛋白 NALP3炎性复合体 IL-1β IL-18 -
NALP3／ASC／caspase-1在局灶节段性肾小球硬化肾组织中的表达变化
目的：研究局灶节段性肾小球硬化（FSGS）肾病综合征（NS）患者肾组织中NALP3炎性复合体的表达变化与肾小管间质病理损害程度、炎性因子表达及临床生化指标之间的关系。方法应用免疫组化检测NS患者正常肾组织（对照组）及FSGS患者肾组织（FSGS组）肾小管上皮细胞NALP3/ASC/caspase-1及其下游效应分子IL-1β、IL-18表达变化，对肾小管间质损伤程度进行评分并检测肾小管间质活化巨噬细胞F4/80情况，收集患者血肌酐、血尿素、血浆总蛋白、清蛋白、24h尿蛋白等指标，计算肾小球滤过率（eGFR）。将NALP3/ASC/caspase-1和IL-1β、IL-18表达情况分别与肾小管间质损伤程度及各生化指标进行相关性分析。结果FSGS组患者肾小管上皮细胞NALP3/ASC/caspase-1及下游效应分子IL-1β、IL-18的表达较对照组显著增高（P＜0．01）；NALP3/ASC/caspase-1表达强度与IL-1β、IL-18呈正相关（P＜0．01）；NALP3/ASC/caspase-1和IL-1β、IL-18的表达与肾小管间质损伤程度及F4/80的表达强度呈正相关（P＜0．01），与24h尿蛋白量、血肌酐浓度呈正相关（P＜0．05），与eGFR呈负相关（P＜0．05），与尿素、血浆总蛋白、清蛋白浓度无明显相关性。结论NALP3炎性复合体通过激活IL-1β、IL-18等下游炎症因子，参与FSGS的发病机制，其表达程度越高、肾组织病变程度越重，是否能作为FSGS预后的预警指标，还需进一步的临床验证。
关键词： 肾小球硬化症 局灶节段性 NALP3炎性复合体 白细胞介素1β 白细胞介素18 -
NALP3炎性复合体及p38MAPK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制
目的 探讨氧化应激时成纤维细胞(NIH-3T3)中NALP3炎性复合体、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的变化及阿魏酸钠的干预机制.方法 将NIH-3T3细胞分为6组:对照组;H2O2 (200 μmol/L)刺激组;阿魏酸钠(400 μg/mL)组;H2O2 +N-乙酰半胱氨酸(H2O2200 μmol/L+ NAC 5 mmol/L)组(抗氧化组);H2O2+p38 MAPK抑制剂(H2O2 200 μmol/L+ SB203580 5μmol/L)组(p38 MAPK阻断剂组);阿魏酸钠干预(H2O2 200 μmol/L+阿魏酸钠400 μg/mL)组.培养24 h后,荧光定量PCR检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase 1及p38α mRNA的表达;培养48 h后,Western blot检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、p-p38和p38蛋白的表达量(p-p38为p38活化表示形式,p38 MAPK信号通路的活化用p-p38/p38表示);培养24 h后,ELISA检测各组细胞的上清液中白细胞介素(IL)-1β的含量.结果 相比于对照组,H2 O2的刺激可以上调NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase-1及p38α mRNA的表达,NALP3及p-p38/p38蛋白的表达量,以及IL-1β分泌均增加(P均＜0.05);抗氧化组、p38 MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组相较于H2 O2刺激组,NALP3、Caspase-1及p38α mRNA的表达量以及NALP3、p-p38/p38蛋白的表达量均降低,IL-1p的释放也减少(P均＜0.05);而抗氧化组、p38MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组间上述指标的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿魏酸钠可能通过抑制p38 MAPK通路的活化降低NALP3炎性复合体、Caspase-1和IL-1p的表达,从而下调炎症级联反应.
关键词： H2O2 NALP3炎性复合体 p38 MAPK 阿魏酸钠 IL-1β -
阿魏酸钠对NALP3炎性复合体的调节及在肺纤维化中的作用
目的 探讨NALP3炎性复合体在肺纤维化过程中的活化情况,并观察阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)在肺纤维化过程中对炎性复合体的影响.方法 体内实验以博莱霉素(BLM)气管滴注构建小鼠肺纤维化模型(BLM组),治疗组在用BLM建模后第2天以SF(100mg/kg)每日1次腹腔注射(SF组),对照组(不建模)和BLM组注射等量磷酸盐缓充液,建模后第21天取肺组织行Masson染色,观察肺组织胶原沉积(Ashcroft评分)情况;以碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;体外实验以H2 O2刺激小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3以构建成纤维细胞氧化应激模型,干预组以SF 400 μg/mL预处理2h,再用H2 O2培养细胞,采用Real time-PCR检测小鼠肺组织及体外实验分组处理细胞相关炎性细胞因子NALP3、caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、collagen-1、a平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA,Western blot检测小鼠肺组织NALP3蛋白,分组处理细胞NALP3、collagen-1、αSMA蛋白的表达;ELISA测定肺组织上清及细胞上清中IL-1β质量浓度.结果 体内实验SF处理后,肺纤维化模型小鼠Ashcroft评分及HYP含量较BLM组有所减少(P＜0.05);肺组织NALP3炎性复合体NALP3、ASC、caspase-1 mRNA,NALP3蛋白的表达和IL-1β的合成较BLM组均有减少(P＜0.05).体外实验显示H2 O2能有效刺激NALP3炎性复合体NALP3、ASC、caspase-1 mRNA的表达(P＜0.05)与IL-1β的分泌(P＜0.05),并且能有效促进成纤维细胞NALP3蛋白、collagen-1和α-SMA的表达(P＜0.05);SF预处理能在基因水平抑制NALP3、ASC、caspase-1、collagen-1和a-SMA的表达(P＜0.05),且在蛋白水平减少NALP3、collagen-1、α-SMA的表达(P＜0.05),降低IL-1β水平(P＜0.05).结论 阿魏酸钠可能通过抑制氧化应激诱导的NALP3炎症复合体活化,从而抑制成纤维细胞活化,展现其抗纤维化作用.
关键词： 肺纤维化 成纤维细胞 NALP3炎性复合体 阿魏酸钠
