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CYP17A1基因的复合杂合突变导致17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症
目的 通过1例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17-OHD)患者的临床特点和基因突变分析,探讨17-OHD的基因分子机制及突变对P450 c17蛋白功能的影响. 方法 收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点,用突变位点保守性分析和计算机模拟P450 c17蛋白三维结构,分析突变对P450 c17蛋白功能的影响. 结果 患者临床表现及内分泌功能检查完全符合17-OHD特点,PCR产物和克隆测序发现, CYP17A1基因的一个等位基因的第2外显子125位密码子发生了CGA→CAA的突变,导致Arg125 Gln错义突变,另一个等位基因的第6外显子的第360和361密码子缺失G核苷酸及C转换为A核苷酸,导致Leu361Phe错义突变和以后的移码突变,形成一个只包含417个氨基酸的截短蛋白,该蛋白缺乏17α-羟化酶和17,20-碳链裂解酶催化活性部位.通过P450 c17蛋白分子三维建模分析表明,121位色氨酸与血红素和125位精氨酸分别形成氢键,当125位精氨酸突变为谷氨酰胺时,121位色氨酸不能再与125位谷氨酰胺形成氢键,从而使P450 c17蛋白分子结构的稳定性受到影响,影响了其功能. 结论 通过CYP17A1基因突变分析,进一步从分子遗传学方面证实了患者的临床诊断,CYP17A1突变导致的P450 c17蛋白的结构改变是该17-OHD患者临床表现的基因分子基础.
关键词： 17α-羟化酶/17 20-碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 突变 -
1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症的临床和分子遗传分析
目的 通过对1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的临床特点和基因突变研究,初步探讨170HD临床表现的基因分子机制.方法 收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点.结果 患者临床表现及内分泌功能检查完全符合170HD,PCR产物测序发现,CYP17A1基因第6外显子329位密码子发生了TAC→AA的纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并形成了一个只包含418个氨基酸的截短蛋白,从而使该蛋白完全缺乏17α-羟化酶和17,20碳链裂解酶活性.结论 CYP17A1突变导致的P450c17蛋白的结构改变是该17OHD患者临床表现的基因分子基础.
关键词： 17α-羟化酶/17 20碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 突变 -
1例伴性别发育异常的继发性高血压临床特点和基因突变分析
目的 对1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的临床特点和分子遗传学特征进行回顾性分析.方法 先证者为2016年9月在河南省人民医院高血压科住院的患者,女,12岁,以“头晕1周,加重1d”为主诉就诊,查体:血压165/120 mm Hg,第二性征未发育,生化检测示血钾低于正常值.进一步采血行内分泌激素测定,肾上腺及肾动脉CT增强扫描,上述检查高度疑似17OHD,后行CYP17A1基因检测确定诊断.先证者父母及兄长随后进行CYP17A1基因检测.结果 先证者皮质醇水平低于正常,而促肾上腺皮质激素反馈性增高;睾酮低于正常值,而促性腺激素增高.肾素活性降低,醛固酮水平正常.CT显示左侧肾上腺增生.患者CYP17A1基因检测显示,p.Y329X纯合无义变异.3个家系成员均为该变异的杂合突变携带者.结论 高血压伴性发育不良的儿童,应考虑患17OHD的可能,应及时进行基因检测明确诊断.
关键词： 17α-羟化酶/17 20碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 高血压 -
17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的临床特点及长期随诊资料分析
目的提高对17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的认识和诊疗水平.方法回顾性分析1978年至2002年北京协和医院诊治的24例17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症患者的临床特点及长期随诊资料.所有患者均进行了较为完善的生化检查及相关内分泌激素测定,部分患者行骨密度测定.结果 20例完全性联合缺陷症患者均存在高血压、低血钾及缺乏青春期性腺发育;测定示血、尿皮质醇水平低于正常,促肾上腺皮质激素(ACTH)反馈性增高;性激素明显低于正常,而促性腺激素增高.17例患者测定结果显示血浆肾素活性受到抑制,醛固酮水平高于正常.9例患者骨密度测定显示骨量明显低于同龄人.4例部分性联合缺陷症患者中,2例有自发月经,1例患者外生殖器呈两性畸形,1例原发闭经患者血压和血钾均正常.ACTH兴奋试验以及性激素测定的结果提示,这4例患者的肾上腺或性腺尚存在部分17α-羟化酶/17,20-裂解酶活性.多数患者应用小剂量地塞米松(0.1～0.375 mg/d)可使血压、血钾正常.经补充性激素治疗,患者均能维持成年女性外观,但无生育功能.结论临床工作中应加强对部分性联合缺陷症的认识.患者长期规律治疗可良好控制血压及纠正低血钾.
关键词： 肾上腺增生 先天性 17α-羟化酶/17 20-裂解酶缺陷症 CYP17基因 -
两例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症分子遗传学研究
目的 从分子遗传学方面初步探讨两例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的突变性质.方法 用患者外周血白细胞DNA进行CYP17A1基因的8个外显子PCR扩增,并通过序列测定确定突变位置和性质.结果 两患者均为CYP17A1基因突变的遗传复合体.病例1为Y329K,418X/P428L,病例2为Y329K,418X/P409R,Y329K,418X为插入缺失突变(TAC329AA),导致移码突变,在418位产生终止密码提前终止了蛋白质翻译.结论 通过CYP17A1基因突变分析,确诊了两例17OHD患者.
关键词： 17α-羟化酶/17 20碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 突变 -
RNA干扰对雄激素合成关键酶17α-羟化酶/17,20裂解酶作用的实验研究
目的:探讨细胞色素P450 17α-羟化酶/17,20裂解酶(CYP17)小干扰RNA (siRNA)对CYP17基因表达和多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡膜细胞雄激素合成的抑制效果.方法:合成4条靶向CYP17基因的特异性siRNA和非特异性siRNA.将0.4μg携带报告基因增强型绿色荧光蛋白和CYP17基因的质粒和siRNA共转染入HeLa细胞,荧光显微镜观察及流式细胞术检测绿色荧光蛋白的表达反映对CYP17表达的影响,筛选抑制效果佳的siRNA.卵泡膜细胞取自PCOS患者和非PCOS妇女各5例,将筛选出的佳CYP17 siRNA以佳浓度转染人卵泡膜细胞,荧光定量实时逆转录多聚酶链反应检测CYP17 mRNA的表达,并且检测培养液中CYP17作用产物雄烯二酮和前体孕酮水平.结果:siRNA 1221处理后,HeLa细胞中外源性CYP17的表达显著降低,抑制率达50%,卵泡膜细胞中CYP17 mRNA水平和雄烯二酮产生降低,但与对照组比较,统计学上无显著差异.结论:RNA干扰技术可能提供一种PCOS高雄激素基因治疗的新方法.
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17α-羟化酶缺陷症2例分析
17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17-hydroxyl-ation deficiency,170HD)是先天性肾上腺增生的少见类型,仅占其1%左右,临床患病率约为1/50 000[1].大部分文献报道的170HD,染色体为46,XY,为完全型170HD[2].另有更为罕见的不完全型170HD,其中一部分染色体为46,XX,另一部分染色体为46,XY.结合我科近年来收治的2例患者临床资料,对其病理生理、临床特点进行分析.
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罕见的CYP17A1基因外显子剪接突变导致17α-羟化酶缺陷的分子病因学研究
目的 对一例46XY性发育异常的患者进行CYP17A1致病基因分析,并探讨新的突变对患者表型的影响.方法 对患者及其父母的CYP17A1基因的8个外显子进行PCR扩增,扩增产物直接测序.将野生型和含有新突变位点的突变型PCR片段连入表达载体,构建Mini-gene系统,转染HEK-293T细胞,RT-PCR观察新突变位点对剪切的影响.进一步构建野生型和剪切异常的CYP17A1 cDNA全长表达质粒,转染HEK-293T细胞,体外检测CYP17A1酶活性.结果 基因分析显示患者的CYP17A1基因为复合杂合突变,其中一个等位基因为外显子6中c.985_987delinsAA突变,另一等位基因含有新的同义突变(c.1263 G＞A:GCG＞GCA).体外研究表明,这种同义突变会产生新的剪切位点,导致CYP17A1基因mRNA异常剪切,剪切产物中CYP17A1的415位氨基酸残基后缺失6或7个氨基酸.体外转染和酶活性检测证实异常剪切产物使酶活性丧失；但此突变对剪切的影响并不是完全的,在患者体内还应存在部分正常的剪切产物,发挥残余酶活性,与患者的表型相一致.结论 本研究首次报道了由于CYP17A1基因外显子剪切突变导致的17α-羟化酶缺乏的患者,并且启动对异常剪切体的功能研究.
关键词： 17α-羟化酶/17 20-裂解酶缺乏症 CYP17A1基因 剪接突变 -
新纯合突变F453S致不典型表型17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症
目的 研究和分析1例不典型表型的17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(170HD)患者及家系的临床和分子遗传学.方法 全面收集先证者临床资料、基础激素测定及影像学资料,对家系成员基因型采用PCR扩增产物直接测序方法明确,对于杂合突变,采用亚克隆方法进一步明确.结果 先证者仅表现为偶发的高血压,腋毛阴毛缺如;基础激素测定示睾酮、雌二醇、17羟孕酮、皮质醇及促性腺激素均在正常范围,而ACTH高于正常,CT示双侧肾上腺增生;肾素活性受抑.基因检测证实CYP17A1基因发生F453S替换突变,该突变类型尚未见文献报道.结论 CYP17A1基因F453S纯合突变导致不典型表现的170HD.
关键词： 肾上腺增生 先天性 17α-羟化酶/17 20-碳链裂解酶缺陷症 基因 CYP17a1 突变 -
17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症的临诊应对
17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症(17 α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency,17OHD)是一种罕见的先天性肾上腺皮质增生症,典型的临床表现为低肾素性高血压、低血钾、第二性征不发育、女性原发性闭经、男性假两性畸形等.本文通过对1例经基因测序明确诊断的17OHD患者的临床特点进行分析,并对该病发病机制、临床表现、分子遗传学特点、诊断及治疗等做一文献复习.
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2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者临床及遗传学分析
目的 分析2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者的临床特点和分子遗传学特征.方法 收集2007年9月-2008年7月在河南省人民医院内分泌科治疗的2例患者临床、基础激素测定和影像学检查资料,对患者进行CYP17A1基因检测.结果 2例患者血压高于正常值,血钾低于正常值,第二性征发育不良.激素测定示血皮质醇水平低于正常,促肾上腺皮质激素反馈性增高;肾素活性受抑制;睾酮、雌二醇低于正常值,而促性腺激素增高.CT示双侧肾上腺增生.CYP17A1基因检测显示,2例患者基因第6外显子上发现c.1 045del和c.1 047C＞A,329位密码子发生了TAC-AA纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并提前产生一个终止密码子(418TGA).结论 高血压伴低血钾患者同时存在性发育不良,应考虑17α-羟化酶缺陷症的可能,CYP17A1基因突变导致的P450c17蛋白的结构改变是17α-羟化酶缺陷症的分子基础.
关键词： 17α-羟化酶/17 20碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 突变 -
中国人17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症遗传特点的初步探讨
目的 探讨中国人17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17OHD)种族特异性的基因突变特点.方法 采集3个无血缘关系的17OHD家系的患者及其亲属的外周血,抽提DNA后,通过PCR、亚克隆测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)等方法对致病基因17α羟化酶基因(CYP17A1)进行突变分型,并对文献报道的26例中国17OHD患者的资料进行回顾性分析.结果 1号家系先证者为8号外显子487-488-499密码子处9碱基纯合缺失(GACTCTTTCdel),致天冬氨酸-丝氨酸-苯丙氨酸缺失(D487_S488_F489 del),翻译后蛋白质肽链长度缩短;2号家系先证者为6号外显子329密码子处TAC→AA,纯合插入缺失突变致酪氨酸→赖氨酸,并在418密码子处提前出现终止密码,形成截短型蛋白(Y329K,418X);3号家系先证者为前两种突变类型的复合突变(Y329K,418X联合D487_S488_F489 del).对文献报道的中国26例17OHD病例进行基因突变分析,发现其基因突变遗传规律有明显的种族特异性:6号外显子受累程度高,等位基因比例为55.77％(29/52);其次为8号外显子,等位基因比例为40.38％(21/52),6和8号外显子等位基因总占有率达96.15％(50/52);26例患者中,Y329K,418X纯合子共9例(基因型比例为34.62％),D487_S488_F489 del纯合子共5例(基因型比例为19.23％),两者相加共14例(基因型比例为53.85％);Y329K等位基因比例为42.31％(22/52),D487_S488_F489 del等位基因比例为30.77％(16/52),两者的等位基因比例达73.08％.结论 17OHD在中国人中遗传具有种族特异性,第6号外显子TAC329AA突变形成截短型蛋白Y329K,418X和第8号外显子GACTCTTTC del导致D487_S488_F489 del为中国人17OHD常见的两种突变类型.
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1例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症患者临床分析和基因检测
目的 对1例17α羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency,17OHD)患者进行基因检测.方法 1例17OHD患者,抽提其外周血DNA,采用PCR扩增CYP17A1基因外显子及外显子与内含子交接区域,采用直接测序法对PCR产物进行序列检测和分析.结果 该例患者CYP17A1基因上检测到纯合突变c.985-987delinsAA(p.Y329KfsX89),该突变生成包含417个氨基酸的截短蛋白.结论 该例患者17OHD是由纯合突变c.985-987delinsAA(p.Y329KfsX89)所致.
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2例不同染色体17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症患者的临床特征与基因分析
目的:对2例不同染色体17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyase defi-ciency,17OHD)患者的临床特征及基因突变类型进行回顾性分析.方法:对患者行常规体格检查,采空腹静脉血行电解质、内分泌激素、染色体、SRY基因检测,肾上腺CT检查通过高压注射造影剂后行增强扫描,子宫卵巢经超声检查,后通过CYP17基因检测确诊.结果:例1染色体为46,XX,SRY(-),超声可探及缩小的子宫卵巢.例2染色体为46,XY,SRY(+),腹腔未探及子宫卵巢,右侧腹股沟区探及异位的睾丸.2例患者的共同表现为高血压和第二性征不发育.皮质醇水平在上午8:00和下午4:00明显降低,而同步采血的促肾上腺皮质激素(ACTH)水平均明显增高.雌激素(E2)及睾酮(T)降低,而促卵泡素(FSH)及促黄体素(LH)明显增高.卧、立位时肾素活性(PRA)降低,而醛固酮(ALD)水平明显增高.肾上腺CT示双侧均为弥漫性增生改变.基因测序结果:例1的CYP17A1基因上检测到纯合突变c.985-987delinAA(p.Y329KfsX89),该突变生成包含417个氨基酸的截短蛋白;例2第6外显子上发现复合杂合突变c.987C＞A(p.Y329X)和c.985del(p.Y329TfsX89),分别生成了329个和418个氨基酸的截短蛋白.结论:例1的17OHD由纯合突变c.985-987delinAA所致,例2由复合杂合突变c.985del和c.987C＞A所致.2例患者不同染色体性别17OHD的临床特征主要为性器官发育的差异.
关键词： 17α-羟化酶/17 20碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 高血压 -
五个17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症家系七例患者的临床和分子遗传学研究
目的 对5个家系的7例17α-羟化酶/17,20-碳链酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20 lyase deficiency,17OHD)患者进行基因突变检测,并探讨中国人170HD的基因突变特点及杂合子携带情况.方法 收集临床资料,进行激素水平测定,并对患者CYP17A1基因采用PCR扩增产物直接测序及亚克隆测序的方法明确.对288名山东正常人的CYP17A1基因采用PCR及限制性酶切片段长度多态性进行基因突变分析.结果 7例患者(5例为46,XX;2例为46,XY)均存在第二性征不发育、高血压、低血钾,性激素及皮质醇明显低于正常,共发现3种基因突变类型,TAC329AA,D487_F489 del和H373L.在288名山东人群中进行筛查,发现1例D487_F489 del的杂合携带者.结论 TAC329AA和D487_F489 del为中国人常见的突变类型,170HD在中国人发病率较预料中的要高,D487_F489 del的杂合携带者在中国人群中有一定的比例.
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CYP17A1基因新突变致17α-羟化酶/17,20-裂解酶部分性缺陷症
目的 研究1例17α-羟化酶/17,20-裂解酶部分性联合缺陷症患者CYP17A1基因突变特点,并结合患者的临床表现与基因突变类型初步探讨P450C17酶蛋白的结构与功能的关系.方法 收集1例17α-羟化酶/17,20-裂解酶部分性联合缺陷症患者的临床资料及其亲属血标本,提取基因组DNA,设计7对引物扩增CYP17A1基因的8个外显子及外显子与内含子的连接区域,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,产物胶回收后直接做为DNA双链模板测序.DNA双链模板不一致的PCR产物经克隆后测序.测序结果在核苷酸序列数据库进行比较分析.结果 患者CYP17A1基因突变检测结果为5994-5995 delAT/7541 C＞T复合杂合子.这两种突变均未见报道.推测5994-5995 delAT导致I259H,274X,突变形成的截短蛋白质缺少血红素结合区域,因此是没有功能的;而通过人类P450C17酶计算机模型分析显示7541 C＞T导致的A398V远离酶的活性中心,推测突变可能使酶的活性减弱,而不是完全地丧失.患者临床表现为有自发不规则月经及轻度高血压、低血钾,结合激素测定结果提示肾上腺和性腺保留部分功能.因而患者的基因型与其临床表型是一致的.结论 应进行突变P450C17酶的功能学研究来进一步明确结构改变对功能的影响.
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中国人17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺乏症基因突变研究
目的研究中国人17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺乏症CYP17A1基因突变特点,以及结合患者的临床表现与基因突变类型初步探讨P450C17酶蛋白的结构与功能的关系. 方法收集5 例17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺乏症患者及其部分家属血标本,提取基因组DNA,设计7对引物扩增CYP17A1基因的8个外显子及外显子与内含子的连接区域,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,产物胶回收后直接作为DNA双链模板测序.DNA双链模板不一致的PCR产物经克隆后测序.测序结果在核苷酸序列数据库进行比较分析.结果 5例患者均检测出CYP17A1基因突变,共存在2种新的复合突变,即6436-6438(TAC→AA)导致Y329K, 418X和6531-6532(GC→A)导致L361F, 418X.这两种突变均形成缺乏酶活性中心的截短蛋白.其中4例患者为Y329K, 418X突变纯合子,1例为Y329K, 418X /L361F, 418X的复合杂合子.5例患者的临床表型为17α-羟化酶/17,20-裂解酶的完全性联合缺陷,与其基因突变类型相一致. 结论 6436-6438( TAC→AA)这种突变可能在中国人较常见,可能具有种族特异性.将进一步进行突变酶蛋白的功能学研究.
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一例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症患儿的CYP17A1基因突变分析
目的 对1例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency,17OHD)的患儿进行CYP17A1基因突变分析,同时分析中国17OHD患者的CYP17A1基因突变特点.方法 收集患者的临床资料,应用PCR和DNA测序技术对患者进行CYP17A1基因的突变检测.结果 患者临床表现较典型:高血压、低血钾、性激素和皮质醇明显低于正常、促肾上腺皮质激素升高.患者的CYP17A1基因第6外显子上发现c.987C＞A(p.Y329X)以及c.985del(p.Y329TfsX89)复合杂合突变,分别生成包含328和417个氨基酸的截短蛋白.结论 在患者的CYP17A1基因上发现了c.985del和c.987C＞A复合杂合突变.我国患者中常见类型为错义突变,且集中于第6和第8外显子.
关键词： 17α-羟化酶/17 20-碳链裂解酶缺陷症 CYP17A1基因 突变
