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应用钙离子载体A23187及6-甲基嘌呤对人卵母细胞进行孤雌激活
目的:观察钙离子载体A23187(Ca-A23187)及6-甲基嘌呤(6-DMAP)对人类卵母细胞的孤雌激活作用.方法:收集体外受精周期中不适于进行卵胞浆内单精子注射的生发泡期或第一次减数分裂中期的不成熟卵母细胞244个在体外培养成熟,其中155个体外成熟卵母细胞按不同激活方案分组:5 μmol/L Ca-A23187组、10 μmol/L Ca-A23187组、对照组、6-DMAP组及Ca-A23187+6-DMAP组.激活处理后12～18 h观察第二极体排出及原核形成情况.结果:5及10 μmol/L Ca-A23187组卵母细胞激活率分别为40.7%(11/27)和37.1%(13/35),较对照组的9.5%(2/21)明显增加(P<0.01);6-DMAP组的激活率,11.5%(3/26)较Ca-A23187+6-DMAP组,58.7%(27/46)明显下降.Ca-A23187激活后卵母细胞主要表现为一原核二极体,而Ca-A23187+6-DMAP激活的卵母细胞以一原核一极体占多数(19/27,70.4%).结论:卵母细胞孤雌激活的发生及原核形成类型与激活方案有关,单独Ca-A23187或与蛋白激酶抑制剂6-DMAP联合应用都能使人类卵母细胞发生孤雌激活,二者联合应用更易于诱导卵母细胞发生孤雌激活.
关键词： 孤雌激活 卵母细胞 人类 钙离子载体A23187 6-甲基嘌呤 -
卵母细胞激活技术在辅助生殖技术中的临床应用
目的 观察辅助激活技术对辅助生殖技术中受精低下或失败患者成熟卵母细胞的激活效果及其胚胎发育情况.方法 回顾性分析2014年10月至2016年10月在山西省儿童医院妇幼保健院生殖医学中心助孕治疗、至少有1次ICSI受精失败或受精低下(受精率＜30％),再次行ICSI助孕时采用成熟卵母细胞激活处理的12名患者资料.12名患者共收集105枚成熟卵母细胞,全部采用钙离子载体A23187联合6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)进行激活处理,观察卵母细胞激活后的原核形成及胚胎发育情况.结果 激活周期的受精率及卵裂率分别为63.81％(67/105)和88.06％(59/67),较既往周期的受精率[23.96％(23/96)]和卵裂率[69.57％(16/23)]均显著升高(P＜0.05);激活周期中可移植胚胎及优质胚胎数量较既往周期均显著提高,分别为(3.02±2.51)vs.(1.41±0.58)枚和(1.70±1.36)vs.(0.31±0.52)枚(P＜0.05);既往ICSI受精低下或失败的12例患者中,卵母细胞激活处理后5例患者获得临床妊娠.结论 辅助激活技术可以改善ICSI受精失败或受精低下患者的受精率及胚胎发育质量.
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5种炎性刺激剂对小鼠腹腔巨噬细胞生成肿瘤坏死因子的影响
肿瘤坏死因子α(TNFα)主要由单核巨噬细胞分泌,近年研究表明,它在炎症中起重要作用,如诱发皮肤炎症反应,引起过每性变态反应等.
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钙离子载体A23187联合卵细胞胞质内单精子注射治疗圆头精子症2例并文献复习
目的:探讨圆头精子症的病因、圆头精子的受精能力,以及人工激活技术在圆头精子症患者卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)治疗中的应用价值. 方法:回顾性分析2例圆头精子症ICSI治疗病例,患者配偶的卵子经ICSI处理后,随机分为2组,其中1组卵子接受钙离子载体A23187激活处理,另外1组不接受任何处理.结合国内外文献对圆头精子症的发病原因、受精能力和治疗方案进行复习和讨论. 结果:A23187激活处理组均获得优质胚胎,而常规处理对照组的卵子则未受精、未卵裂、无优质胚胎、无囊胚形成.2例患者均移植A23187激活组的优质胚胎,获得妊娠并分娩健康婴儿. 结论:A23187可以用于圆头精子症患者的ICSI治疗,并获得较好的临床结局,但还应密切关注A23187的安全性问题.
关键词： 钙离子载体A23187 圆头精子 卵细胞胞质内单精子注射 卵子激活 -
钙离子载体和Poly(I:C)诱导人外周血来源的树突状细胞成熟的研究
目的:探讨从健康人外周血中体外诱导培养出成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法.方法:用密度梯度离心法分离人外周单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入GM-CSF和IL-4,培养5天后分5组:第1组为对照组,仅含有上述细胞因子;第2组,加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I:C)];第3组,加入钙离子载体(A23187);第4组,加入Poly(I:C)和CI;第5组,加入TNF-α.显微镜下观察培养细胞形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC刺激T细胞的增殖活性.结果:第四组细胞具有典型的树突状细胞的特征,且高表达CD83、CD80、CD86和CD40分子,具有更强的刺激T细胞增殖能力.结论:经过组合细胞因子诱导能够培养出PBMC来源的DC,且经CI和Poly(I:C)进一步诱导后获得更成熟和功能更强DC.
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鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞
目的 探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法.方法 用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6 d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(Poly I∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入Poly I∶C和CI A23187.第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性.结果 Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力.结论 PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC.
关键词： 树突状细胞 多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸 钙离子载体A23187 -
钙离子载体A23187对人红白血病细胞株K562超微结构的影响
目的 观察钙离子载体A23187对人红白血病细胞株K562超微结构的影响,为白血病的治疗提供新思路.方法 体外培养K562细胞,密度增至(1～2)×105/L时随机分为观察组和对照组(容积均为5 mL),观察组取2mmol/L细胞溶液加入A23187溶液7.5 μL,至终浓度为3μmol/L;对照组加入等体积生理盐水.细胞培养到第10、20和30 min时,依次取两组细胞溶液离心、制备超薄切片,H-7500型透射电镜下观察其超微结构.结果 对照组K562细胞超微结构无明显改变;观察组K562细胞线粒体呈现空泡样改变和基质深染.结论 钙离子载体A23187在体外可能通过改变人红白血病细胞株K562细胞超微结构诱导其凋亡,此为白血病的临床治疗提供了一种新思路.
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钙离子载体A23187对喉癌细胞株胞内游离钙浓度及凋亡的影响
目的:观察钙离子载体A23187对喉癌细胞株(Hep-2)胞内游离钙[Ca2+]i浓度及凋亡的影响.方法:将Hep-2随机分成3个A23187处理组及对照组;以Fura-2/AM为荧光指示剂,RF-5301PC荧光光度计测定处理后5、24、48 h后Hep-2[Ca2+]i浓度的变化;用FACS 420型流式细胞仪测定细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳分析不同时间A23187处理Hep-2后特征性降解.结果:A23187处理组5、24、48 h Hep-2[Ca2+]i的浓度分别为(123.48±21.54)nmol/ L、(110.54±11.32) nmol/L、(88.63±9.95)nmol/L均高于对照组(54.23±8.73)nmol/L, 差异有统计学意义(P＜0.01).48 h组指标值较5 h组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).A23187处理5、24、48 h细胞凋亡率分别为(3.84±1.12)、(7.65±1.35)、 (9.49±1.31),均高于对照组(2.63±0.75),差异有统计学意义(P＜0.01),且有时间-反应关系(r＝0.923、0.748).DNA电泳呈典型的"梯状"条带.结论:A23187可影响Hep-2[Ca2+]i浓度,Hep-2[Ca2+]i与其凋亡率密切相关.
关键词： 钙离子载体A23187 细胞内钙 喉肿瘤 细胞凋亡 -
孕酮和A23187对精子顶体反应、活力和活率的影响
目的 研究精子顶体反应诱导剂孕酮和A23187对顶体反应(Acrosome reaction,AR)、精子活力和活率的影响.方法 10例健康生育男子精液,采用Percoll密度梯度分离法优选精子,用FITC-PSA荧光染色法分析AR,用伊红Y染色法分析精子活率,用精子自动分析仪分析精子活力.结果 当A23187终浓度为5、10、20及40μmol/L时,顶体反应率均明显增加,与对照组比较,差异均有显著性(P＜0.05).随着A23187浓度增加,精子活力和活率均明显下降(P＜0.01).当孕酮终浓度为5、10、20及40μg/mL时,顶体反应率均明显增加,与对照组比较,差异亦均有显著性(P＜0.05).但随着孕酮浓度增加,精子活力和活率与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05),与A23187组比较,差异均有显著性(P＜0.001).结论 孕酮诱导顶体反应过程不影响精子活力和活率,与A23187比较更接近生理过程.
关键词： 孕酮 钙离子载体A23187 顶体反应 精子活率 精子活力 -
人工激活胚胎的性染色体分析和IGF-Ⅱ表达研究
目的观察钙离子载体A23187联合嘌呤霉素激活胚胎的性染色体和胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)表达.方法收集体外成熟周期(in vitro maturation and intracytoplasmic sperm injection, IVM-ICSI) 和卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)中受精失败的卵母细胞95枚,采用钙离子载体A23187和嘌呤霉素激活.应用荧光原位杂交技术分析来源于2PN2PB胚胎的性染色体;免疫组化检测IGF-Ⅱ的表达,并与正常胚胎、孤雌胚胎相比较.结果钙离子载体A23187联合嘌呤霉素能有效地激活ICSI后22 h未受精卵母细胞,激活胚胎能发育到囊胚阶段.激活胚胎的性染色体为5枚XX,8枚 XY.激活胚胎的IGF-Ⅱ表达与正常胚胎相近,明显较孤雌胚胎增强.结论钙离子载体A23187联合嘌呤霉素是一种安全、有效的激活方式,有希望成为ICSI受精失败的有效补救措施.
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钙离子载体A23187对转化生长因子β1刺激的肝星状细胞增殖、周期及凋亡蛋白caspase-3表达的影响
目的 研究钙离子载体A23187对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肝星状细胞增殖、周期及凋亡蛋白caspase-3表达的影响.方法 将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃ 、50 mL/L CO2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白组、TGF-β1(5 ng/mL)组、TGF-β1+低、中、高剂量钙离子载体A23187组,即5 ng/mL TGF-β1刺激24 h,再分别加入1、2、4μmol/L不同剂量钙离子载体A23187作用24 h后,用M T T比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白免疫印记测定凋亡蛋白caspase-3表达.结果 不同浓度钙离子载体A23187均能显著抑制细胞增殖(P<0.05),且随着剂量的增加,细胞的相对增殖率(RGR)降低,低、中、高剂量组分别为85.93%、61.71%、48.43%,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);不同处理组G1期细胞比例、S+G2期细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),钙离子载体A23187剂量越大,G1期细胞比例越高,S+G2期细胞比例越低(P<0.05).随着钙离子A23187浓度的增加,细胞内caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 钙离子载体A23187可能通过阻滞大鼠肝星状细胞由G1期进入S期和G2期,抑制细胞增殖,同时上调凋亡蛋白caspase-3的表达.
关键词： 肝星状细胞 钙离子载体A23187 增殖 周期 Caspase-3
