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丹参酚酸B通过Sirt-1对大鼠肝纤维化模型的影响
①目的研究丹参酚酸 B（SalB）抗大鼠肝纤维化分子的作用机制。②方法48只大鼠随机分为4组：对照组（A 组），DMN 损伤组（B 组），SalB 空白给药组（C 组），DMN 损伤＋SalB 预处理组（D组）。B、D 组大鼠腹腔注射 DMN，每周3次，给药4周；D 组大鼠在第一次注射 DMN 同时灌胃给予SalB 溶液；C 组也同时给该药，每天1次，连续给药6周。后一次灌胃结束后禁食24小时，取肝脏标本，测定肝匀浆羟脯氨酸（HYP）水平。明胶酶谱法检测 MMP-2、MMP-9活性，Western Blot 检测 AP-1和 Sirt-1表达水平。③结果 B 组大鼠肝脏 HYP 水平、MMP-2、MMP-9活性以及 AP-1蛋白表达水平明显上升；与 B 组相比，D 组大鼠肝脏 HYP 水平、MMP-2、MMP-9活性以及 AP-1蛋白表达水平明显下降。另外，B 组大鼠 Sirt-1蛋白表达水平明显下降，而 D 组 Sirt-1蛋白表达水平水平明显上升。④结论SalB 具有明显的抗肝纤维化作用，其机制与 SalB 激活 Sirt-1表达从而抑制 MMP-2、MMP-9的活性密切相关。
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丹参酚酸B和山楂黄酮合用对游离脂肪酸诱导的大鼠肝细胞脂质沉积和凋亡的作用
目的：研究丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导大鼠肝细胞脂质沉积和凋亡的作用及其机制。方法采用肝脏原位胶原酶灌注法分离大鼠原代肝细胞，油酸：棕榈酸＝2：1造模。原代肝细胞和 HepG2均分为正常对照组、模型组、模型＋丹参酚酸 B 组、模型＋山楂黄酮组、模型＋丹参酚酸 B＋山楂黄酮组、模型＋SP600125组、丹参酚酸 B 组、山楂黄酮组、丹参酚酸 B＋山楂黄酮组、SP600125组、DMSO 对照组。游离脂肪酸刺激原代肝细胞的浓度为250μmol／L、刺激 HepG2的浓度为500μmol／L；丹参酚酸 B 的浓度为1μmol／L；山楂黄酮的浓度为5μg／mL；SP600125的浓度为10μmol／L。观察①油红 O 染色：丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激的肝细胞内脂滴变化的影响；②ELISA 法：丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导的肝细胞凋亡的影响；③高内涵筛选 Hoechst33258染色：丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导的肝细胞凋亡的影响；④Western blot：丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激的肝细胞内 p-JNK 表达的影响。结果①油红 O 染色显示：与正常对照组比较，游离脂肪酸作用于原代肝细胞、HepG2细胞24 h 后，细胞内脂滴含量显著增加（P 均＜0．01）。丹参酚酸和山楂黄酮可显著减少游离脂肪酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞内脂滴的含量（P ＜0．01，P ＜0．05）。② ELISA 检测结果：与正常对照组相比游离脂肪酸组原代肝细胞及 HepG2细胞吸光值[Absorbance（A405 nm-A490nm）]显著增高，细胞凋亡明显（P 均＜0．01）；丹参酚酸 B 和山楂黄酮显著抑制游离脂肪酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞凋亡（P 均＜0．01）。③高内涵筛选 Hoechst33258染色：与正常对照组比较，游离脂肪酸组细胞核平均荧光强度值及凋亡率明显增高（P 均＜0．01）。丹参酚酸 B 和山楂黄酮显著降低游离脂肪酸刺激的原代肝细胞细胞核平均荧光强度值及凋亡率（P 均＜0．01）。HepG2细胞检测结果与原代肝细胞趋势一致。④Western blot 结果：与正常对照组比较，游离脂肪酸刺激原代肝细胞24 h 时可显著促进 p-JNK 的表达（P 均＜0．01）。丹参酚酸 B 和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激原代肝细胞24 h 时 p-JNK 的表达有显著抑制作用（P 均＜0．01）。HepG2细胞 p-JNK 结果与原代肝细胞趋势一致。结论①丹参酚酸 B 和山楂黄酮合用能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内脂滴增加及肝细胞凋亡。②丹参酚酸 B 和山楂黄酮合用能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内 JNK 的活化。二者是丹参酚酸 B 和山楂黄酮合用防治非酒精性脂肪性肝炎的重要机制。
