长距离PCR技术的建立及其在重型血友病甲Ⅷ因子倒位基因诊断中的应用
摘要： 血友病甲(HA)是由于凝血因子Ⅷ基因缺陷所致的X-连锁遗传性出血疾病,其基因突变高度异质.1993年,Lakich和Naylor分别发现,此前多年来找不到FⅧ基因缺陷的约半数重型HA的患者,是由于FⅧ基因第22内含子(IVS22)内的F8A1与其远端约400～500kb处高度同源的序列F8A2或F8A3发生基因倒位所致.迄今,国际上检测这种基因倒位都是用Southern印迹杂交技术.虽然这种技术能够准确地查出是否有基因倒位,并能区分远端倒位与近端倒位等不同的类型,但此技术操作步骤繁多,流程长,出结果慢,难度大,且要操作放射性同位素标记的探针等.我们从1996年开始在国际上率先研究利用长距离DNA扩增技术(LD-PCR)替代Southern印迹杂交进行FⅧ基因倒位的诊断.经二年努力终获成功,并进行了推广应用.
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艾塞那肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究
目的 研究艾塞那肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 60只Wistar大鼠经线栓法建立大鼠大脑缺血再灌注动脉模型,随机分为艾塞那肽组(n=30)和生理盐水组(n=30),再灌注后60min给药,比较两组再灌注后24h的Bederson 评分、梗死灶体积、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)等指标.结果 艾塞那肽组大鼠再灌注24h后Bederson 评分、梗死灶体积、SOD水平较生理盐水组显著下降(P＜0.05),VEGF水平较生理盐水组显著升高(P＜0.05).结论 艾塞那肽对大鼠脑缺血再灌注损伤有神经保护作用.
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脱细胞异体真皮基质填塞术治疗高位肛瘘的临床疗效
目的 探讨应用脱细胞异体真皮基质(acellular dermal Matrix,ADM)填塞治疗高位肛瘘的临床疗效.方法 回顾性分析2013年9月～ 2015年3月就诊于新疆医科大学第一附属医院的52例高位肛瘘患者的临床资料,分为ADM治疗组和传统挂线对照组进行术后相关指标的分析.结果 两组患者在性别(x2=0.087,P=0.768)、年龄(t=0.231,P=0.389)、民族(x2=0.391,P=0.532)、病程(t=0.316,P=0.690)、随访时间(t=0.512,P=0.209)上差异均无统计学意义,ADM组术后相关指标如肛门失禁(x2=5.532,P=0.019)、肛门畸形(x2=4.457,P=0.035)、术后疼痛时间(t=19.652,P=0.033)、术后愈合时间(t=14.186,P=0.003)及生活质量评分(t=13.188,P=0.041)差异均有统计学意义(P＜0.05),明显优越于挂线组,但复发率(x2=4.127,P=0.042)较挂线组偏高.结论 运用ADM治疗高位肛瘘具有微创、缩短愈合时间和保护肛门功能及外形等优势.
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lincRNA-p21抑制肾癌细胞增殖作用
目的 探讨lincRNA-p21对肾癌细胞增殖作用的影响.方法 收集17例重庆市第七人民医院内分泌肾病科肾癌患者的组织样本,利用RT-PCR检测肾癌及其癌旁组织中lincRNA-p21的表达水平及人肾癌细胞系786-O、人胚肾细胞系HEK-293细胞中lincRNA-p21的表达水平,用siRNA降低lincRNA-p21的表达后观察其对细胞增殖、凋亡情况的影响以及对Bax、Noxa、Puma等p53信号通路中癌症相关基因表达水平的影响.结果 在肾癌患者的癌灶组织中,lincRNA-p21的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),786-O较HEK-293细胞lincRNA-p21 mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);用siRNA降低lincRNA-p21的表达后发现786-O细胞增殖增强,凋亡减弱,并且Bax、Noxa、Puma等癌症相关基因表达水平也被抑制(P＜0.05).结论 lincRNA-p21可能通过参与p53信号通路的转导,对肾癌细胞的增殖起到抑制作用,提示lincRNA-p21可作为分子靶点用于肾癌的靶向治疗.
关键词： lincRNA-p21 肾癌增殖 P53 -
幽门螺杆菌感染和老年颈动脉粥样硬化的关系
目的 研究幽门螺杆菌(Hp)感染和老年颈动脉粥样硬化间的关系.方法 选取确诊为老年颈动脉粥样硬化250例,检测Hp感染状况、颈动脉粥样硬化程度、血清氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)及各项血脂水平,对统计结果进行比较分析.结果 Hp感染组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及血清Ox-LDL各项指标水平与非Hp感染组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而重度Hp感染组TC、TG及血清Ox-LDL指标水平均明显高于轻度Hp感染组,且差异有统计学意义(P＜0.05);重度Hp感染组的动脉硬化程度达重度所占比例为52.78％,明显的高于非Hp感染组(6.92％)和轻度Hp感染组(23.81％),且差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 幽门螺杆菌感染能够引起老年颈动脉粥样硬化患者血脂代谢紊乱,导致血脂水平升高.
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OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用
目的 研究卵巢癌特异性结合肽(OSTP)及联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长及凋亡的影响.方法 体外培养卵巢癌A2780细胞,随机分为4组:溶剂对照组(1640和0.1％ DMSO组)、OSTP组、紫杉醇组、OSTP联合紫杉醇组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测OSTP对A2780细胞生长的影响;用Annexin-V-FITC和PI双染法标记A2780细胞,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT法检测OSTP以不同浓度作用于卵巢癌A2780细胞时,可对该细胞的生长起到抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现:不同浓度的OSTP(20、40、80、160、320μmol/L)对A2780细胞的凋亡率分别7.88％、8.348％、8.727％、9.393％和10.68％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),提示OSTP可诱导细胞凋亡.OSTP和紫杉醇联合应用,在不同的预处理组(加OSTP80μ mol/L 0、3、6、12h)后再加紫杉醇10μmol/L作用48h,结果发现细胞凋亡率分别是39.40％、53.09％、48.18％和45.62％,均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值,且差异有统计学意义(P ＜0.001).提示OSTP能增强紫杉醇诱导的卵巢癌A2780细胞凋亡作用.结论 OSTP对卵巢癌A2780细胞有生长抑制及凋亡作用,尤其是OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,对于探讨和开发OSTP作为靶向化疗增敏剂治疗卵巢癌有良好的应用前景.
关键词： 卵巢癌a2780细胞 OSTP 紫杉醇 细胞凋亡 -
核因子-κB在放射性心脏损伤中的表达
目的 核因子-κB在放射性心脏损伤中的表达及机制探讨.方法 共32只SD大鼠,随机将大鼠分为3组,1组不接受任何干预,其余2组分别用6Mv高能X线照射心脏,剂量分别为15Gy和18Gy.照射后饲养3个月后,以水合氯醛过量麻醉法处死大鼠,取其心脏组织.进行心肌组织HE染色及Masson染色,观察心肌变化,通过核因子-κB的免疫组化染色,显微镜下观察核因子-κB大致的表达情况并使用计算机测定其平均光密度值.结果 HE染色镜下观察照射组心肌细胞排列紊乱,部分细胞出现变性及坏死,细胞核排列不规则,对照组心肌细胞排列正常.Masson染色镜下可见照射组心肌内胶原组织明显增多,粗大胶原及纤维相互连接成网状,纤维化明显,对照组未见明显改变.免疫组化镜下观察可见对照组核因子-κB有少量表达,照射15Gy组、照射18Gy组的表达均增强(P值分别为0.002、0.000).但两照射组之间比较差异无统计学意义(P =0.095).结论 核因子-κB是放射性心脏疾病发生、发展的重要因素,其表达不随照射剂量增大而增强.
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舒芬太尼皮下PCA用于术后镇痛的可行性研究
目的 研究经皮下舒芬太尼病人自控镇痛(PCSA)用于面神经显微血管减压术(MVD)病人的疗效、安全性及其可行性.方法 选择MVD患者62例,随机分为舒芬太尼病人自控皮下镇痛组(PCSA组,30例)与病人自控静脉镇痛组(PCIA组,32例).于手术结束时放置PCA泵并注射负荷量,记录术后1h、6h、12h、24h、48h、72h各时间点的疼痛评分、镇静评分、生命体征、不良反应以及PCA需求按压和有效按压次数及结束PCA后患者总体满意度.结果 两组患者各时间点间镇痛镇静评分无显著性差异(P>0.05);各时间点间需求按压和有效按压次数无显著性差异(P>0.05);两组并发症发生率无显著性差异(P>0.05);结束PCA后两组患者总体满意度均较高,组间无显著性差异(P>0.05).结论 舒芬太尼PCSA和PCIA镇痛镇静效果及不良反应无显著性差异,而PCSA更简便实用.
关键词： 面神经显微血管减压术 病人术后自控镇痛 皮下注射 静脉注射 舒芬太尼 -
氟比洛芬酯用于微血管减压术术后镇痛疗效的观察
目的 观察微血管减压术后患者自控静脉镇痛中应用氟比洛芬酯脂微球载体注射液的镇痛效果与不良反应.方法 选择ASAⅠ～Ⅱ级微血管减压术后行自控静脉镇痛的患者80例,随机分为4组.A组镇痛泵中给予芬太尼0.5mg+氟比洛芬酯100mg+生理盐水稀释至100ml,B组关硬膜前静脉给予氟比洛芬酯50mg,镇痛泵中芬太尼0.5mg+氟比洛芬酯100mg+生理盐水稀释至100ml, C组镇痛泵中芬太尼1mg+昂丹司琼16mg+生理盐水稀释至100ml,D组镇痛泵中曲马多800mg+昂丹司琼16mg+生理盐水稀释至100ml.四组均于术毕前1小时静脉给予昂丹司琼8mg.观察四组术后0、2、6、12、24h的镇痛评分、镇静评分和不良反应发生率.结果 四组术后24h内镇痛评分各时间点相比,B组明显优于A组,A组明显优于C组,C组明显优于D组;镇静评分各组间无显著差异;不良反应发生率中以恶心呕吐发生率高,D组较其他各组更具显著差异.A组和B组不良反应发生率明显低于C组和D组.结论 氟比洛芬酯可安全应用于微血管减压术的术后镇痛,具有超前镇痛、镇痛效果好的特点,不良反应发生率明显低于单纯应用芬太尼或曲马多进行术后镇痛.
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组织块悬液法建立兔食管VX2移植瘤模型的研究
目的 利用组织块悬液法建立兔VX2食管移植瘤模型,观察其肿瘤的成功率,生长情况及转移情况,为研究食管癌提供一个更好的研究方法.方法 将VX2肿瘤制作成组织块悬液,直接注射至兔食管黏膜下层,每周进行B超检测,观察肿瘤的生长情况,并结合大体解剖及病理学检查,评价其生物学特性.结果 14只实验兔,成瘤率100％,其中1只死于并发症(术后感染),1只食管穿孔,余皆正常成瘤,其成瘤时间约为5～9天左右,14天后可出现吞咽困难,B超示食管内见一低回声结节(紧贴食管后壁),3周后实验兔明显消瘦,进食困难,中位生存时间约为20天.结论 该方法可成功制成兔VX2食管肿瘤模型,生长稳定,难度较易.
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Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达与功能研究
目的 探讨Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达特征及其功能.方 法采用RT-PCR和免疫荧光技术,从基因和蛋白水平检测Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞(RA FLS)的表达;采用ELISA方法,检测lgA对RA FLS分泌IL -6的影响.结果 采用RT -PCR和免疫荧光染色方法,均检测到Fcα受体在RA FLS的表达.sIgA与RAFLS孵育12h后,细胞分泌IL -6的水平明显增高,差异具有显著性(P＜0.01).mIgA与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL -6的量无明显改变(P＞0.05).sIgA +TNF-α同时与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL -6含量明显高于sIgA或TNF -α单一组(P＜0.01).结论 Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞存在表达,sIgA增高RA FLS分泌IL -6的水平,并与TNF -α产生协同作用.
