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六甲铵等对梭曼膦酰化电鳐AChE老化的影响
生理pH条件下,由于梭曼膦酰化乙酰胆碱酯酶(AChE)老化的速度非常快,不能够准确测定某些药物对膦酰化AChE老化的速率的影响;在碱性条件下,由于膦酰化AChE老化速率变慢,可以通过测定酶活性间接研究某些化合物对老化是否具有延缓作用.因酶活性受外界条件诸如金属离子、温度、pH变化的影响较大,因此,采用酶活性测定方法研究药物对老化的影响难免会影响结果的准确性.同位素分析方法检测灵敏度高,为了更为准确的判定药物对梭曼膦酰化AChE老化是否具有延缓作用,我们采用放射性同位素标记梭曼,通过直接测定重活化产物研究了六甲铵、十甲铵对梭曼膦酰化AChE老化的影响.(1)首先利用层析法,在尽量延缓老化条件下,制备出梭曼膦酰化乙酰胆碱脂酶.
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脑内小分子检测技术及人参皂苷入脑的研究进展
许多中药在治疗中枢神经系统疾病均有疗效,但其作用机制并不清楚.本文简要介绍了血脑屏障(BBB)的生理组成,药物穿透BBB的途径,并介绍了3种主要针对脑内小分子物质的检测技术:高效液相色谱法、免疫组织化学法和放射性同位素标记法.这些技术将有助于小分子入脑的研究,并得出它们在脑组织内的分布以及判断是否能透过血脑屏障,从而探索它们中枢活性的作用模式.综合分析国内外的研究人员针对人参皂苷进行了其入脑的研究可得:人参皂苷可以到达BBB,作用于微血管内皮细胞或星形胶质细胞间接发挥中枢活性,至于是否能透过BBB到达神经元,仍需进一步的研究确认.
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染色体α卫星探针在染色体畸变诊断中的应用
目前临床确诊染色体畸变的主要方法是核型分析,但其检测周期长,诊断结果在一定程度上会受分析者经验影响.近年来,荧光原位杂交(FISH)技术利用非放射性同位素标记核酸探针对分裂间期和分裂期细胞作原位杂交,程序简单、诊断周期短且能识别染色体显带技术难以确认的一些畸变.我们采用人13、21号染色体α卫星探针直接在分裂间期和中期细胞上作FISH,分析13和21号染色体倍性,并着重探讨FISH技术在临床诊断中的应用价值.
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分子病理学技术应用原理和适用范围
1 Southern杂交:Southern杂交是1975年由Southem提出,并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点,已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的常用手段之一[1]。Southern杂交的基本方法是,从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化,通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段,然后使这些DNA片段在原位发生变性,并以凝胶转移到另一种固相支持物如硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,同时保持各个DNA片段的相对位置不变。再用已标记的(通常为放射性同位素标记,也可用非放射性标记)DNA或RNA探针与固着于固相支持物上的DNA杂交。经放射自显影或化学显色的方法确定与探针互补的电泳条带的位置,从而达到检测和分析的目的。
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长距离PCR技术的建立及其在重型血友病甲Ⅷ因子倒位基因诊断中的应用
血友病甲(HA)是由于凝血因子Ⅷ基因缺陷所致的X-连锁遗传性出血疾病,其基因突变高度异质.1993年,Lakich和Naylor分别发现,此前多年来找不到FⅧ基因缺陷的约半数重型HA的患者,是由于FⅧ基因第22内含子(IVS22)内的F8A1与其远端约400~500kb处高度同源的序列F8A2或F8A3发生基因倒位所致.迄今,国际上检测这种基因倒位都是用Southern印迹杂交技术.虽然这种技术能够准确地查出是否有基因倒位,并能区分远端倒位与近端倒位等不同的类型,但此技术操作步骤繁多,流程长,出结果慢,难度大,且要操作放射性同位素标记的探针等.我们从1996年开始在国际上率先研究利用长距离DNA扩增技术(LD-PCR)替代Southern印迹杂交进行FⅧ基因倒位的诊断.经二年努力终获成功,并进行了推广应用.
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医用回旋加速器原理
去年年底,南京军区福州总医院引进了美国GE公司正电子发射型计算机断层扫描机PET-CT及医用PETtrace回旋加速器,该设备在临床上的投入使用标志着医院在影像诊断领域进入了世界领先水平.PET(Positron Emission Tomography)是一种放射性示踪剂成像技术,将发射正电子的放射性同位素标记在示踪化合物上,再注射到研究对象体内,这些示踪化合物就可以用于活体示踪生理和生化过程,以达到研究人体病理和生化过程的目的.目前,许多有价值的放射性同位素示踪剂已经开发并广泛应用于基础和临床研究,这些示踪剂主要使用11C、13N、15O、18F等正电子核素进行标记,由于它们的半衰期很短,必须由医用回旋加速器适时生产,并在较短的时间内标记合成出示踪剂.回旋加速器是放射性同位素生产系统中大和复杂的部分.
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PCR-ELISA检测葡萄球菌肠毒素A
葡萄球菌肠毒素(SE)是引起食物中毒和医院感染的重要病原.金葡菌肠毒素分为7个血清型.近年来,国外学者又发现了新的血清型即SEH[1]、SEG、SEI[2].近来发现[3],造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA),80%以上产生肠毒素,个别医院分离株几乎100%产生肠毒素.肠毒素的检测有生物学方法、免疫学方法、分子生物学方法等,近年来又发展基因探针的检测方法,由于放射性同位素标记探针的半衰期及放射污染特点,限制了该技术的推广应用,聚合酶链反应(PCR)在临床应用时,遇到了一些问题,比如灵敏度的特异性问题、污染问题,因为存在TapDNA聚合酶抑制物质而致假阳性结果[4].虽然可以通过斑点技术,Southern杂交法提高PCR的灵敏度和特异性,但是,这些方法多存在费时、繁琐、易污染等问题,不适合大量标本的检测,在参考国内外文献的基础上,本文建立了PCR-ELISA法检测金葡菌肠毒素基因的方法.结果报告如下.
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两种方法测量抗菌肽s-thanatin大鼠体内血药浓度的结果比较
目的:分别用间接竞争ELISA法和放射性同位素标记法测定不同时间点抗菌肽s-thanatin(Ts)在动物体内的血药浓度变化,比较两种方法测量结果的差异并分析原因.方法:制备Ts的多克隆抗体,分离纯化多克隆抗体并建立间接竞争ELISA方法的标准曲线.用125I对Ts进行标记,制作同位素标记法的标准曲线.18只SD大鼠随机分为3组,分别按20、10和5 mg·kg-1的剂量尾静脉注射给药(放射性同位素标记法中注射Ts为125I-Ts),于给药后不同时间点眼眶取血,分别用两种方法测定动物体内血药浓度,计算药物半衰期.后,比较两种方法测量结果的差异,并对其进行分析.结果:间接竞争ELISA法测得Ts在动物体内的半衰期为1.5 h左右,而用放射性同位素标记法测得的半衰期为6 h左右.放射性同位素法测得的生物利用度大约为间接竞争ELISA法的20倍.结论:同位素示踪法测得的药物浓度为动物体内药物代谢物的总量,因此需要借助其它分析仪器才能进行准确的定量试验.
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免疫分析在体内药物分析中的应用及其发展
美国免疫学家Pressmen和Eisen于1950年成功地应用碘的放射性同位素标记抗原,开创了放射免疫的先河.随后,放射免疫分析的主要原理被广泛采用并发展成为使用各种结合剂和各种标记物的先进分析技术,衍生出了多种标记免疫分析技术,如酶免疫分析,荧光分析等.
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90Y标记抗人成骨肉瘤单抗体内生物分布
目的:研究抗人成骨肉瘤单抗(OSMcAb)标记放射性核素90Y在动物体内生物分布情况.方法:应用DTDA环酸酐法将90Y标记抗人成骨肉瘤单克隆抗体(OSMcAb),动物体内观察125Ⅰ-OSMcAb与90Y-OSMcAb生物分布情况及不同90Y标记物体内分布情况,在裸鼠体内观察90Y-OSMcAb肿瘤内浓度现象.结果:90Y标记OSMcAb动物体内生物分布与125Ⅰ-OSMcAb相似,不同络合物配体影响90Y体内生物分布,经90Y标记OSMcAb在肿瘤内浓聚.结论:90Y标记的OSMcAb体内有稳定的分布规律,不同标记物配体影响90Y体内分布.
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131I标记内皮抑素的方法学研究
目的 探索用131I标记内皮抑素(Endostatin,ES)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其生物活性.方法 用Iodogen法对ES进行131I标记,用正交设计筛选佳标记条件;对标记产物用Sephadex G-25层析柱进行分离纯化,并计算标记率,用纸层析法测放化纯;产物静置以观察其体外稳定性;用人脐静脉内皮细胞系ECV304观察其生物活性.结果 Iodogen法佳标记条件为ES 20 μg,Iodogen 50 μg ,131I 18.5MBq,反应时间1 min,标记率可达65.0%.产物在体外稳定;细胞培养观察其对内皮细胞抑制率高于单用ES或131I,有显著性差异.结论 用Iodogen法对ES进行131I标记简单高效,标记产物生物活性未受明显破坏.