Sabin株脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法的建立及应用
摘要： 目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine, sIPV) D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,用于sIPV的体外效力评价.方法 以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠,获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水.牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体(多抗)和小鼠单抗.以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选,建立D抗原定量检测的双抗体夹心 ELISA.对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证.结果 纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性,纯度分别达到80％和90％以上.经抗体配对筛选,确定3H10、901、1H10作为检测抗体,分别用于I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立.I、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000,1 : 10 000, 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1 : 10 000,1 : 20 000,1 : 10 000.建立的I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4～13.0、0.4～12.0和0.4～20.0 DU/ml,线性回归决定系数≥0.99.该法能特异性检出D抗原,与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应.用该法对高、中、低浓度样品进行测定, I、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值(×100％)分别为97％～111％、91％～104％和95％～102％、相对标准偏差分别≤7％、≤9％和≤10％;采用该法检测sIPV生产过程中的样品,显示出抗原纯化趋势.结论 建立了脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法,可有效用于sIPV的体外效力评价.
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贴片疫苗诱导的抗炭疽保护性免疫
经皮免疫(TCI)是一种向表皮免疫细胞传递抗原和佐剂的无针头技术.为了解决抗炭疽生物防御应急所需的要求,英国防御科学和技术实验室Kenney等设计了一种新的疫苗释放系统--干燥黏性贴片,从而简化了接种方法,提高了炭疽亚单位疫苗的耐受性.
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持续性抗原刺激系统
加拿大McMaster大学卫生科学中心GonezVargas等将表达人因子IX(hFIX)的C2C12成肌细胞包入微囊制成持续性抗原刺激系统(CASS).实验组小鼠腹腔注射含3×106活细胞的微囊,对照组小鼠则皮下免疫hFIX加等量弗氏完全佐利,并在第7、14、21天用弗氏不完全佐剂加等量hFIX进行加强免疫.于一定时间采集血样检测免疫应答情况.
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无细胞或全细胞百日咳疫苗接种新生小鼠的黏膜免疫研究
据世界卫生组织预计,每年有4000万儿童感染百日咳,导致约36万儿童死亡.百日咳杆菌通过黏附于呼吸道上皮细胞而建立感染,因此鼻腔接种疫苗可刺激局部IgA产生,并诱导局部细胞免疫应答.
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11价肺炎球菌疫苗与无细胞百日咳疫苗同时接种可降低其抗体应答
在肺炎球菌结合疫苗(PCV)中,通常将多糖抗原与常用于其他疫苗的蛋白载体相结合.11价肺炎球菌疫苗(PncD/T11)含7种与破伤风类毒素(TT)结合的多糖(1、4、5、7F、9V、19F和23F型多糖)及4种与白喉类毒素(DT)结合的多糖(3、6B、14和18C型多糖).
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CD40单克隆抗体佐剂诱导的T细胞应答
以纯化重组蛋白为免疫原的疫苗均有免疫原性不强的缺点,传统铝盐佐剂是弱佐剂,只能增强部分抗原的免疫原性,且主要诱导TH2型免疫应答,不能对细胞内感染产生有效的免疫应答,因而需要探索能够诱导TH1型免疫应答的新型佐剂.
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编码膜结合IL-4或IL-12的质粒可明显增强癌胚抗原DNA疫苗的活性
DNA疫苗可诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和体液免疫应答,是抗肿瘤和预防传染病的一种行之有效的方法.已有实验证明,细胞因子具有增强DNA疫苗免疫应答的佐剂作用,但循环性细胞因子会引起一些不良生理反应,所以此项研究试图利用膜结合表达的方式将细胞因子固定在注射部位,达到既能产生免疫佐剂作用,又不引起明显的不良反应.
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婴儿初免DTPa-HBV-IPV/Hib六价联合疫苗的安全性、反应原性和免疫原性
由于推荐婴儿通过主动免疫来预防的儿童疾病种类逐渐增多,使得儿童6岁前的免疫程序日益复杂,免疫针次增多.为此,比较了初免六价联合疫苗--无细胞百日咳疫苗DTP(DTPa)-乙型肝炎疫苗(HBV)-脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)/b型流感杆菌(Hib)结合疫苗(DTPa-HBV-IPV/Hib)与分开接种DTPa-IPV/Hib和HBV在婴儿中的安全性、反应原性和免疫原性.
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B群脑膜炎球菌外膜囊和脱毒的脂寡糖预防同源和异源脑膜炎球菌感染及脓毒性休克的效力
脑膜炎球菌是一种严重的细菌性病原体,可引起威胁生命的侵袭性细菌感染.为研究B群脑膜炎球菌外膜囊(OMV)和脱毒的脂寡糖(dLOS)的保护效力,研究者采用脱氧胆酸钠处理B群脑膜炎球菌N44/89和N603/95株获得OMV和dLOS,并将OMV和dLOS与参考疫苗(VA-MENGOC-BC(R),古巴)进行比较.
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格林-巴利综合征与甲型肝炎疫苗接种可能有关
以色列Schneider儿童医学中心Blumenthal等报道1名健康儿童接种甲型肝炎疫苗(HAVRIX)与格林-巴利综合征之间存在时间上的关联.
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亚洲的禽流感疫苗接种
由甲型流感病毒H5N1亚型导致的高致病性禽流感(HPAI)在一些亚洲国家的连续爆发,对于全世界动物和公共卫生是一种严重的威胁.尽管近来已建议疫苗免疫计划,但是现场证据表明仅靠免疫接种并不能达到消灭的目的,如果不合理运用疫苗免疫接种,将可能导致传染病的流行.
