升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB信号的影响
摘要： 目的：研究升降散对 LPS 诱导大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）TLR4表达及其下游 NF-κB 信号通路的影响。方法用不同浓度 LPS（0、2、10μg／mL）诱导 NR8383细胞，采用 Real-time PCR 和 Western Blotting 分别检测 TLR4的 mRNA 和蛋白表达水平。用带有 NF-κB 的质粒转染 NR8383细胞，双荧光素酶报告基因检测 NF-κB 活性，Western Blotting 检测磷酸化 p65表达水平，Real-time PCR 检测细胞因子 TNF-α、A20、IL-6和 IL-1β的 mRNA 表达水平，ELISA 检测细胞上清液中 TNF-α、IL-6和 IL-1β的含量。将升降散作用于 LPS 成功诱导 NF-κB 上调的 NR8383细胞，Real-time PCR、Western Blotting、双荧光报告基因检测和 ELISA 实验检测升降散在 NR8383细胞中对 LPS 诱导 NF-κB 信号通路的影响。结果 LPS 成功诱导 NR8383细胞中 NF-κB 上调，在蛋白表达和 mRNA 表达水平均证实，LPS 能梯度诱导 TLR4高表达，且与 LPS 浓度呈正相关；同时， LPS 能够诱导 TLR4下游 NF-κB 的激活，增加下游靶基因编码细胞因子的合成与分泌，且与 LPS 浓度呈正相关。10μg／mL升降散作用 NR8383细胞后，能抑制 LPS 诱导 TLR4的高表达和下游 NF-κB 的激活。结论 LPS 能梯度诱导 NR8383细胞中 TLR4的高表达及其下游 NF-κB 的激活，升降散能够显著抑制该诱导作用。
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药用辅料红糖的全波长融合指纹图谱研究
目的 研究并建立药用辅料红糖的紫外全波长融合指纹图谱.方法 采用Durashell C18-AM色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm,100 A),乙腈-0.1％三氟乙酸水作流动相,流速1.0 mL/min,梯度洗脱,柱温25℃,采用PDA检测器进行210～400nm全波长检测,使用Waters Empower 3色谱数据软件对210～400 nm紫外全波长数据进行融合,使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进行相似度分析.结果 35批药用辅料红糖的紫外全波长融合指纹图谱经相似度分析后共标出10个共有色谱峰,各批次的指纹图谱相似度均大于0.9,相似度良好.结论 该方法稳定准确,重复性好,可以为制定药用辅料红糖指纹图谱的质量标准提供依据.
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江苏地产太子参代谢物的动态积累分析
目的 分析不同采收时间江苏地产太子参代谢产物的动态积累变化.方法 采用UPLC-Triple TOF-MS/MS技术对样品进行测定,结合Mass数据等对总离子流图主要分子离子峰进行归属,用SIMCA-P软件进行主成分分析.HPLC法测定太子参中指标性成分(主要代谢差异标志物)环肽A、B的含量.结果 共鉴定出12种化合物.主成分得分图显示,不同采收时间太子参样本能较明显地分开;通过载荷图筛选出差异显著的10种标志物,且这10种标志物呈现出不同的变化规律.太子参环肽A(HA)和环肽B(HB)分别在7月下旬和8月上旬含量较高.结论 为揭示不同采收时间太子参中代谢物积累动态规律及确定其药材合理采收期提供基础资料.
关键词： 太子参 UPLC-Triple TOF-MS/MS 代谢产物 积累动态 -
基于UHPLC-QqQ-MS的四逆散水提液中16种主要化学成分的定量研究
目的 建立同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的方法.方法 应用UHPLC-QqQ-MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量.结果 柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、橙皮素、儿茶素、甘草苷、甘草酸、甘草素、绿原酸、没食予酸、芍药苷、芍药内酯苷、异甘草素、异绿原酸A、橙皮苷在负离子模式下响应良好.结论 本实验所建立的同时测定四逆散水提液中16种化学成分含量的分析方法专属性强、快速、灵敏且准确可靠,在完成含量测定的同时又可以准确给出化合物质量数信息,从而达到成分鉴别的效果,该方法可以为四逆散水提液的全面质量控制提供技术支持.
关键词： UHPLC-QqQ-MS 四逆散水提液 含量测定 化学成分 -
追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制
目的 基于糖基转移酶β3GnT8探讨追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制.方法 通过MTT法观察追毒方对MDA-MB-231耐药细胞增殖的抑制作用,通过转染β3GnT8得到高表达β3GnT8的MDA-MB-231/TAX细胞株,采用Western blot观察糖基转移酶β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,通过凝集素流式细胞术观察转染β3GnT8MDA-MB-231/TAX细胞膜表面β3GnT8的荧光强度.结果 追毒方有效成分能明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231耐药细胞的增殖,作用72 h抑制率达到50.16％,能有效下调β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,并且β3GnT8的表达与BCRP、P-gp呈正相关.结论 追毒方可通过下调糖基转移酶β3GnT8,从而降低耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性.
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基于高分辨率质谱的金欣口服液治疗小鼠RSV感染的血清脂质组学研究
目的 基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS高分辨率质谱,观察RSV诱发的肺炎模型小鼠的血清中脂质代谢的变化,分析金欣口服液对RSV肺炎小鼠中脂质代谢紊乱的调节作用,探讨金欣口服液治疗RSV诱发的病毒性肺炎的潜在机制.方法 用RSV诱导小鼠病毒性肺炎,灌胃金欣口服液予以治疗,分别采集对照组、模型组、金欣口服液组小鼠的血清样本,提取脂质成分,采用LC-MS分析,采用主成分分析法(PCA)、聚类分析法(CA)等多元统计方法,对小鼠血清脂质代谢轮廓进行分析,同时进行Kruskal-Wallis test以及fold change法进行统计,寻找差异性脂质.结果 RSV感染导致小鼠肺部炎性细胞浸润及不同程度的肺炎,血清中多种脂质代谢物代谢紊乱,具体表现多数PC、PE出现明显上调,金欣口服液均能改善小鼠肺炎症状且显著恢复血清中异常紊乱的脂质.结论 RSV感染可导致小鼠血清中脂质代谢紊乱,而金欣口服液可一定程度恢复RSV模型中代谢紊乱的脂质,提示金欣口服液可通过调节脂质改善RSV诱发的肺炎.
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糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响
目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制.方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平.结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR(P＜0.01),除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI(P＜0.01),3组FINS水平无显著性差异(P＞0.05).与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少(P＜0.01),中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达.
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大黄(廑)虫丸全方及君药药对中主要药效成分的定性定量研究
目的 借助高效液相色谱分析技术,利用中药复方拆方的研究思路,比较分析大黄(廑)虫丸全方及大黄、土鳖虫药对中药效成分变化.方法 色谱柱为Thermo Hypersil Gold;流动相0.1％甲酸水-甲醇,梯度洗脱;柱温:30℃;检测波长270 nm,建立大黄(廑)虫丸及其君药药对指纹图谱,定量分析君药大黄中蒽醌类成分以及土鳖虫中次黄嘌呤含量.结果 分别建立大黄(廑)虫丸全方及药对的液相指纹图谱,全方共鉴定了32个共有峰,药对鉴定了27个.在定量研究中,我们发现药对中5种大黄蒽醌的含量均比全方高,其中芦荟大黄素1.6倍,大黄酸1.48倍,大黄素2.23倍,大黄酚2.43倍,大黄素甲醚2.48倍,次黄嘌呤含量较全方低.结论 大黄(廑)虫丸全方及药对均具有抗肝癌作用,虽然药对中大黄蒽醌类成分较全方高,但抗肝癌作用临床上以全方为优,提示全方低剂量多成分、多靶点作用的重要性.对大黄(廑)虫丸中蒽醌类以及动物药中次黄嘌呤含量的测定提供了参考,也为后期进一步探索全方抗肝癌物质基础提供思路.
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改良地黄散抑制TGF-β1-CTGF信号通路改善肾间质纤维化的研究
目的 研究改良地黄散对部分输尿管梗阻(PUUO)大鼠肾间质纤维化作用以及探讨其可能的机制.方法 80只SD大鼠,随机均分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组,每组20只.高低剂量组、模型组采用腰大肌管包埋法建立PUUO模型,对照组仅切除左侧肾.高剂量组(2 mL/d)和低剂量组(1 mL/d)予以改良地黄散煎剂灌胃,对照组和模型组予均给予等量生理盐水灌胃.分别于建模后4周、8周每组取10只采集血、尿样本,测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量.测量肾组织大小、肾皮质厚度.制备肾组织切片,通过HE染色、Masson染色,观察各组肾脏病理组织学改变,以及肾脏纤维化情况.采用免疫组织化学法检测各组大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾组织的表达情况;采用qPCR检测TGF-β1、CTGF mRNA表达.结果 4周时:模型组相大鼠炎性细胞浸润,局部灶状萎缩坏死,较多胶原纤维化形成.高低剂量组较模型组病理改变不明显,肾间质增宽仅有少许间质纤维化.8周后:模型组淋巴细胞浸润,肾小球坏死,结构彻底改变.间质纤维增生网状成片.高低剂量组较模型组炎性细胞浸润较轻,胶原染色较轻淡,高剂量组变化小.TGF-β1、CTGF、α-SMA蛋白平均阳性表达率两个药物治疗组与模型组相比,4周时低剂量组均无差异,8周时两个药物治疗组均有显著差异(P＜0.01).比较TGF-β1、CTGF mRNA表达时发现,低剂量组4周时与模型组相比均无差异,8周时高剂量组与模型组相比均有差异(P＜0.05).结论 改良地黄散可能通过影响TGF-β1-CTGF信号通路,下调α-SMA的阳性表达,减轻肾纤维化的病理变化,延缓肾纤维化的发展.
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基于UHPLC-MS的代谢组学技术研究婴儿巨细胞病毒肝炎湿热内蕴证
目的 利用代谢组学技术探讨人巨细胞病毒(HCMV)肝炎湿热内蕴证的证候实质.方法 收集20例HCMV肝炎湿热内蕴证的患儿和20例正常对照组婴儿.采用超高效液相-线性离子阱/静电场轨道阱质谱联用技术对这些受试者的血浆及尿液样本进行代谢组学研究.通过正交偏小二乘法对这些代谢数据进行分析,同时采用受试者工作曲线评价潜在生物标志物的特异性和敏感性.结果 共检测到1 076个血浆代谢物和414个尿液代谢物.终共鉴定出22个血浆代谢物和7个尿液代谢物,涉及鞘脂、甘油磷脂、组氨酸、甘油酯和脂肪酸代谢,其中鞘磷脂和甘油三酯可作为HCMV肝炎湿热内蕴证潜在的生物标记物.结论 代谢物和生物标志物的确认为探讨HCMV肝炎湿热内蕴证的证候实质提供依据.
关键词： 代谢组学 湿热内蕴证 生物标志物 超高效液相色谱-质谱联用 婴儿巨细胞病毒肝炎 -
刮痧对健康个体皮肤及系统免疫功能的调节研究
目的 从免疫学的角度研究和探讨刮痧治疗作用的机理.方法 在Balb/c小鼠背部皮肤进行刮痧处理后,使用组织染色法观察皮肤组织形态的变化,用流式细胞术和ELISA分别测定局部免疫相关细胞的比例和局部及全身重要细胞因子的含量变化,并通过测定疫苗接种后的抗体滴度,来评估刮痧处理后机体的免疫响应能力.结果 刮痧后的皮肤组织毛细血管扩张,红细胞外渗,局部微循环旺盛,免疫活性细胞比例增加,促炎性细胞因子上调,调节性细胞因子下降,表明刮痧能引起局部和全身性反应;并且刮痧处理能诱导机体产生约3倍高的抗原特异性抗体滴度,导致免疫应答倾向于Th1型.结论 刮痧可以增强皮肤的微循环,加强其免疫响应的能力,增强和调节先天性免疫及适应性免疫功能,是其产生治疗效果的部分原因.
