不同剂量氯化锂对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞的保护作用
摘要： 目的:研究不同剂量氯化锂(LiCl)对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞(RGCs)存活的作用.方法:眶内切断72只成年雌性SD大鼠左侧视神经且残端留置荧光金(FG)后,随机分为生理盐水对照组和低剂量(30 mg/kg/d)、中剂量(60 mg/kg/d)、高剂量(85 mg/kg/d)氯化锂实验组.术前1d及术后每天腹腔注射生理盐水或不同剂量的氯化锂溶液,直至术后2d、7d或14 d处死动物.平铺视网膜后取样计数FG逆行标记的存活节细胞,并由此计算出每一视网膜内节细胞的平均密度.结果:术后2d各剂量氯化锂组节细胞平均密度与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).当存活时间增至7d时,各剂量氯化锂组节细胞密度均明显高于对照组(P＜0.01),且中剂量组节细胞密度增高为显著.术后14 d时,低剂量与中剂量组节细胞密度仍显著高于对照组(P＜0.01),但高剂量组节细胞密度与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论:腹腔内注射氯化锂可显著促进成年大鼠视神经切断后节细胞的存活,这种神经保护作用为剂量依赖性.
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G-CSF对帕金森病小鼠运动能力和黑质纹状体神经元的影响
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中脑黑质致密部(SNpc)及纹状体(STR)多巴胺(DA)能神经元的影响.方法:正常健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、MPTP组及MPTP+ G-CSF组,采用腹腔注射MPTP法制作小鼠PD模型,MPTP+G-CSF组于后一次MPTP注射后再腹腔注射G-CSF.爬杆实验观察小鼠的行为学改变;尼氏染色技术观察各组小鼠黑质致密部神经元数量及形态学变化;免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(TH)在各组小鼠中脑黑质致密部及纹状体的表达;Western Blot法检测各组小鼠中脑TH蛋白的表达量.结果:与对照组相比,MPTP组小鼠较对照组爬杆用时显著延长(P＜0.05),尼氏染色显示黑质致密部神经元数量显著减少(P＜0.05),黑质致密部、纹状体TH表达量显著减少(P ＜0.05);MPTP+ G-CSF组较MPTP组爬杆用时显著缩短(P＜0.05),神经元丢失减少(P＜0.05),神经元形态较完整;与MPTP组比较,MPTP+ G-CSF组黑质致密部、纹状体TH表达水平显著增高(P＜0.05).结论:G-CSF能够改善PD小鼠运动功能,减少黑质致密部多巴胺能神经元丢失,增加TH表达水平.
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创伤性脑损伤小鼠海马和皮层NONO表达变化
目的:探索创伤性脑损伤(TBI)后小鼠海马和皮层区不含POU结构的八聚体结合蛋白(NONO)表达变化.方法:重物打击法制作TBI小鼠模型,分为假手术组和TBI组,根据创伤后的时间TBI组又分为伤后6h、24h、3d和7d.Real time RT-PCR检测脑组织NONO mRNA表达,Westem Blot和免疫组化检测脑组织NONO蛋白表达.结果:NONO在小鼠大脑皮层和海马区有较强表达,TBI后海马区NONO表达水平显著降低.结论:NONO在皮层和海马区均有表达,但是TBI后只有海马区NONO表达发生显著变化,实验结果为进一步研究NONO在TBI中的作用机制提供了基础.
关键词： 创伤性脑损伤 不含POU结构的八聚体结合蛋白(NONO) 海马 皮层 小鼠 -
米诺环素对CCI大鼠抑郁样行为的影响及机制研究
目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的抑郁样行为、海马和前额叶皮层小胶质细胞激活的影响并分析其机制.方法:成年SD雄性大鼠随机分为:对照组、假手术组、CCI模型组、CCI+米诺环素组.糖水偏好及旷场实验检测大鼠抑郁样行为;免疫组化观察海马以及前额叶皮层Iba-1表达;取海马以及前额叶皮层组织,real-time PCR观察Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达,ELISA测定IL-1β和IL-18含量.结果:与假手术组相比,CCI大鼠7、10 d和14 d的糖水偏好明显降低(P＜0.05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显减少(P＜0.05);与CCI组相比,CA1区注射米诺环素后CCI大鼠7d和14 d的糖水偏好明显升高(P＜0.05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显增加(P＜0.05).与假手术组相比,CCI组大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目显著增多(P＜0.05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达明显上调;IL-1β和IL-18含量也明显升高(P＜0.05).与CCI组相比,注射米诺环素后,CCI大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目减少(P＜0.05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达降低(P＜0.05),IL-1β和IL-18含量降低(P＜0.05).结论:海马CA1区注射米诺环素明显抑制CCI大鼠的抑郁样行为;其机制可能是抑制海马和前额叶皮层小胶质细胞激活,下调NLRP3和caspase1表达,从而使IL-1β和IL-18产生减少.
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七氟醚处理对老龄小鼠脑内神经生长因子表达的影响
目的:探讨七氟醚对老年小鼠脑内神经生长因子(NGF)表达的影响.方法:老年C57小鼠吸入七氟醚建立全身麻醉动物模型,利用ELISA检测基底前脑、额叶、颞叶及顶叶NGF的含量,real time RT-PCR检测额叶、颞叶及顶叶NGF mRNA水平,Western Blot检测额叶皮层NGF合成代谢通路中相关蛋白纤溶酶、基质金属蛋白酶-9(MM P-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、丝氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1(neuroserpin)的表达量.结果:与对照组相比,七氟醚组小鼠基底前脑、额叶、颞叶及顶叶中NGF蛋白含量均显著降低(P＜0.05),但七氟醚组小鼠额叶、颞叶及顶叶中NGF mRNA水平无显著变化.进一步研究发现,七氟醚组小鼠额叶皮层NGF前体蛋白含量增加(P＜0.05),参与NGF翻译后加工的纤溶酶表达显著降低(P＜0.05),neuroserpin表达显著增加(P＜0.05),而参与NGF降解的MMP-9与TIMP-1含量无显著变化.结论:七氟醚可通过抑制NGF翻译后加工过程而降低老年小鼠脑内神经生长因子的含量.
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丙烯酰胺染毒对大鼠坐骨神经MBP和MAG表达的影响
目的:通过检测染毒大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)表达量的变化,探讨丙烯酰胺(ACR)对大鼠周围神经系统的毒性影响.方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、9、18、36 mg/kg ACR组,每组8只,灌胃染毒21 d后取材.每周一次步态评分,记录大鼠步态改变;利用HE染色和劳克坚牢蓝染色,观察坐骨神经及其髓鞘的改变;通过免疫组织化学方法检测蛋白MBP和MAG表达量的变化.结果:大鼠步态得分与染毒剂量和染毒时间呈正相关;HE染色显示随染毒剂量增大,坐骨神经神经纤维排列紊乱、髓鞘结构发生改变、轴突数目减少;劳克坚牢蓝染色结果显示与对照组相比,染毒组髓鞘染色较浅、着色不均,髓鞘变细;免疫组化结果显示,MBP和MAG在坐骨神经中的表达量均随染毒剂量增大而下降.结论:ACR染毒对大鼠坐骨神经髓鞘的毒性损伤,可能与MBP和MAG蛋白表达量的下降有关.
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IL-33在脑缺血再灌注小鼠脑内的表达和细胞定位
目的:通过建立脑缺血再灌注小鼠模型,观察白细胞介素-33 (IL-33)阳性细胞在脑缺血再灌注小鼠大脑中的表达和定位情况,初步探讨IL-33在缺血性脑卒中中的作用.方法:采用线栓法制作右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)建立脑缺血再灌注小鼠模型,利用TTC染色检测MCAO后脑梗死形成情况,采用免疫荧光组织化学染色法检测IL-33在脑缺血再灌注小鼠大脑中的表达.结果:成功建立脑缺血再灌注小鼠模型,脑缺血再灌注可引起小鼠大脑内IL-33表达升高;脑缺血再灌注小鼠模型脑内广泛表达IL-33.IL-33在神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞内均有表达.结论:脑缺血再灌注小鼠脑内IL-33表达增加,IL-33可能参与小鼠缺氧缺血性脑损伤过程.
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活性氧通过影响线粒体膜电位参与小鼠高血糖加重脑缺血性损伤
目的:探讨活性氧(ROS)参与高血糖加重脑缺血性损伤的可能机制.方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导联合大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立小鼠高血糖脑缺血再灌注模型,于再灌注后5、24h收集脑组织,通过神经行为学评分、TTC染色评价高血糖对脑缺血性损伤的影响,用ROS荧光探针-二氢乙啶(DHE)、JC-1分析活性氧和线粒体膜电位(△ψ)的变化情况.结果:与正常血糖脑缺血组相比,高血糖脑缺血组神经行为学评分与脑梗塞体积明显增加,活性氧产量于再灌注5和24h明显增加,线粒体膜电位于再灌注24h明显去极化.结论:高血糖可加重脑缺血性损伤,且活性氧可能通过影响线粒体膜电位参与高血糖加重脑缺血性损伤.
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NF-κB/nNOS信号通路在小鼠急性CO中毒迟发性脑病发生中的作用
目的:分析NF-κB/nNOS信号通路在急性CO中毒迟发性脑病(DEACMP)中的作用.方法:将昆明雄性小鼠随机分为空气组与CO中毒组,其中空气组和CO中毒组又分别分为1、3、7、14和21 d亚组.CO中毒组小鼠首次腹腔注射99.9％ CO气体100 ml/kg,随后3次按首次剂量的半量(50 ml/kg)作追加注射,间隔为4h,空气组以同样的方法注射等量空气,立即观察其精神状态和行为变化;并通过改良双波长碳氧血红蛋白(COHB)定量法动态监测小鼠血中COHB浓度;使用旷场实验和筑巢实验进行行为学监测;并用ELSIA法测定脑组织内髓鞘碱性蛋白(MBP)含量,筛选出DEACMP模型小鼠.用ELISA法分别检测脑组织中NF-κB和nNOS蛋白,用紫外分光光度计法测定脑组织中一氧化氮(NO)含量.结果:与空气组相比,CO中毒组旷场实验垂直站立次数和进入旷场中心次数均明显减少(P＜0.01),CO中毒组筑巢得分明显下降(P＜0.05),CO中毒组小鼠MBP、NF-κB、nNOS蛋白水平及NO含量于第3、7、14和21 d均明显增高(P＜0.01).结论:NF-κB/nNOS信号通路可能参与了DEACMP的发生和发展.
关键词： 急性CO中毒迟发性脑病 行为学 髓鞘碱性蛋白 NF-κB/nNOS信号通路 小鼠 -
小鼠脊髓背角神经元向臂旁核及丘脑中线/板内核群的分支投射
目的:观察脊髓背角P物质受体(substance P receptor,SPR)阳性神经元向臂旁核及中线/板内核群的分支投射并为其参与痒觉信息传递提供证据.方法:利用小动物脑立体定位仪向10只8周龄C57BL/6小鼠的臂旁核及丘脑中线/板内核群内分别注射四甲基罗达明(tetramethylrhodamine-dextran,TMR)及荧光金(fluoro-gold,FG),观察小鼠脊髓背角的TMR/FG双标神经元.结合免疫荧光组织化学染色方法观察双标神经元表达SPR和在急性痒模型下表达Fos的情况.结果:脊髓背角Ⅰ层、脊髓外侧核(lateral spinal nucleus,LSN)及脊髓背角Ⅳ～Ⅴ层均可观察到TMR/FG双标神经元,且部分双标神经元分别表达SPR及Fos蛋白.结论:脊髓背角存在同时向臂旁核及丘脑中线/板内核群发出分支投射的神经元,部分双标神经元表达SPR并参与痒觉信息的传递.
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GnIH对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠下丘脑POMC阳性神经元的影响
目的:探讨促性腺激素抑制激素(GnIH/RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠下丘脑阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)阳性神经元的影响.方法:65只成年雌性SD大鼠,随机选取2只用于免疫荧光多重染色,观察GnIH/RFRP-3与POMC在大鼠下丘脑神经元的表达;随机选取3只用于免疫共沉淀(Co-IP)实验,检测GnIH/RFRP-3与POMC的相互作用;余下60只建立卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠模型,模型组随机分成注射GnIH实验组和生理盐水对照组,每组30只,每组根据注射时间不同分为20、40、60、120、240、360min等共6个亚组,每组5只,采用Western Blot法检测GnIH/RFRP-3处理对下丘脑POMC表达的影响.结果:免疫荧光多重标记结果显示,GnIH/RFRP-3与POMC共表达于大鼠下丘脑神经元;Co-IP结果证明,GnIH/RFRP-3与POMC存在相互作用;Western Blot结果表明,注射GnIH/RFRP-3后20 min组大鼠下丘脑POMC蛋白表达量显著高于对照组(P＜0.05),注射60、120、240、360 min实验组大鼠POMC蛋白表达量明显低于对照组(P＜0.05).与20 min实验组相比,60、120、240 min组蛋白表达量依次呈下降趋势,360 min组蛋白表达量有升高趋势但是仍然低于20 min组(P＜0.05).结论:GnIH/RFRP-3可直接作用于POMC神经元.
