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比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果
目的 探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响.方法 以体外成熟培养18 h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25 ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标.结果 A组卵母细胞冷冻保存效果差(成熟率:A vs B、C、D为43.9%vs 51.7%、51.9%、55.9%,2～4细胞率:A VS B、C、D为34.1%vs 40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(D vs A、B、C为69.2%VS 87.0%、94.1%、91.9%).B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P<0.05).结论 综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体.
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Cryoleaf和Cryoloop冷冻载体冻融胚胎移植结局
目的:比较Cryoleaf和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体对冻融胚胎移植(FET)周期妊娠结局的影响.方法:采用回顾性研究方法,将本中心不同冷冻阶段(day3分裂期胚胎,day5/6囊胚期)的胚胎,根据冷冻载体不同分为Cryoleaf组和Croloop组,比较FET的妊娠结局.结果:分裂期胚胎,Cryoleaf组的胚胎存活率、着床率和临床妊娠率均低于Cryoloop组(P＜0,05);囊胚期Cryoleaf组的胚胎着床率低于Cryoloop组(P＜0.05),胚胎存活率和临床妊娠率与Cryoloop组比较无差异(P＞0.05).结论:FET周期中,采用cryoloop作为冷冻载体较Cryoleaf能获得更好的妊娠结局.
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一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体
目的 探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性.方法 以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法(GMP)为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响.结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异(92.80%vs 93.11%,49.80%vs 51.67%,36.73%vs 35.83%,12.65%vs 14.17%%;P>0.05).结论 封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞.
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雄性生殖细胞冷冻保存研究进展
随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展，雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容，为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前，雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻；冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤，根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类；冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。
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两种冷冻载体在囊胚玻璃化冷冻复苏中的对比分析
目的 对比分析两种商品化的冷冻载体,冷冻麦管(JY Straws)和冷冻环(CrystalCap)在囊胚玻璃化冷冻复苏中的效果.方法 2013年7月-2016年1月,在该中心进行的囊胚复苏移植周期l 153例.囊胚均采用玻璃化冷冻复苏移植,冷冻麦管组449例,其中D5单囊胚移植142例、D5双囊胚移植174例、D6单囊胚移植69例、D6双囊胚移植64例;冷冻环组704例,其中D5单囊胚移植123例、D5双囊胚移植330例、1D6单囊胚移植90例、D6双囊胚移植161例.对比分析两种冷冻载体各分组的临床妊娠情况.结果 D5单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,57.75％ vs.46.34％,但差异无统计学意义(P＞0.05);D5双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均高于冷冻环组,74.71％ vs.68.18％、58.62％ vs.53.03％,但差异无统计学意义(P＞0.05);D6单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,42.03％ vs.32.22％,但差异无统计学意义(P＞0.05);D6双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均略低于冷冻环组,51.56％ vs.52.17％、33.59％ vs.36.65％,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种冷冻载体均可以获得不错的临床结局,冷冻麦管作为新采用的冷冻载体可以放心使用.
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两种冷冻载体对人胚胎玻璃化冷冻效果的影响
目的 探讨不同载体对人早期胚胎玻璃化冷冻复苏的效果.方法 采用半封闭式载体冷冻复苏胚胎的患者共265个周期,采用封闭式载体冷冻复苏胚胎的患者共136个周期,均采用玻璃化冷冻方法冷冻体外精-胚胎移植第3日的可利用胚胎,观察胚胎复苏和临床妊娠情况.结果 半封闭式麦管冷冻复苏胚胎的患者移植周期258个,取消周期7个;复苏率、临床妊娠率和种植率分别为96.88％、48.44％和32.20％.封闭式麦管冷冻复苏胚胎的患者移植周期132个,取消周期4个;复苏率、临床妊娠率和种植率分别为95.31％、47.72％和32.28％.两组患者的平均年龄、不孕年限、不孕类型、不孕原因、体外受精或卵胞质内单精子注射(IVF/ICSI)构成比以及胚胎复苏率、移植胚胎数、临床妊娠率和种植率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 封闭式冷冻载体能获得与半封闭式载体同样的冷冻效果,同时能避免胚胎受病原微生物的交叉污染,是冷冻人早期胚胎的理想方法.
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临床微量精子标本冷冻方法的研究
目的 探索一种安全、便捷、有效的用于微量精子冷冻的方法.方法 选择内径130 μm的玻璃剥卵针50支作为冷冻载体,进行10个周期的反复冻融,检测其完整性,计算不同冷冻周期中载体折损率.选取50例经检测合格的精液标本,将密度调整至(0.5 ～1)×106/ml,使用精子冷冻保护剂按照1∶1体积混合预平衡10 min,每份标本装载2支载杆,计算装载时间,其中1支载杆作为快速冷冻组,迅速投入液氮中冷冻保存,另1支载杆采用液氮熏蒸30 min后再投入液氮中保存,比较两种方法解冻后精子的复苏率.结果 50支冷冻载体中,其中有36支完成全部10轮的冷冻-复苏周期测试,折损率为28.0％,损坏原因中78.6％为金属镊子直接夹持导致玻璃剥卵针破裂.玻璃剥卵针至少可耐受4个周期反复冻融,但之后约4％～6％的会出现自发破损.100支冷冻载体装载精子时间为45～398 s,平均为(112.3±94.1)s.冷冻前平均精子活力为65.6％±9.9％,快速冷冻复苏后平均精子活力为36.64％±8.7％,熏蒸法冷冻复苏后平均精子活力为23.48％±6.2％.快速冷冻法精子复苏率为55.9％±11.0％,熏蒸冷冻法精子复苏率为36.3％±9.8％,两者比较,差异具有统计学意义(F=18.31,P＜0.01).结论 采用剥卵针作为冷冻载体,并配合快速冷冻法,冷冻保存微量精子是一种安全、有效、简便的方法,适合临床广泛开展.
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玻璃化冷冻技术的应用及研究进展
玻璃化冷冻技术作为辅助生殖中的一项重要技术手段,相比传统的程序冷冻法具有诸多优势.目前已在卵母细胞和各个胚胎期应用,显示了较好的可行性与稳定性.但是,玻璃化冷冻效果仍会受到一些因素影响,如样本自身质量、冻融方法、冷冻保护剂和冷冻载体的选择等.再者,玻璃化冷冻技术应用时间不长,临床结局以及新生儿出生状况跟踪相对匮乏,还需长期安全性评价.本文就玻璃化冷冻技术的发展、应用、影响因素及安全性评价方面做一综述.
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不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响
目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(M Ⅱ期)卵母细胞的佳冷冻载体及冷冻方法.方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟M Ⅱ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组.冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液.观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况.结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001).冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001).结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值.
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卵巢组织冷冻保存的研究进展
卵巢冷冻技术可保存卵巢中大量的生殖细胞,将冷冻的卵巢组织解冻移植后可恢复卵巢的内分泌功能和生育能力,是癌症患者保存生育能力的一个理想途径.在该技术中诸多因素,如冷冻保护剂(CPA)、冷冻载体、皮质块大小以及冷冻方法等均影响着卵巢冷冻保存的效果；且目前尚缺乏高效、统一和标准的技术程序,因而限制了该技术在临床和科研中的广泛使用.为优化该技术程序,改善冷冻后卵巢功能的恢复情况,本文对影响该技术使用效果的一些因素进行了论述.
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卵母细胞冷冻保存技术新进展
卵母细胞的冷冻保存已经成为女性生殖力保存的一个重要方式,在人类辅助生殖领域中起着关键的作用.近几年,卵母细胞冷冻保存技术的研究有了很大的突破,在诸多方面都提出了一些新技术与新方法,主要包括冷冻方法、保护剂种类、保护剂添加与去除的方式以及卵母细胞质量的评价等,其中微流体装置不仅用于保护剂的连续添加和去除,还能用于细胞的玻璃化冷冻保存,同时细胞质量评价技术的优劣直接会影响胎儿的发育,甚至成人的健康.因此,微流体技术与科学的质量评价方法可能是未来卵母细胞冷冻保存研究的重要方向.
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冷冻载体及蔗糖浓度对复苏卵母细胞存活率的影响
目的:探讨MⅡ卵母细胞玻璃化冷冻和复苏过程中不同冷冻载体和不同蔗糖浓度解冻对卵母细胞存活率的影响.方法:收集2009年6月至2012年5月在成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心常规IVF治疗周期第1天没有受精的MⅡ卵母细胞853枚,进行玻璃化冷冻后复苏.按照实验过程中所用不同冷冻载体和不同解冻方法分为4组.A组79枚,载体为冷冻环,采用常规方法解冻；B组580枚,载体为半麦管,采用常规方法解冻；C组121枚,载体为冷冻环,采用改良法解冻；D组73枚,载体为半麦管,采用改良法解冻.将卵母细胞复苏2 h后观察,对各组卯母细胞存活率进行了比较.结果:C组卵母细胞存活率(97.52％)显著高于A组(72.15％)、B组(52.24％)和D组(64.38％)(P＜0.01)；A组卵母细胞存活率高于B组,差异显著(P＜0.05)；其余各组间卵母细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:采用冷冻环冷冻及改良法解冻能提高成熟卵母细胞存活率.
