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生殖保险知多少
生殖保险是指主动地将自身精子或卵子以冻存方式保存于医疗机构,供以后生育使用.目前,由于卵子冷冻在技术上、伦理上以及法律上还有一些问题尚待解决,而精子的冷冻技术已经成熟,且在伦理、法律等方面都无大的问题,所以目前的生殖保险以男性自身的精子保存即自精保存为主.自精保存是指预先将精液保存于人类精子库,待需要时再进行解冻使用.
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精液优化处理后精子的优储存条件
目的 探讨优化处理后精子的佳储存条件.方法 收集禁欲2～7 d的精液标本124例,所有样本均采用密度梯度离心法进行处理,将处理后的精子分别放置室温(20℃左右,18～25℃)、35℃恒温水浴箱和37℃6％CO2培养箱,放置4h和24 h后采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子前向运动百分率以及各级精子运动百分率.结果 35℃恒温箱组放置4h后精子前向运动率和a级精子运动百分率高于室温组和37℃6％CO2培养箱组[精子前向运动率:(75.34±6.87)％比(66.69±16.11)％、(71.46±11.89)％,a级精子运动百分率:(44.80±12.76)％比(31.08±11.51)％、(34.42±9.90)％,均P＜0.05],而在室温组和37℃6％CO2培养箱组比较差异则无统计学意义(均P＞0.05).放置4hc级精子百分率室温组要高于35℃恒温箱组和37℃6％CO2培养箱组[(14.02±6.44)％比(7.33±1.82)％、(8.58±4.52)％,均P＜0.05)],而在35℃恒温箱组和37℃6％CO2培养箱组比较差异则无统计学意义(均P＞0.05).放置4h3组间b级和d级精子百分率比较差异无统计学意义(均P＞0.05).处理后精子放置24h后各组间前向运动精子百分率和各级精子百分率差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 精液处理后放置35℃恒温箱中的精子运动参数相对较好.
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冷冻干燥法对人精子DNA的影响
目的 探讨冷冻干燥法用于人类精子保存的安全性.方法 取健康志愿者合格精液 40 份,平均分为 4 组,其中 3 组分别加入不同的冻干保护剂 (ETBS;ETBS+海藻糖;ETBS+海藻糖+蛋黄) 后给予冷冻干燥处理,在 4℃冰箱中保存 3 周;1 组作为新鲜精液对照组.对 4 组标本分别以原位缺口末端标记 (TUNEL) 法和彗星试验进行DNA 断裂精子百分率检测.结果 ETBS、ETBS+海藻糖、ETBS+海藻糖+蛋黄组和新鲜精液组 DNA 断裂精子百分率以 TUNEL 法检测,分别为 (6.39±1.46)%、(5.75±1.29)%、(5.20±1.38)%、(4.94±1.86)%;以彗星试验检测,分别为 (6.48±1.58)%、(5.83±1.48)%、(5.28±1.42)%、(5.12±1.65)%.冷冻干燥保存后的各组与新鲜精液相比较,DNA断裂精子百分率差异均无统计学意义 (P＞0.05).结论 以 ETBS 或 ETBS 加海藻糖、蛋黄为保护剂的冷冻干燥法对人精子 DNA 无明显损伤,可有效地保护人精子的DNA.
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采用新鲜和冻融精子进行卵母细胞胞质内单精子注射的临床效果比较
目的 比较采用新鲜和冻融的睾丸及附睾精子进行卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)的临床效果.方法 选择2006年9月-2007年5月因无精症于北京大学第三医院生殖医学中心行ICSI的患者208例,按患者意愿分为冻融组37例和新鲜组171例.冻融组在行ICSI前将冻存的睾丸或附睾精子解冻并复苏.观察冻融组睾丸和附睾精子的临床利用率;比较两组患者的临床结局(包括正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及胚胎着床率等)和妊娠结局(包括流产率、分娩孕周及新生儿出生体重等).结果 (1)冻融组睾丸精子的临床利用率为92%(23/25),附睾精子为100%(12/12).(2)新鲜组患者的正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及胚胎着床率分别为62.25%(973/1563)、78.9%(768/973)、44.4%(60/135)和29.3%(84/287),分别与冻融组[分别为64.53%(282/437)、79.1%(223/282)、46.9%(15/32)和33.3%(23/69)]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)新鲜组患者的流产率、单胎妊娠分娩孕周、双胎妊娠分娩孕周、单胎妊娠平均新生儿出生体重及双胎妊娠平均新生儿出生体重分别为11%(6/55)、(39.0±1.4)周、(36.8±1.7)周、(3409±393)g和(2584±266)g,分别与冻融组[分别为7%(1/15)、(38.7±0.6)周、(36.3±1.2)周、(3350±383)g和(2635±171)g]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 采用冻融的睾丸或附睾精子行ICSI安全、有效,值得在临床推广.
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小鼠精子冷冻的研究
目的探索、建立一套小鼠精子冷冻方法.方法通过CPS和RS318两种冷冻液对比试验;进行不同解冻法试验;对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL/6四种品系小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻,将解冻精子、鲜精与卵母细胞进行体外受精,并进行体外培养、胚胎移植,通过受精率和受孕率对冷冻方法进行筛选.结果两种冷冻液试验、不同解冻法试验的受精率差异均无显著性.B6DF1、CD-1、C57BL/6品系小鼠快速冷冻精子解冻后与卵母细胞的体外受精率(35%、34%、17%)显著低于鲜精(60%、59%、34%)、缓速冷冻精子的受精率(62%、58%、30%),此三种品系小鼠快速、缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率.结论缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法,干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子.
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抗氧化剂改善冻融人精子氧化应激性DNA损伤的研究
目的 探讨抗坏血酸盐、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)对冻融人精子氧化应激性DNA损伤的可能保护作用.方法 30份健康可生育男性精液分别添加改良人精子冷冻保护液,依所添加的抗氧化剂及终浓度分6组;检测各组冻融前后常规精子参数,精子核DNA完整性以及冻融后活性氧(ROS)水平.结果 (1)冻融后抗坏血酸盐300 μmol/L组与CAT 200 U、400 U组a+b级精子下降少于对照组(均P＜0.05),精子活率复苏率、ROS水平则分别高于和低于对照组(67%±14%、68%±14%、69%±15%vs 59%±10%,均P＜0.05;30±13、30±11、30±11 vs 37±17,均P＜0.05).(2)添加抗坏血酸盐300 μmol/L组,CAT 200 U、400 U组的彗星细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩与冷冻前相比,差异无统计学意义(P＞0.05);但分别低于对照组(41%±4%、40%±7%、40%±6%vs 46%±6%,均P＜0.01;7.7±1.2、7.5±1.6、7.8±1.9 vs 10.1±3.1,均P＜0.01).其余试验组上述指标则明显高于冷冻前(均P＜0.01),而与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).(3)冻融后各实验组a+b级精子与ROS水平有负相关性(P＜0.05或P＜0.01).除抗坏血酸盐600 μmol/L组外,其余试验组尾部DNA%、Olive尾矩则分别与其对应组ROS有显著正相关性(P＜0.05、P＜0.01).结论 在精液冷冻保护剂中添加一定浓度的抗坏血酸盐、CAT可减少冷冻产生的过量ROS,进而减轻后者对精子核DNA的氧化应激性损伤,从而提高冻融人精子质量.
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配子/胚胎操作和管理的安全性
辅助生殖技术(ART)的特点是通过对配子、胚胎的体外操作获得受精卵和早期胚胎,并将胚胎移植入子宫,以解决不孕不育夫妇的生育问题,对配子/胚胎操作和管理的安全性问题显得尤为重要.从配子的获取至胚胎的体外培养、冷冻保存和胚胎移植,是多步骤、多操作的工作流程,潜在着巨大的误差风险,牵涉到社会伦理问题,因此需建立明确的操作流程和管理制度将潜在风险小化.初步探讨如何提高在辅助生殖技术流程中对配子/胚胎操作和管理的安全性,以大程度地保证患者的利益,并使中国辅助生殖技术能够在符合社会伦理道德范畴内获得长足发展.
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自精保存在生殖保险中的应用及研究进展
随着人类辅助生殖技术的发展,生殖保险越来越受到重视.由于卵子冷冻还存在一些问题,所以目前生殖保险仍以男性自身的精子保存(自精保存)为主.精子在冷冻过程中会受到一定的损伤,其损伤机制是多方面的.而各种冷冻方法对精子存活率和活力的影响并无明显差异.自精保存所需的精子来源有多种途径,首选为手淫法取精.自精保存适用的对象非常广泛,所有因治疗癌症而存在不育风险的男性患者,都应冷冻保存精子,但是自精保存仍存在一些问题有待解决.综述自精保存在生殖保险中的应用及研究进展.
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天然抗氧化剂在人精液冷冻保存中的应用
精液的冷冻保存是辅助生殖技术的基础，但精液冻融过程会产生过多的活性氧自由基（ROS），破坏精子的生理结构，使其质量下降，造成受精能力下降。目前，有些研究开始关注抗氧化剂在精液冷冻保存过程中的保护作用。其中一些来源于植物的天然抗氧化剂（如白藜芦醇、槲皮苷、染料木黄酮等），这些物质的来源广泛，抗氧化能力非常高，而且毒性较低，可以有效抑制精子冻融后ROS的产生，减少精子在冷冻过程中受到的氧化损伤，从而保护精子的活力和遗传稳定性，可以作为冷冻保护剂的添加成份用于改良精子的冷冻保存。
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雄性生殖细胞冷冻保存研究进展
随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展，雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容，为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前，雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻；冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤，根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类；冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。
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双侧睾丸先后发生精原细胞瘤诊治反思
目的 探讨睾丸精原细胞瘤的临床特点及自精保存的重要性.方法 对我院收治的双侧睾丸先后发生精原细胞瘤1例的临床资料进行回顾性分析.结果 本例因无意中发现左侧睾丸进行性增大4个月入院.7年前患右侧睾丸精原细胞瘤,行手术切除及放化疗,后临床疗效评价达完全缓解,不定期复查未见复发及转移.入院后行睾丸CT及彩色多普勒超声检查均提示左侧睾丸恶性肿瘤.查血甲胎蛋白(AFP) 6.55 ng/ml,人绒毛膜促性腺激素(β-HCG) 107 U/L,总睾酮4.72 nmol/L.精液常规检查无精子.后行左侧睾丸切除术,术后病理报告为左侧睾丸间变型精原细胞瘤,同时予卡铂600 mg/d化疗.因患者未行精液冷冻保存,彻底失去生育能力.45 d后复查血AFP 2.22 ng/ml,乳酸脱氢酶150 U/L,β-HCG<1 U/L,提示肿瘤未复发.结论 临床遇及有生育要求的睾丸肿瘤患者时,应高度重视,为其提出合理的自精保存建议.
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体外授精培养基与生殖细胞的体外培养
辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)早出现在18世纪70年代,在1978年之前,主要是人工授精,直到1978年首例试管婴儿诞生后,才引起了各界人士的广泛关注,同时,辅助生育技术也进入了快速发展时期.目前,应用于临床的ART有人工授精、体外培养,及在传统体外授精(in vitro fertilization,IVF)技术基础上发展起来的卵子胞浆内单精子显微注射等.在开发了有效的排卵诱导方案,卵子回收方法改善的同时,用于创造受精和早期发育的适宜培养基的实验技术亦得到不断的改进.
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冷冻方法和冷冻保护剂对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响
目的:探讨冷冻方法和冷冻保护剂类型对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响.方法:16例男性不育患者精液分别于冷冻前、加入甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)和甘油两种冷冻液以快速和慢速冷冻6个月后,采用伊红染色分析精子活率和尾部低渗肿胀率.结果:冷冻后精子活率和尾部低渗肿胀率明显低于冷冻前(P＜0.001,P＜0.05);GYC和甘油两种冷冻保护剂对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响差异无显著性(P＞0.05);速冻和缓慢冷冻对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响差异亦无显著性(P＞0.05).结论:冷冻后精子活率和尾部低渗肿胀率明显降低,不同冷冻方法和冷冻保护剂类型对精子活率和尾部低渗肿胀率无影响.
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完全不运动精子经冻融后应用激光筛选存活精子行ICSI获临床妊娠
目的 报道1例睾丸完全不运动精子经冷冻-解冻后应用激光筛选存活精子行卵胞浆内单精子注射(ICSI)获得临床妊娠.方法 睾丸穿刺获取的完全不运动精子经激光鉴定有存活的精子,立即进行冷冻保存.取卵日,解冻该精子应用激光选择存活的精子进行卵胞浆内单精子注射.结果 睾丸完全不运动精子冷冻前和解冻后经激光鉴定存活率分别为55.75%和39.81%.选择激光鉴定为存活的精子注射到5个成熟卵母细胞中,4个卵子正常受精(受精率80%),培养至第3天均卵裂(卵裂率100%),移植两枚优质胚胎后获得临床妊娠.结论 完全不运动精子是可以冷冻保存的.
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葡萄糖6磷酸异构酶和烯醇化酶1可预测人类精子冷冻复苏后活力
目的 比较葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)和烯醇化酶1(ENO1)在人类精子中不同耐冻能力组之间表达的差异,寻找预测人类精子冻融后活力可能的标志物.方法 收集42例合格供精志愿者的新鲜精液样品,依据冻融后精子活力的不同,将符合条件的样品分为耐冻组和不耐冻组,应用蛋白质印迹(Western blot)技术比较两组样品GPI和ENO1蛋白在表达量上的差异,利用免疫荧光技术验证Western blot结果并观察两种蛋白在精子中的分布.结果 在两组样品之间,GPI和ENO1都表现出明显的差异.GPI和ENO1在耐冻组的表达量均高于不耐冻组(分别为P＜0.01,P＜0.05),而蛋白在精子中的分布未见明显组间差异.结论 GPI和ENO1可以作为标志物在冻存前预测人类精子冷冻复苏后的活力.
关键词： 精液保存 葡糖-6-磷酸异构酶 磷酸丙酮酸水合酶 -
精子形态与精子冷冻复苏率的关系研究
目的 了解精子形态与精子冷冻复苏率之间的关系.方法 135例浙江省人类精子库筛选合格的供精者精液标本,按前向运动精子冷冻复苏率分为冷冻不合格组(<60%)40例和冷冻合格组(≥60%)95例.对所有精液标本进行精子形态学分析.结果 冷冻不合格组正常形态精子百分率(23.53±4.87)%,明显低于冷冻合格组正常形态精子百分率(28.54±544)%,(P<0.01);冷冻不合格组精子头部异常率、畸形精子指数(TZI)及精子畸形指数(SDI)明显高于冷冻合格组(P<0.05);颈部及中段异常率、尾部异常率及胞质小滴两组无明显差异(P>0.05).结论 精子形态对前向运动精子冷冻复苏率有影响,正常形态精子对低温的耐受性好;头部畸形以及同时含有多种畸形的精子对低温冷冻的耐受性差.
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冷冻保存对人精子运动特征的影响
目的 研究冷冻保存前后供精者精子运动特征的变化,了解冷冻保存对人精子受精潜能的影响.方法 供精者精液标本68例,按照世界卫生组织推荐的方法和仪器行精液常规分析和计算机辅助精子分析(CASA).入选精液加入甘油-卵黄-柠檬酸钠精子冷冻保护剂,行液氮蒸汽冷冻,1个月后复温,再次行CASA.结果 冷冻后精子运动学参数中精子头侧摆幅度(ALH)和鞭打频率(BCF)升高,其它所有运动学参数均降低.精子动动学参数中除中速动动(Medium)、慢速运动(Slow)、平均路径速度(VAP)、直线运动速度(VSL)、ALH外,人精子冷冻前和解冻后各个参数都有显著的正相关(P＜0.05).除Medium、Slow、(曲线速度)VCL、ALH外,供精者精子各项参数冷冻前和解冻后比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).冷冻复温后VCL＞25 μm/s、VSL＞25 μm/s.结论 冷冻保存后人精子运动能力降低,但仍具有受精潜能.CASA用于冷冻精液的评估有一定的临床应用价值.
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冷冻精液行供精人工授精685例临床观察
目的比较ICI和IU的成功率,评价人类精子库的冻精质量.方法对用我库的冷冻精液行供精人工授精(AID)治疗有适应证妇女685例的临床资料进行回顾性分析.精液冻后平均活率为(62.23±26.78)%,平均密度为(38.17±13.62)×106/ml.结果供精人工授精685例,共有1385个周期中214例获临床妊娠,周期妊娠率15.5%,受孕率31.2%,二种AID方法的成功率无显著性差异(P＞0.05).结论我院人类精子库的冷冻精液各项指标均达到并超过部颁标准,可用作供精人工授精.
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应用双向电泳分析精子冻融前后蛋白改变的初步研究
目的精子蛋白双向电泳的建立,并利用其初步研究冻融前后精子蛋白的改变,为进一步筛选差异表达的蛋白奠定基础.方法来源于同一个人的冻融前后精子样品经溶解液溶解,并以等电聚焦(IEF)作为第一向电泳,以变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)作为第二向,对上述样品进行分离,凝胶银染后进行比较.结果建立了精子蛋白的双向电泳,并用其分析了冻融前后精子蛋白的改变.结论冻融前后精子蛋白发生不止一种蛋白的改变,本研究的实验方法是一种研究精子冻融蛋白改变的有效手段,但仍有待进一步优化.
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热休克蛋白90在人精子冻融前后的表达及其意义
目的研究热休克蛋白90(HSP90)在人精子中的定位及其在冻融前后的变化.方法应用间接免疫酶细胞化学技术定位HSSP90在人精子中的部位,联合使用计算机图像分析技术对20例正常男性的精液进行冻融前后精子HSSP0表达的定量差异研究.结果HSP90定位于人精子的体部与尾部.图像分析共识别冻融前精子436个,冻融后精子484个.冻融前精子HSSP0表达的平均灰度值和积分灰度值分别为69.29±11.16和6 925.73±3 184.84,冻融后精子HSP90表达的平均灰度值和积分灰度值分别为61.36±10.72和5 757.41±2 315.24,两者相比均有极显著差异(P＜0.01).结论冻融后精子HSSP0的表达量出现较为明显的下降,这种下降可能是精子在冻融后运动特性改变的基础.
