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山冈橐吾碱clivorine致DNA损伤的研究
吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)是一类天然的植物性毒素,目前已发现400多个不同结构的PAs,广泛存在于6 000多种高等植物中 [1-3].现有的研究普遍认为PAs在体内肝细胞色素P-450酶系代谢活化下形成吡咯代谢物(pyrrole metabolites),其具有很强的亲电能力,可与体内很多重要的细胞亲核体如DNA、RNA、酶和蛋白质等发生烷基化作用形成结合吡咯或与DNA交联而产生毒性[4-7].
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四种温石棉致突变性研究
目的 探讨我国4种典型温石棉的致突变作用.方法 将4种温石棉受试物配制成3个染毒剂量组(50、100和200 μg/ml)分别染毒V79细胞,同时设阴性和阳性对照组.用单细胞凝胶电泳实验检测其所致DNA损伤(每个剂量组染毒时间分别为24、48和72 h);用V79细胞微核试验检测其染色体畸变(每个剂量组染毒时间为24h).结果 (1)单细胞凝胶电泳实验:4种温石棉3个染毒剂量组染毒24、48和72 h所致V79细胞DNA迁移距离、OTM、拖尾率均高于阴性对照组(P＜0.01),染毒48 h均比染毒24 h增加(P＜0.叭),染毒72 h均比染毒48 h下降(P＜0.01).(2)V79细胞微核试验:4种温石棉染毒剂量为50 μg/ml时,微核率与阴性对照组比较无差异(P＞0.05),染毒剂量为100和200 μg/ml时,微核率均高于阴性对照组(P＜0.01),并呈剂量-反应关系(P＜0.01).结论 4种温石棉单细胞凝胶电泳实验和V79细胞微核试验致突变阳性,产品安全性值得进一步探讨.
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彗星实验方法学的改进用于DNA损伤检测
目的 对国际公认的经典彗星实验(单细胞凝胶电泳实验)进行方法学改进,使之更方便于临床检测.方法 选用5例范可尼贫血的阳性标本作为阳性对照,30例初生婴儿的脐带血作为阴性对照,同时应用经典彗星实验以及改进版彗星实验进行比对,验证两种方法的可行性.选用15例临床标本与中国医学科学院放射医学研究所同步进行实验,然后实验结果进行对比对,验证改进版彗星实验的准确度以及符合度.结果 与经典彗星实验相比,改进版彗星实验检测结果的准确度达到100%,符合度达到100%.结论 与经典的彗星实验相比,改进版彗星实验操作更加简单、省时;结果客观、准确、稳定,且重现性和准确性好,图像清晰,容易判读;成本更加低廉,操作安全,更加环保,推荐使用该方法作为DNA损伤的检测方法.
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虾青素对辛硫磷所致小鼠DNA损伤的拮抗作用
目的 探讨虾青素对辛硫磷所致小鼠遗传毒性的拮抗作用.方法 将50只健康SPF级昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组和80 mg/kg辛硫磷染毒组以及低、中、高剂量虾青素保护组(2mg/kg、4mg/kg、8 mg/kg),每组10只,雌雄各半.早晨低、中、高剂量虾青素保护组分别灌胃染毒2、4、8 mg/kg虾青素,对照组和辛硫磷染毒组灌胃染毒橄榄油,染毒容量为10 ml/kg;间隔约8h后,下午低、中、高剂量虾青素保护组和辛硫磷染毒组分别灌胃染毒80mg/kg辛硫磷,对照组灌胃生理盐水,染毒容量为10 ml/kg,连续染毒14d.采用微核实验检测小鼠骨髓细胞微核率,采用单细胞凝胶电泳实验检测小鼠外周血淋巴细胞的DNA损伤.结果 虾青素干预能抑制辛硫磷染毒所致的小鼠骨髓细胞微核率及外周血淋巴细胞拖尾率和DNA损伤专用单位的升高；且随着虾青素剂量的升高,小鼠的骨髓细胞微核率、外周血淋巴细胞的拖尾率和DNA损伤专用单位均呈下降趋势.结论 虾青素对辛硫磷所致小鼠骨髓细胞微核率性的升高及外周血淋巴细胞的DNA损伤具有明显的拮抗作用.
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吸入二硫化碳对小鼠生殖细胞损伤的影响
目的观察二硫化碳吸入对小鼠生殖细胞的损伤.方法以浓度为0,200,400,800 mg/m3的二硫化碳蒸气给小鼠做静式吸入染毒5周,每天2 h.用单细胞凝胶电泳实验和流式细胞术检测二硫化碳对精子细胞的损伤.结果低、中、高染毒组与对照组小鼠精子细胞彗星的拖尾率分别为48.50%,71.00%,86.50%和23.50%,经x2检验各试验组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);彗星头部百分比分别为(62.994 9±8.624 2)%,(56.658 0±10.599 0)%,(36.543 2±12.000 2)%和(86.892 6±5.021 9)%,各试验组与对照组彗星头部百分比差异有统计学意义,并且各个试验组之间差异也有统计学意义(P＜0.001);尾长分别为(8.681 2±4.333),(14.039 2±4.168),(28.6601±8.369)和(5.991 3±1.924)μm,中、高剂量组与对照组之间相比差异有统计学意义.试验组与对照组生殖细胞的凋亡率分别为12.53%,14.93%,29.09%和11.97%,其中高剂量组与对照组之间相比差异有统计学意义.结论亚慢性吸入二硫化碳对小鼠精子细胞DNA产生损伤.
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彗星试验检测亚慢性吸入二硫化碳对小鼠白细胞DNA的损伤情况
[目的]检测亚慢性吸入二硫化碳对小鼠白细胞DNA的损伤情况.[方法]以浓度为0、400、800、1 200mg/m3的二硫化碳蒸气给小鼠做静式吸入染毒5周,每天2 h.用单细胞凝胶电泳实验(彗星试验)检测二硫化碳对白细胞DNA的损伤.[结果]低、中、高染毒组与对照组小鼠白细胞彗星的拖尾率分别为68.40%、86.20%、97.40%和4.60%,经χ2检验各试验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);各试验组彗星头部百分比分别为(61.13±5.54)%、(46.15±8.37)%、(32.53±10.21)%,与对照组彗星头部百分比(90.65±3.74)%差异有统计学意义(P＜0.001);尾长分别为(12.12±2.55)、(26.19±5.19)、(39.83±9.21)μm,与对照组(1.29±0.47)μm差异均有统计学意义(P＜0.001).染毒剂量与彗星头部百分比的相关系数为-0.981,与尾长的相关系数为0.998,P值均＜0.001.[结论]亚慢性吸入二硫化碳可损伤小鼠白细胞DNA,且随着染毒剂量的增加,损伤程度也越严重,存在剂量-反应(效应)关系.
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活性氧引起的人类精子 DNA链断裂
为探讨活性氧对人类精子DNA的损伤作用,分别用0、0.062 5、0.125、0.25、0.5及1.0 mM的H2O2和0、0.1、1.0、2.0、5.0 mM的β-NADPH在体外条件下处理精子,用单细胞凝胶电泳试验检测外源性H2O2和内源性O2引起的精子细胞DNA链断裂.结果显示:用1.0 mMH2O2或5.0 mM NADPH处理精子30 min至4 h,彗星细胞百分率显著增加,平均彗尾也显著增长,并有明显的作用时间-效应关系.精子细胞用0.062 5 mM～1.0 mMH2O2或0.1～5.0 mM NADPH处理1 h,彗星细胞百分率与对照组比较显著增加,平均彗尾显著增长,并有明显的剂量-效应关系.这些研究结果表明:外源性H2O2和β-NADPH在体外条件下刺激精了细胞产生的内源性O2可引起精子DNA链断裂.
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亚慢性吸入二硫化碳对小鼠免疫细胞损伤研究
目的:研究二硫化碳对小鼠免疫细胞的损伤.方法: 以浓度为0, 400, 800, 1200 mg/m3的二硫化碳蒸气给小鼠做静式吸入染毒5周, 每天2 h.用单细胞凝胶电泳实验和流式细胞术检测二硫化碳对白细胞的损伤.结果:低、中、高染毒组与对照组小鼠白细胞彗星拖尾率经χ2检验,差异有统计学意义 (P＜0.01);各试验组与对照组彗星头部百分比差异有统计学意义,并且各个试验组之间差异也有统计学意义(P＜0.01);各试验组与对照组尾长差异亦有统计学意义, 并且各个染毒组之间差异存在统计学意义(P＜0.01).试验组与对照组生殖细胞的凋亡率分别为13.50%, 22.10%, 33.60%和0.2%,各剂量组与对照组之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论:亚慢性吸入二硫化碳可损伤小鼠白细胞DNA并促进白细胞调亡.
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亚慢性吸入二硫化碳对小鼠生殖细胞损伤研究
目的:研究二硫化碳对小鼠生殖细胞的损伤.方法:以浓度为0,200,400,800 mg·m-3的二硫化碳蒸汽给小鼠做静式吸入染毒5周,每天2 h.用单细胞凝胶电泳实验和流式细胞术检测二硫化碳对精子细胞的损伤.结果:低、中、高染毒组与对照组小鼠精子细胞彗星的拖尾率分别为48.50%,71.00%,86.50%和23.50%,经X2检验各试验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);彗星头部百分比分别为(62.994 9士8.624 2)%,(56.658 0±10.599 0)%,(36.543 2士12.000 2)%和(86.892 6±5.021 9)%,各试验组与对照组彗星头部百分比差异有统计学意义,并且各个试验组之间差异也有统计学意义(P＜0.001),尾长分别为(8.681 2±4.333 0),(14.039 2±4.168 0),(28.660 1±8.369 0)和(5.991 3±1.924 0)μm,中、高剂量组和对照组之间差异存在统计学意义.试验组与对照组生殖细胞的凋亡率分别为12.53%,14.93%,29.09%和11.97%,其中高剂量组与对照组之间差异有统计学意义.结论:亚慢性吸入二硫化碳可以对小鼠精子细胞DNA产生损伤.
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单细胞凝胶电泳在精液标本检测中的影响因素及解决方法
单细胞凝胶电泳实验(single cell gel electrophoresis, SCGE)或称彗星试验(comet assay),是一种直接在荧光显微镜下用肉眼观察单个细胞DNA链断裂的试验方法,也是目前检测外来有害物质对精子损伤的有效方法.在应用过程中我们发现有许多因素能够造成SCGE结果的不稳定,特别是精液标本的保存和制备过程中的影响因素较大.我们就一些主要影响因素进行分析并探讨解决的方法.
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叶酸和维生素A对MNNG致哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞恶变过程中DNA损伤的干预研究
目的：探讨叶酸和维生素 A 对甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine， MNNG）致 DNA 甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）高表达的哈萨克族食管上皮细胞恶变过程中DNA 损伤的干预作用。方法采用高效液相色谱分析法和单细胞凝胶电泳实验对经维生素 A 和叶酸干预后的各组细胞中细胞 DNA 整体甲基化水平进行检测，观察细胞 DNA 损伤情况。结果（1）随着叶酸和维生素 A 浓度的增加，细胞 DNA 整体甲基化水平逐渐增加（F ＝136．825，P ＜0．01；F ＝281．127，P ＜0．01），但是随着时间的延长，细胞 DNA 整体甲基化水平逐渐降低（F ＝252．018，P ＜0．01），同时三者之间存在交互作用；（2）随着叶酸浓度的增加，细胞尾长和 DNA Olive 尾矩逐渐缩短（F ＝277．009，P ＜0．01；F ＝12．777，P ＜0．01）；随着维生素 A 浓度的增加，细胞 Tail DNA 含量逐渐降低（F ＝148．546，P ＜0．01），细胞尾长和 DNA Olive 尾矩逐渐缩短（F ＝277．009，P ＜0．01；F ＝280．988，P ＜0．01）；随着培养时间的延长，细胞尾长逐渐延长（F ＝3．966，P ＜0．05）；对于细胞尾长和 DNA Olive 尾矩来说，不同叶酸浓度与维生素 A 之间存在交互作用（F ＝6．679，P ＜0．05；F ＝8．086， P ＜0．01）。结论叶酸和维生素 A 对 MNNG 致哈萨克族食管上皮 DNMT1高表达细胞恶变具有一定的抑制作用。
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N-乙酰半胱氨酸对外源性H2O2和内源性O2-引起的精子DNA损伤的保护作用
目的:用精子单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法检测N-乙酰半胱氨酸体外条件下对外源性H2O2和内源性O2-引起的精子DNA损伤的保护作用.方法:精子分别用0.5mmo1 /L H 2O 2和5.0 mmol/L β-NADPH处理的同时分别加入不同浓度(0.1～1 mmol /L)的N-乙酰半胱氨酸,用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测各组精子中慧星细胞百分率并比较各组平均慧星尾长的差异.结果:精子细胞用0.5 mmol/L H2O2处理的同时加入不同浓度(0.1～1 mmol/L)的N-乙酰半胱氨酸,与单纯用0.5 mmol/L H2O 2处理组比较,慧星细胞百分率明显减少,平均慧尾显著缩短;精子细胞用5.0 mmol/L β-NADPH处理的同时加入不同浓度(0.1～1 mmol/L)的N-乙酰半胱氨酸,与单纯用5.0 mmol/L β-NADPH处理组比较,平均慧尾长度显著缩短,但慧星细胞百分率无显著性差异.结论:N-乙酰半胱氨酸对0.5 mmol/L外源性H2O2引起的精子DNA损伤有明显保护作用,而对5.0mmol/L β-NADPH诱导的内源性O2-引起的精子DNA损伤的保护作用不明显.
