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镉对中国林蛙肝组织结构的毒性效应
随着工业生产的发展,镉对环境的污染越来越严重.镉(Cd)是动物体内的非必需元素,是一种具有毒性的生物异物质.两栖动物生活在水陆之间,水域和陆地的污染都可影响到它们的正常生存.一般认为,肝既是两栖动物体内镉的主要解毒器官,也是重要的蓄积部位….研究镉对两栖动物肝的毒性效应,主要集中在肝的解毒功能方面[2,3],而有关镉对两栖动物肝损伤的研究尚未见报道.但已有许多研究表明,环境中镉的污染对哺乳动物肝具有损伤作用[4].我们以中国林蛙(rana chensinensis)成体为对象,探讨不同剂量Cd2+对肝组织结构的影响,为深入研究镉对动物肝损伤的毒理学机制奠定基础,并为两栖动物的保护和环境评价及治理提供理论依据.
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哈蟆油动物基原问题探讨
目的:根据历史文献及现代在中国林蛙分类方面研究成果,确定哈蟆油的正品动物基原.方法:查阅历代本草著作及相关历史文献资料与近代国内外对中国林蛙有关研究报道,进行整理、分析、总结.结果:本草著作中记载的山蛤原动物为中国林蛙;中国林蛙是独立的种,而不是欧洲林蛙的一个亚种;中国林蛙有4个亚种,分别为中国林蛙指名、兰州、康定、长白山亚种;哈什蟆的原动物为中国林蛙长白山亚种.结论:中国林蛙长白山亚种为哈蟆油正品动物基原.
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基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究
哈蟆油具有较高的经济和社会价值,其混伪品较多,给市场造成了很大的混乱.利用基于COI序列的DNA条形码技术对已鉴定的东北林蛙、中国林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙进行PCR扩增和测序,建立4种林蛙COI基因数据库;将所测的序列与GenBank上的序列进行比对,显示为上述4种林蛙;应用MEGA(molecular evolutionary genetics analysis)7.0软件计算K2P遗传距离并构建NJ(neighbor-joining)系统聚类树,所测4种林蛙的序列和GenBank上下载的4种林蛙的序列分别聚为1支,但与GenBank上下载的2个外群独立分开,东北林蛙的COI基因可能存在地域性差异,但该技术并不能鉴别林蛙的雌雄.结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物,说明DNA条形码COI为哈蟆油基原动物的鉴定提供一个新的手段和方法.
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中国林蛙抗菌肽对胃癌细胞生长抑制作用
目的 研究中国林蛙抗菌肽对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用.方法 以人胃癌细胞SGC-7901为体外实验模型,通过细胞形态学观察、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验、分裂指数法和集落形成实验,研究抗菌肽对胃癌细胞生长的抑制作用.结果 细胞形态学观察,中国林蛙抗菌肽组中,细胞数量减少,细胞膜出现孔洞,浮起的死细胞增加.MTT实验中随着抗菌肽浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢,呈剂量-效应关系和时间-效应关系.分裂指数和集落形成实验中,中国林蛙抗菌肽对胃癌细胞SGC-7901有丝分裂和集落形成均有明显抑制作用(P＜0.01).结论 中国林蛙抗菌肽对人胃癌细胞SGC-7901的生长有显著的抑制作用.
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中国林蛙卵油的抗焦虑作用
目的研究中国林蛙卵油(egg oil of Rana temporaria chensinensis David,EORTCD)的抗焦虑作用.方法应用高架十字迷路和小鼠爬梯实验评价中国林蛙卵油的抗焦虑活性及其量效、时效关系.结果与对照组比较,EORTCD 2.0、4.0 g*kg-1能显著延长大鼠在十字迷路开放通路连续停留时间,增加大鼠进入开放通路次数,而对封闭通路连续停留时间和进入封闭通路次数无明显影响;小鼠爬梯实验中,EORTCD 1.4～5.6 g*kg-1组小鼠站立数明显减少而爬梯数无显著差异;EORTCD抗焦虑时效实验表明在给药后30、60 min抗焦虑活性较强;γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)50、100 mg*kg-1分别与EORTCD 1.2 g*kg-1联合给药组的小鼠站立数显著降低而爬梯数无显著减少,且比单独给予EORTCD组小鼠站立数少.结论中国林蛙卵油有明显抗焦虑作用.
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重金属在中国林蛙体内富集特征研究
目的 通过测定中国林蛙不同部位中重金属的含量,初步诠释重金属在中国林蛙体内富集特征,并阐明中国林蛙药用、食用的安全性.方法 采用原子吸收法和原子荧光法,测定中国全体(去除输卵管和卵的雌、雄体)、输卵管和卵中铅、砷、汞、镉、铜的含量.结果 3个产地的中国林蛙输卵管、卵及雌雄蛙全体中重金属含量均符合标准.结论 重金属在中国林蛙体内有富集,但并未显示靶向积聚趋势.此研究表明中国林蛙在应用时比较安全.
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林蛙皮中胶原蛋白的提取工艺研究
目的 采用酸酶法从林蛙皮中提取胶原蛋白.方法 考察了药材粉碎度、加水量、酶的种类对林蛙皮中胶原蛋白提取率的影响.单因素考察结合正交实验得到胶原蛋白的优提取条件.结果 胶原蛋白的优提取条件为:加水量为60mL,提取时间为72 h,提取温度为37℃,加酶量为1％(0.05 g),加酸量为0.8 mol/L.结论 此条件下林蛙皮中胶原蛋白的产率可达67.09％,并且此种提取胶原蛋白的方法操作简单、提取率高.
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哈蟆油基原物种DNA分子鉴定研究
目的 建立一种简单、可行的蛤蟆油基原物种DNA分子鉴定方法,并为其鉴定提供有效的手段.方法 以COI作为条形码序列,对蛤蟆油基原物种中国林蛙和黑龙江林蛙进行DNA提取,PCR扩增和双向测序,用CodonCode Aligner V 4.2.7校对拼接,并用MEGA6.0对其样品进行种内分析.结果 实验样品可以获得蛤蟆油基原物种的序列,中国林蛙有34个碱基变异位点,种内平均K2P距离为0.042,种内大K2P距离为0.058.黑龙江林蛙有3个碱基变异位点,种内平均K2P距离为0.003,种内大K2P距离为0.005.结论 运用COI条形码序列能够准确鉴定蛤蟆油基原物种,为其鉴定提供新方法.
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加强中国林蛙资源保护,合理开发利用
中国林蛙主要分布在我国东北地区,随着工农业生产和城市建设不断发展,中国林蛙适宜的生存环境遭到破坏,中国林蛙野生资源减少.导致其资源蕴藏量减少的主要是气候条件等自然因素及人为的过量捕捉、破坏其生存环境等人为因素.为保护中国林蛙的野生资源,实现其资源的可持续性利用,必须从保护林蛙栖息环境,提高全民保护意识,对林蛙资源综合研究不断深入等多方面加强对中国林蛙资源的保护,进行合理开发利用,保证其资源可持续性发展.
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林蛙皮中胶原蛋白的含量测定研究
目的 扩大中国林蛙应用范围,增加其自身经济价值.建立林蛙皮中胶原蛋白的含量测定方法,并考察其中的胶原蛋白含量.方法 应用Worssner比色法测定中国林蛙皮水解液中的L-羟脯氨酸的含量,计算出中国林蛙皮中胶原蛋白的含量.结果 中国林蛙皮中L-羟脯氨酸的含量为37.7 mg/g,胶原蛋白在林蛙皮中百分比为37.86％.结论Worssner比色法稳定、有效,可用于测定中国林蛙皮中胶原蛋白的含量测定.林蛙皮中胶原蛋白含量极高,可以作为新的提取来源.
关键词： 中国林蛙 林蛙皮 Worssner比色法 L-羟脯氨酸 胶原蛋白 -
中国林蛙栖息地环境质量评价
目的 通过测定中国林蛙栖息地的土壤、水中重金属含量,初步评价其生态环境质量,为探讨中国林蛙及其生态环境中重金属含量的相关性奠定基础.方法 参照国家环保局《环境检测分析方法》布点采样,采用原子吸收法和原子荧光法测定中国林蛙养殖地土壤和水中铅、砷、汞、镉、铜5种重金属的含量.结果 中国林蛙栖息地水质中铅、镉、砷、汞符合国家Ⅰ类标准;Y1、Y2产地水质中铜元素符合国家Ⅱ类标准、Y3产地越冬池水中铜元素符合国家Ⅰ类标准.Y1产地土壤中铅、汞符合国家二级标级,铜符合国家一级标级,镉符合国家三级标准,砷超出国家标准;Y2产地土壤中铅符合国家一级标准,镉、砷符合国家三级标准,铜、汞符合国家二级标准;Y3产地土壤中铜符合国家一级标准,铅、汞符合国家二级标准,镉、砷符合国家三级标准.结论 中国林蛙栖息地生态环境质量符合国家相关标准规定,该环境下所养殖的中国林蛙及其产哈蟆油具有一定的安全性.
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中国林蛙卵油和卵渣中微量元素的测定
目的:为中国林蛙油和卵渣应用提供科学依据.方法:采用等离子光谱和分光光度计法测定中国林蛙卵油和卵渣中的微量元素.结果:卵油和卵渣中均含Zn,Mn,Cu,Fe等9种人体必需微量元素,且Zn/Cu比值较小.结论:卵油可能具有抗衰老及防治冠心病和高血压等作用.
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哈蟆油的原动物分类阶元探讨
目的:根据近代国内外学者关于林蛙属的研究报道及笔者所研究的内容,进一步探讨哈蟆油的原动物分类阶元.方法:综合分析文献资料报道,从形态学、染色体组型、银带及同工酶电泳、基因水平等方面,探讨哈蟆油原动物的分类地位.结果:哈蟆油的原动物基源为东北林蛙.结论:其分类阶元为我国蛙类的一有效物种.
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中国林蛙长白山亚种显微结构的研究
中国林蛙长白山亚种的资源十分丰富,是我国一种重要的野生药用动物,其干燥输卵管(蛤蟆油)及皮肤提取物(抗菌肽)即为珍贵中药材及有效提取物.近几年来,人们又把研究的重点放在骨泥上,研究发现骨泥也有许多药用价值.然而人们对中国林蛙长白山亚种骨骼的组织学研究,却鲜有报导.
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吉林省不同地域产中国林蛙的形态学比较
中国林蛙Rana temporaria chensinensis David(药典名),在动物分类学上属于两栖纲、元尾目、蛙科、林蛙属的动物,俗称蛤士蟆、田鸡、蛤蟆、雪哈等,其干燥输卵管是名贵中药材--蛤蟆油,在我国有着悠久的药用历史.目前中国林蛙主要是采用半人工方式进行养殖,吉林省是中国林蛙的主要产区,作为国家北药基地,我省已建立了中国林蛙的GAP基地,大力开展和扶持林蛙养殖产业.因此对中国林蛙进行深入的形态学研究很有现实意义.
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哈什蟆原动物研究
哈什蟆主要分布于长白山区域,是我国一种重要的野生药用动物,其干燥输卵管即为中外驰名的珍贵中药材:哈蟆油.对于哈什蟆的原动物问题存有不同观点,对记载哈什蟆的历史文献以及有关中国林蛙的分类研究文献进行整理,确认我国东北地区的林蛙有黑龙江林蛙(Rana amurensis Boulenger)、桓仁林蛙(Rana huanrenensisLiu,Zhang and Lliu)和东北林蛙(Rana dybowskii Güenther),哈什蟆的原动物暨哈蟆油的动物基源为东北林蛙.
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中国林蛙消化道4种内分泌细胞的免疫组织化学定位
目的:研究中国林蛙(Rana chensinensis)消化道内5-羟色胺(5-HT)、生长抑素(SS)、胃泌素(GAS)和P物质(SP)4种内分泌细胞免疫组织化学的定位.方法:用免疫组织化学ABC法.结果:5-HT细胞在中国林蛙消化道内均有分布,其中以胃贲门部分布密度为高,胃体次之,空肠为低;SS细胞从食管到回肠可见其分布,直肠部未见,其中胃体分布密度为高,回肠部低;GAS细胞只在十二指肠和空肠两个部位检测到;而SP细胞在整个消化道内未见其分布.结论:中国林蛙消化道这4种内分泌细胞的分布有其自身的特点,不仅与哺乳类和爬行类动物不同,而且在两栖类各品种间也表现出了某种程度的差异性.
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中国林蛙药理作用的研究概况
中国林蛙(Rana temporaria chensinensis David.)是我国著名的集药用、食用、保健于一身的珍贵蛙种,栖息在东北的山林沼泽中,因生性耐寒,又称雪蛙.近年研究表明中国林蛙含有丰富的生物活性成分,蛙肉、蛙皮、蛙卵、蛙油皆成为食品、医药、日化等轻工业原料.中国林蛙全身可入药,特别林蛙油,更以稀少而珍贵.林蛙油[1]又称为蛤蟆油、田鸡油、哈什蚂油,为雌性林蛙输卵管的干制品,是营养保健价值极高的滋补品和药物.林蛙特有的营养作用和药用价值不断被人们认识.本文就中国林蛙药理作用的研究进展作一综述.
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中国林蛙与黑龙江林蛙产油性能比较研究
目的:为科学指导林蛙养殖,并提供哈蟆油质量评价的理论依据,对中国林蛙与黑龙江林蛙体重与哈蟆油产量相关性及哈蟆油膨胀度差异性进行对比研究.方法:采集3年生的雌性中国林蛙100只、雌性黑龙江林蛙50只,采用鲜蛙取油法和干蛙取油法获得3种哈蟆油样品,测定3种哈蟆油样品膨胀度;采用SPSS 17.0统计学软件,分析中国林蛙体重、黑龙江林蛙体重与产油性能的相关性,比较3种哈蟆油膨胀度的差异性.结果:中国林蛙及黑龙江林蛙的体重与哈蟆油产量呈极显著正相关;3种哈蟆油在室温水浸8h后的膨胀度存在显著差异.林蛙体重与哈蟆油产量具有极显著正相关;3年生雌性中国林蛙的哈蟆油产量为(1.04±0.31)g,显著高于3年生雌性黑龙江林蛙产量(0.73±0.34)g;2种林蛙的干油产率分别为(2.88±0.44)％和(2.95±0.71)％,没有显著差异.结论:依据在室温水浸8h后的膨胀度可以区分鲜蛙取油法和干蛙取油法的哈蟆油样品,但2种取油方法对哈蟆油性状质量无显著影响.
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林蛙头多糖抗凝血活性的研究
目的探讨林蛙头多糖对凝血系统的影响.方法体外实验分别测定林蛙头多糖对复钙凝血时间、凝血酶原时间、凝血酶生成时间、凝血酶活性、水解纤维蛋白,激活纤溶酶原和对血凝块的影响.体内实验采用断尾法测定出血时间,玻片法测定凝血时间.结果林蛙头多糖在体外表现出显著的抗凝血效果,其作用随着浓度的增加而增强,但没有表现出溶栓作用.在体内能延长凝血时间和出血时间.结论林蛙头多糖在体内外均有抗凝血活性.
