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苯并(a)芘对HELF细胞S期细胞周期相关蛋白的作用
目的 观察由于苯并(a)芘(BaP)作用阻滞于S期的人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期蛋白和关卡蛋白表达水平的改变,探讨BaP影响细胞周期的作用机制.方法 5μmol/L BaP处理4h,于处理后24 h收获细胞,利用流式细胞术对BaP作用后的G0/G1期和S期细胞进行分选,Western blot方法分析相关蛋白表达水平的变化.结果 BaP作用HELF后,在总细胞群中和分选获得的S期细胞中均发现Chk1磷酸化水平升高,Cde25A的表达水平降低;只在分选获得的S期细胞中,发现CyclinE表达水平降低,CDK2和p53的表达水平升高.结论 BaP通过启动Chk1-Cdc25A和p53两条信号转导通路共同作用于CyclinE/CDK2,从而引发HELF细胞发生S期阻滞.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对增强人结肠癌化疗敏感性的作用
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对人结肠癌LOVO细胞化疗敏感性的影响.方法 体内实验:建立人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤模型,应用罗格列酮、5-Fu及两药联用连续灌胃给药两周,每2天测量瘤体的长径和短径,计算肿瘤体积和抑制率；体外实验:采用MTT法检测罗格列酮、5-Fu及两药联用对LOVO细胞生长的抑制作用,Hoechst染色检测细胞核形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting法检测Cyclin A1、Cyclin E1和Cdk2蛋白的表达变化.结果 体内实验:罗格列酮、5-Fu及其联合用药组对裸鼠移植瘤抑制率分别为67.97％、74.9％和80.49％,两药联合为相加作用；体外实验:罗格列酮能够增强5-Fu对细胞的生长抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性；细胞周期检测显示,5-Fu联合罗格列酮使S期细胞增多；与对照组相比,5-Fu处理组及联合用药组Cyclin A1表达量下调显著(P＜0.01),与5-Fu纽相比,联合用药组Cyclin A1表达量下调显著(P＜0.01)；与对照组相比,实验各用药组Cyclin E1、Cdk2表达量均下调显著(P＜0.01),与5-Fu组相比,联合用药组Cyclin E1表达量下调显著.结论 罗格列酮能够增强5-Fu的化疗效果,其机制与其诱导细胞凋亡及S期细胞周期阻滞有关.
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硒代胱氨酸对人三阴性乳腺癌细胞的抑制作用
目的 观察硒代胱氨酸(SeC)对三阴性乳腺癌(TNBC)的细胞毒效应,探讨其对TNBC的作用机制.方法 选取3种TNBC细胞株,根据不同的实验条件,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测SeC对TNBC的抑制作用,通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)法检测SeC对TNBC诱导凋亡的作用,通过碘化丙锭(PI)染色法检测SeC对TNBC细胞周期的影响.结果 SeC对TNBC增殖有明显的抑制作用,该作用随着SeC浓度的升高或共培养时间延长而增强.SeC诱导TNBC发生明显细胞凋亡,同样与SeC存在时间-剂量关系.SeC还可以引起TNBC的S期比例增加,G2/M期比例减少,在20、40μmol/L SeC中尤为明显.10 μmol/L SeC与MDA-MB-231共培养24、48、72 h后发现:24、48、72 h的S期比例与对照组比较有明显升高(P ＜0.01)；24h细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),48 h与72 h细胞凋亡率明显升高(P＜0.01).结论 SeC对TNBC增殖有明显的抑制作用.SeC可以引起TNBC发生明显的S期细胞阻滞及细胞凋亡,并具有明显的时间-剂量效应.SeC诱导MDA-MB-231发生S期阻滞的时间较细胞凋亡早,提示SeC诱导的S期阻滞及细胞凋亡可能为SeC抗癌作用机制的序贯事件.
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Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂诱导的A549细胞生物学行为的影响
目的 观察顺铂作用下A549细胞的细胞周期变化规律和Chk1、Chk2(Chk1/2)反义寡核苷酸(AsODN)对顺铂(DDP)诱导的A549细胞生物学行为的影响.方法 流式细胞术SubG1法检测DDP作用下A549细胞周期和凋亡的动力学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染Chk1/2AsODN后Chk1/2蛋白的表达;流式细胞仪Amexin V-FITC法和SubG1法检测转染Chk1/2 AsODN后DDP作用下的细胞周期和凋亡变化.结果 10ümol/L DDP作用12 h后A549细胞出现明显的S期阻滞,Chk1/2 AsODN对A549细胞中Chk1/2蛋白表达有明显抑制作用.转染Chk1/2 AsODN可显著增加DDP诱导下A549细胞的凋亡率约200%～300%,而联合转染Chk1/2 AsODN与单转染相比,凋亡无明显增加(P>0.05).转染Chk1/2 AsODN引起化疗增敏的机制是通过解除S期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的.结论 Chk1/2可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点,灭活Chk1/2基因可以显著增强肿瘤细胞化疗的敏感性.
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p53,miR-365在紫外线诱导小鼠胚胎成纤维细胞S期阻滞中作用
目的 探讨中波紫外线(UV-B)应激下p53调控细胞周期阻滞过程中miR-365的作用.方法 用50J/m2的UV-B分别照射p53正常表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和p53低表达的MEF,分别在照前和照后不同时间点用流式细胞术检测细胞周期分布情况；用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹( Western blot)分别检测p53在mRNA和蛋白表达水平的改变；用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-365的表达情况.结果 50J/m2的UV-B照射后18h,p53正常表达的MEF出现S期阻滞,并在照后24h出现明显的凋亡峰,而在p53低表达的MEF中未观察到此变化；2种细胞其p53的mRNA表达水平在照后未见明显改变；p53正常表达的MEF的p53蛋白在照后1h开始升高,至12h达到峰值,24h开始下降；而在p53低表达的MEF中p53蛋白未见明显改变；UV-B照射后p53正常表达的MEF中miR-365在照后4h升高(P＜0.05),并持续到照后8h,照后12h恢复到照前水平；而在p53低表达的MEF中miR-365无明显变化.结论 UV-B照射可能通过转录后调控作用提高细胞p53蛋白水平进而发挥其诱导细胞S期阻滞的作用；miR-365参与了p53蛋白诱导S期阻滞的过程.
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PIASy结直肠癌中的异常表达及其对结直肠癌细胞凋亡和周期的影响
目的:探讨PIASy(protein inhibitor of activated STAT4)在人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达情况及其对人结直肠癌细胞SW480凋亡及细胞周期的影响.方法:选取25例CRC组织及其对应癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测PIASy在CRC及正常癌旁组织中的相对表达水平;运用细胞转染技术使PIASy在SW480中过表达;通过流式细胞技术检测并对比转染前后细胞凋亡及细胞周期的变化情况.结果:在25例CRC及其相对应的癌旁正常组织中,PIASy阳性的癌旁组织为9例(阳性率36％),PIASy阳性的肿瘤组织为2例(阳性率8％),2组差异具有统计学意义(P=0.041);且癌旁组织中PIASy的相对表达量明显高于对应的肿瘤组织(CRC04:P=0.016;CRC18:P=0.001);PIASy过表达的SW480细胞凋亡水平明显升高(早期凋亡:P=0.000;晚期凋亡:P=0.014),且出现S期细胞的比例明显升高(P=0.000).结论:PIASy在CRC中存在缺失表达或低表达;外源性PIASy的过表达可诱导SW480细胞发生凋亡,并促使细胞周期出现S期阻滞.PIASy可能在CRC的发生发展中扮演着较为重要的作用.
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口腔癌过表达蛋白1在结肠癌中的表达及其对细胞增殖、周期、凋亡的影响
目的 研究口腔癌过表达蛋白1 (oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)在人结肠癌组织中的表达变化并探讨其对结肠癌细胞增殖能力、细胞周期及早期凋亡的影响.方法 收集人结肠癌及癌旁组织标本,分别以qRT-PCR及Western blot检测ORAOV1在mRNA及蛋白水平的表达变化情况;采用RNAi技术获得ORAOV1低表达的LoVo及SW480细胞株,并使用Western blot对干扰结果进行鉴定;采用CCK-8检测干扰ORAOV1表达后两种结肠癌细胞增殖能力的变化;并采用流式细胞术检测干扰ORAOV1表达对结肠癌细胞周期及早期凋亡的影响.结果 qRT-PCR及Western blot结果分别显示结肠癌组织中的ORAOV1 mRNA及蛋白水平高于癌旁组织(P＜0.05);Western blot检测证实LoVo及SW480细胞中ORAOV1干扰成功;在这两种结肠癌细胞株中,CCK-8检测结果显示,干扰ORAOV1可抑制细胞增殖能力;流式细胞术结果显示,干扰ORAOV1可使处于S期比例增加(P＜0.05)、早期凋亡比例增加(P＜0.05).结论 结肠癌组织中的ORAOV1表达增加,干扰ORAOV1可降低结肠癌细胞的增殖能力,可能与S期阻滞及细胞早期凋亡增加有关.
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喹烯酮诱导HepG2细胞DNA复制相关基因表达水平的变化
目的:喹烯酮能诱导HepG2细胞S期阻滞,引起DNA和染色体损伤.本研究旨在对喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制进行筛选和分析.方法:本研究对喹烯酮染毒后HepG2细胞和未染毒HepG2细胞进行了Agilent全基因组的表达谱芯片检测,应用Genespring软件对差异表达的基因进行相关通路分析,并使用荧光定量PCR技术对部分DNA复制相关表达差异基因进行验证.结果:在芯片点样的41000个寡聚核苷酸片段中,喹烯酮染毒HepG2后,差异表达基因共1 750个,其中表达上调的基因共446个,表达下调的基因共1 304个.差异表达基因通路分析结果表明,与细胞周期、MAPK通路、DNA复制及DNA修复等通路相关的基因表达差异显著.经荧光定量PCR验证,DNA复制相关基因表达变化趋势与芯片检测结果相一致.结论:DNA复制相关基因的下降导致S期DNA复制的不完全性以及DNA损伤后引起的DNA修复,使得HepG2细胞在喹烯酮染毒后引起S期阻滞.基因表达谱芯片检测分析的结果为喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制的深人研究奠定了基础.
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呋喃唑酮对Hep G2肝癌细胞增殖和细胞周期的影响
背景与目的:探讨呋喃唑酮(furazolidoze,YZD)对体外培养的人肝癌细胞(Hep G2)的毒性机制.材料与方法:分别以不同浓度FZD(0.00、0.78、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00μg/ml)作用Hep G2细胞24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定FZD对细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的分布;RT-PCR半定量检测S期关卡相关基因的变化. 结果:随着FZD浓度的增加,Hep G2细胞的存活率逐渐降低,当浓度超过6.25 μg/ml时,细胞存活率下降显著(P＜0.05);细胞生长曲线显示各染毒浓度组细胞生长速度明显减慢;细胞周期动力学显示FZD在0～3.12μg/ml范围内S期细胞比例明显增加,G1期细胞比例下降;RT-PCR结果显示FZD作用后p21呈高表达,cyclinE、cyclinA和Cdk2表达量则不同程度下调.结论:FED对体外培养的Hep G2细胞有一定的细胞毒性且诱导S期阻滞,其增殖抑制作用可能是通过激活S期损伤关卡实现的.
