首页 > 文献资料
-
Bcl-xl基因对硝普钠诱导SY5Y细胞凋亡的抑制作用
[目的]研究Bcl-xl基因对成人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞毒性的影响.[方法]将构建好的Bcl-xl基因重组真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl转染SH-SY5Y细胞,并分为正常组、pIRES2-EGFP空质粒转染组、pIRES2-EGFP/Bcl-xl质粒转染组,利用凋亡诱导剂硝普钠(50 μmoL/L)诱导各组细胞凋亡,行Hoechst33258细胞染色对比观察各组细胞凋亡情况,通过MTT法分析各组细胞存活率.RT-PCR与Western blotting检测转染后Bcl-xl基因的表达情况.[结果]转染SH-SY5Y细胞后,检测结果显示Bcl-xl基因能够高效转染并在此细胞中蛋白表达.相对于未转染细胞来说,转染细胞能部分对抗硝普钠诱导的凋亡,MTT显示有统计学意义(P＜0.05).[结论]Bcl-xl基因能够通过升高基因的表达抑制NO诱导的类神经元细胞死亡,同时也能间接说明硝普钠产生的NO对细胞的毒性可能大部分是通过凋亡途径来产生的.
-
姜黄挥发油对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖及侵袭力的影响
目的：探讨姜黄挥发油（TVO）对神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞株增殖及侵袭力的影响。方法：分别用不同浓度的TVO（1．25～160 mg／L）行体外干预细胞，应用MTT法检测细胞存活率；细胞划痕实验检测160 mg／L TVO 对细胞迁移能力的影响；应用 Transwell 细胞侵袭试验检测细胞侵袭能力；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：随着TVO浓度的升高及干预时间的延长，SH-SY5Y细胞存活率逐渐减低（P ＜0．01），凋亡率逐渐增加；经160 mg／L TVO 的培养液培养12、24、48 h 后，其细胞迁移度明显低于对照组（P ＜0．01）；随TVO浓度增高，细胞侵袭能力逐渐减弱（P ＜0．01），且当浓度达到160 mg／L 时，侵袭力与顺铂无明显差异。结论：TVO能有效地抑制SH-SY5Y细胞增殖及侵袭。
-
米贝地尔对罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究
目的:观察T型钙通道拮抗剂米贝地尔对罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡的影响,探讨罗哌卡因诱发神经细胞毒性是否与T型钙通道相关.方法:将SH-SY5Y细胞随机分为4组:SH-SY5Y细胞正常培养组(A组); SH-SY5Y细胞5 ?滋mol/L米贝地尔培养组(B组); SH-SY5Y细胞3 mmol/L罗哌卡因培养组(C组);SH-SY5Y细胞5 ?滋mol/L米贝地尔+3 mmol/L罗哌卡因培养组(D组).各组细胞分别在有或无3 mmol/L罗哌卡因处理开始时(T0)、处理后1 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4),MTT法检测细胞活力、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率.结果:与A组相比,C组、D组在T1、T2、T3、T4时点细胞活力明显降低(P ＜ 0.05);但C组降低幅度更明显,C组与D组比较,两组在T1、T2、T3、T4时点差异有统计学意义(P ＜ 0.05).C组随时间的递增其细胞凋亡率逐渐增加,在T4时凋亡率达到高;D组在T1、T2、T3、T4时点的细胞凋亡率明显比C组降低,两组差异有统计学意义(P ＜ 0.05).结论:罗哌卡因对SH-SY5Y细胞有毒性作用,米贝地尔可减轻罗哌卡因诱发的神经细胞损伤,提示罗哌卡因诱发神经毒性可能与T型钙通道有关.
-
稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定.常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达.经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系.和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1 mRNA表达下降71.28％±1.45％ (P＜0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50％±2.63％ (P＜0.05).提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型.
-
红参水提物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用
目的 探讨红参水提物对Aβ25-35诱导人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用.方法 用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,模拟阿尔茨海默病患者脑内神经元的病理损伤模型,以不同浓度的红参水提物进行干预;用倒置显微镜观察其形态学的变化;MTT法测定细胞的存活率;流式细胞技术检测细胞的凋亡率以及线粒体膜电位的变化.结果 50 μmol·L-1Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆、聚集,其存活率为39.26%土3.16%、凋亡率为37.30%±0.69%,线粒体红绿荧光强度比值为0.45±0.10;而Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞与不同浓度(1、5、10 mg·ml-1)红参水提物同时孵育后,明显减少了细胞损伤,升高了细胞存活率、降低了凋亡率,并升高了线粒体红绿荧光强度比值.结论 红参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.
-
抑制miR-181a对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y多巴胺能细胞损伤的保护作用
目的:通过抑制miR-181a表达研究其对鱼藤酮诱导SH-SY5Y的细胞损伤、内质网应激以及未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的影响,为miR-181a在帕金森病治疗方面提供初步的实验依据.方法:不同浓度的鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用12、24、48、72 h;miR-181a类似物和miR-181a抑制剂及0.4 μmol/L鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用24h;采用CCK-8法检测细胞存活率;Annexin V/PI双染检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-181a与葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78 kD,GRP78)的靶标关系;qRT-PCR检测miR-181a和GRP78 mRNA表达水平;Western Blot检测GRP78、肌醇需酶1α(inositol-requiring enzyme 1,IRE1α)、X-盒结合蛋白1(X box-binding protein 1,XBP1)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)的蛋白表达水平.结果:(1)CCK-8结果显示:随着鱼藤酮浓度(＞0.1 μmol/L)增加,SH-SY5Y存活率降低,并存在浓度和时间依赖性;其中0.4 μmol/L作用24h后存活率已降为0.6(P＜0.05),加入miR-181a抑制剂后细胞存活率升高达0.8(P ＜0.05);(2)Annexin V/PI双染结果显示:抑制miR-181a表达,细胞的凋亡降低至0.23(P ＜0.05);(3)双荧光素酶报告基因检测显示:miR-181a与GRP78存在直接的靶标关系;(4) qRT-PCR结果显示:0.4 μmol/L鱼藤酮作用24 h后细胞miR-181a呈高表达(P＜0.05),抑制miR-181a表达可上调GRP78 mRNA水平(P＜0.05);(5)Western Blot结果显示:抑制miR-181a表达可上调GRP78和下调pIRE1α、XBP1和CHOP的蛋白表达(P＜0.05).结论:抑制miR-181a表达可减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能通过上调GRP78进而调节内质网应激以及抑制UPR相关信号通路,从而发挥对神经元细胞的保护作用.
