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二氯乙酸对人尿路上皮细胞膀胱癌相关基因甲基化、转录和蛋白表达的影响
目的 探讨二氯乙酸对人尿路上皮SV-HUC-1细胞膀胱癌相关癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5甲基化、转录水平以及蛋白表达量的影响,为阐明其毒性机制提供科学依据.方法 采用CCK-8法检测二氯乙酸对SV-HUC-1细胞的细胞毒性,确定不显著影响细胞存活率的浓度及处理时间.以1和2 mmol/L浓度二氯乙酸分别对SV-HUC-1细胞染毒24、48和72 h,采用甲基化特异性PCR(MSP)和real-time PCR对细胞中c-myc、APC、SFRP1和SFRP5基因的甲基化状态和mRNA表达量进行检测.以2 mmol/L浓度二氯乙酸对SV-HUC-1细胞染毒72 h,采用Western blot 对c-myc蛋白进行蛋白表达量检测.结果 二氯乙酸可使SV-HUC-1细胞中c-myc基因非甲基化程度升高,mRNA和蛋白表达量上升;可使APC、SFRP1和SFRP5基因甲基化程度升高,mRNA表达量下降.结论 二氯乙酸可影响SV-HUC-1细胞癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5的甲基化和表达,提示其可能有一定的表观遗传毒性.
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亚砷酸钠致SV-HUC-1细胞氧化应激作用的研究
目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1的氧化应激作用.方法 以不同浓度NaAsO_2(0、0.1、0.2、0.5、1、2、4、6、8、10、20 μmol/L)对SV-HUC-1细胞进行染毒,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活力,利用2',7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,分别应用DTNB比色法、硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 与空白对照组比较,全部染毒组细胞活力均下降(P<0.05);染毒24 h后,全部染毒组ROS水平均显著升高(P<0.05);2、4 μmol/LNaAsO_2组细胞GSH含量显著升高(P<0.05);全部染毒组细胞MDA含量均无变化(P>0.05);全部染毒组细胞SOD活力均显著降低(P<0.05).结论 氧化应激可能是NaAsO_2致SV-HUC-1细胞毒性作用的机制之一.
关键词： 砷 砷中毒 亚砷酸钠 SV-HUC-1细胞 氧化应激 -
亚砷酸钠对SV-HUC-1细胞NRF2通路影响
目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对人膀胱上皮细胞系SV-HUC-1细胞内核因子相关因子2(NRF2)活性的影响.方法 时间效应实验以4μmol/L NaAsO2分别处理SV-HUC-1细胞0(对照)、4、8、16、24h;剂量效应实验设对照组和NaAsO2处理组(1、2、4、8、10 μmol/L);Western blot免疫印迹试验检测NRF2通路相关蛋白(NRF2、NQO1和HO1)表达水平.结果 4μmol/L NaAsO2处理SV-HUC-1细胞4、8、16、24 h后,与对照组(0.68 ±0.03)比较,细胞内NRF2蛋白表达水平明显升高,16 h处理组NRF2蛋白表达高(1.17±0.10),差异有统计学意义(P＜ 0.05);随着染砷剂量增加,NRF2、NQO1和HO1蛋白表达水平增强,与对照组NRF2 (0.86 ±0.05)、NQO1(0.68±0.02)、HO1 (0.09 ±0.01)比较,4和8μmol/L NaAsO2处理组细胞内NRF2、NQO1、HO1蛋白表达水平分别为(1.12 ±0.01)和(1.16±0.11)、(0.93±0.01)和(1.15±0.19)、(1.28±0.01)和(1.30±0.02),均明显升高,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 NaAsO2急性暴露能够活化NRF2通路,引起膀胱上皮细胞适应性抗氧化反应增强.
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长时间低浓度暴露亚砷酸钠促进人正常膀胱上皮细胞增殖
以不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)(0、0.1、0.5、1.0 μmol/L)对人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)进行长期染毒,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活力.未经砷染毒的SV-HUC-1进行长期传代培养,细胞增殖活力没有发生任何改变;0.1、0.5 μmol/L NaAsO2处理20代后,细胞增殖活性显著增高,并呈剂量-反应增高趋势(r=0.632、P＜0.01,r=0.939、P＜0.01),而1.0 μmol/L NaAsO2处理的细胞其增殖活力未随染毒时间而发生变化(P＞0.05).提示长时间低浓度暴露NaAsO2可以促进SV-HUC-1增殖.
关键词： NaAsO2 SV-HUC-1细胞 增殖
