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转化生长因子-β2在粉防己碱对抗大鼠移植心脏慢性排斥中的作用
目的研究转化生长因子-β2(TGF-β2)在粉防己碱(TET)对抗移植心脏慢性排斥反应中的作用.方法Wistar-Wistar和SD-Wister大鼠间的颈部心脏移植分别作为同系和异系对照.TET治疗组(SD-Wistar)大鼠每日另给予50mg/kg TET灌胃,异系对照和TET治疗组大鼠每日给予环孢素A灌胃(1.5 mg/kg),同系对照不用任何药物治疗.12周后取移植心脏做组织学检查,免疫组织化学检测组织中TGF-β2表达,以图像分析仪计算阳性率.结果异系对照动脉管壁占血管直径的比值为0.64±0.20,明显高于同系对照组(0.23±0.07,P＜0.01)和TET治疗组(0.33±0.11,P＜0.05);TGF-β2在同系对照低度表达,异系对照的表达明显增强,TET治疗组的TGF-β2表达则明显减少.结论TGF-β2在慢性排斥的发生中具有重要作用,抑制TGF-β2表达,可能是TET抗慢性排斥的作用机制之一.
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大鼠模型动脉硬化形成中多种周期蛋白和周期蛋白依赖性激酶表达
目的通过大鼠胸主动脉腹腔移植模型,进一步探讨移植物动脉硬化形成过程中平滑肌细胞增殖的机理.方法健康纯系Wistar大自鼠为供者,SD大鼠为受者,均为雄性,体重120～350g.共分为3组.A组:急性排斥组,共90只,分别于术后2,4,8周处死.每小组各30只.B组:慢性排斥组,共72只,分别于术后4,8,12周处死.每小组各24只.C组:同系对照组,供受者均为Wistar大白鼠,共72例.建立同种异体大鼠胸主动脉腹腔移植模型.采用HE染色观察血管排斥程度;Masson三色染色法判断动脉硬化程度;免疫组化染色观察α-actin表达的阳性细胞数,以及这些阳性细胞表达PCNA、cdk1/cyclinB1、cdk2/cyclinE、cdk4/cydinD1的表达程度.结果A组整个血管壁均有明显的炎性细胞浸润,外膜病变比内膜更重.外膜α-actin阳性细胞数随着时间推移、病程进展明显增多.这些α-actin阳性细胞高度表达PCNA、cdk1/cyclinB1、cdk2/cyclinE和cdk4/cyclinD1,并随病变进展其表达程度增高.B组造成外膜炎性细胞浸润也比对照组明显,纤维化程度也高,也明显表达cdk's/cyclins;内、外膜增生程度大致相当,动脉硬化的发生较急性排斥晚,进展缓慢.滋养血管在A、B两组早期表达cdk's和cyclins,而且炎性浸润愈重,其表达愈早且明显,过快地发生增生、管腔狭窄或阻塞.结论急、慢性排斥均可导致移植物动脉硬化.前者首先出现外膜大量炎性细胞浸润及VSMC的增殖、纤维化,并大量表达cdk's和cyclins,整个管壁纤维化严重且发生较早.慢性排斥导致内、外膜增生程度相当,进展期主要表现为内、外膜VSMC增生和大量表达cdk's/cyclins.
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冷缺血损伤对大鼠移植物动脉硬化促发作用
目的 探讨4 h冷缺血损伤对大鼠移植物动脉硬化作用.方法 利用同种大鼠胸主动脉腹腔移植模型产生动脉硬化病理改变.实验分为免疫耐受组、免疫耐受冷缺血组、同系冷缺血组和对照组.冷缺血组移植前先将供体胸主动脉放人4℃生理盐水中浸泡4 h.通过马松(Masson)三色染色法估计血管硬化程度和增生平滑肌细胞的分布,免疫组化法测定α-肌动蛋白、增殖细胞核抗原、周期蛋白依赖性激酶1和周期蛋白B1在增生平滑肌细胞中的表达程度.结果 冷缺血2组均见明显内膜肥厚,主要表现为内、外膜平滑肌细胞大量增生及纤维化,平滑肌细胞排列较密集、成层状.增殖细胞核抗原、周期蛋白依赖性激酶1和周期蛋白B1在增生平滑肌细胞中均高度表达,且随时间推移和动脉硬化的进展其表达程度愈来愈高.结论 4 h冷缺血损伤可促发移植物动脉硬化.
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紫杉醇防治移植动脉硬化作用的实验研究
目的采用大鼠胸腹主动脉移植模型,探讨紫杉醇防治移植动脉硬化的作用.方法 Wistar大鼠40只,SD大鼠16只,按供、受鼠不同分为4组:A组为假手术组;B组为同品系移植(Wistar to Wistar)组;C组为单纯异品系移植(Wistar to SD)组;D组为异品系移植(Wistar to SD)紫杉醇干预组.移植术后30天切取移植动脉,采用光镜和电镜定性观察,并用计算机图像分析系统定量观测紫杉醇对移植动脉的影响.结果与A组比较,术后30天B组动脉壁无增厚、血管内膜未见明显增生;C组内膜增生明显,内外膜有大量炎症细胞浸润.紫杉醇则显著抑制移植动脉内膜增生,并减轻移植动脉内外膜炎症细胞浸润,防止管腔狭窄.结论紫杉醇可明显抑制异品系大鼠移植动脉内膜增生和炎症细胞浸润,防治移植动脉硬化.
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IGF-1Rα在移植物动脉硬化形成过程增生平滑肌细胞中的表达
目的:通过大鼠胸主动脉腹腔移植模型,探讨移植物动脉硬化(CAA)形成过程中增生内、外膜平滑肌细胞IGF-1Rα表达情况,并观察表达程度与平滑肌细胞增殖程度的关系.方法:雄性健康纯系Wistar和SD大鼠分别作为供体和受体,分为急性排斥(A组)、免疫耐受组和同系对照组.取腹腔移植胸主动脉标本进行Masson和免疫组化染色,比较移植术后不同时间内、外膜VSMC增生和纤维化程度以及IGF1Rα在增生外膜和内膜平滑肌细胞上的表达水平,IGF-1Rα与α-actin和PCNA表达程度的关系.结果:CAA发生后,α-actin阳性细胞出现在外膜,外膜增生和纤维化程度与IGF-1Rα和PCNA的表达程度一致,增生内膜表面有α-actin、IGF-1Rα和PCNA表达.术后A组外膜IGF-1Rα的表达程度逐渐增高(P＜0.01).术后第8周IGF-1Rα的表达程度与α-actin和PCNA相当.结论:IGF-1Rα在CAA平滑肌细胞中高度表达,表达程度与血管尤其外膜平滑肌细胞增生程度密切相关.
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CRP、IL-6、TNF-α与移植物动脉硬化早期发病的关系
目的 探讨血清炎症因子与移植血管动脉硬化早期发病的关系.方法 将36只同种异体胸主动脉腹腔移植大鼠分成4个实验组,每组9只.A组术后1周处死;B组术后2周处死;C组术后3周处死;D组术后4周处死.16只同系移植对照大鼠对应每个实验组,每次处死4只.术前及处死时抽血分离留取血清,采用酶联免疫吸附法检测C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;处死后留取血管标本,HE染色观察血管病理改变,用免疫组织化学法检测血管外膜炎症细胞浸润及α-肌动蛋白(α-actin)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、增殖细胞核抗原(PCNA)在血管壁中的表达.对比各组与术前血清炎症因子水平变化及各组间观察指标的变化.结果 CRP水平,各实验组及对照组均较术前基础水平明显增高(P<0.01),B、C、D实验组较对照组明显升高(P<0.01);IL-6水平,B实验组较术前升高(P<0.05),A、C、D实验组较术前明显升高(P<0.01),A、B、C对照组较术前基础水平升高(P<0.05),A、C、D实验组较对照组水平明显升高(P<0.01);TNF-α水平,A、B、C实验组较术前升高(P<0.05),D实验组较术前明显升高(P<0.01),各对照组与术前无明显变化,各实验组均较对照组明显增高(P<0.01).术后7d,外膜大量炎症细胞浸润;术后14d,外膜有轻度胶原纤维增生伴炎症浸润;术后28 d,外膜明显增犀,内有大量增生的平滑肌细胞、胶原纤维及炎症细胞,血管中层断裂,可见外膜平滑肌细胞迁移至内膜.内膜亦出现明显纤维化及平滑肌细胞增生.在血管外膜平滑肌细胞中,α-actin、PCNA和CDK1表达逐渐升高(P<0.05),且早于内膜.结论 大鼠同种异体胸主动脉腹腔移植后血清炎症介质水平呈持续升高,说明各种免疫因素导致外膜炎症反应,并参与移植血管动脉硬化的早期发病.
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骨髓细胞参与移植物动脉硬化的作用研究
目的 研究大鼠移植动脉新生内膜平滑肌细胞Sry基因的表达,探讨骨髓细胞在移植物动脉硬化中的作用.方法 采集雄性Wistar大鼠的骨髓细胞,将其移植到经γ射线照射预处理的雌性Wistar大鼠体内,制备嵌合体大鼠;4周后建立大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应模型,分为4组:雌性同系移植组、雌性异系移植组、雄性异系移植组、嵌合体异系移植组.术后8周,制备移植动脉组织标本进行病理组织学观察,分析移植动脉硬化情况;用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)单抗进行SABC法免疫组化染色,检测移植动脉新生内膜细胞α-SMA的表达情况;采用显微切割技术收集移植动脉冰冻切片新生内膜平滑肌细胞,用PCR检测其Sry基因的表达,分析移植动脉新生内膜平滑肌细胞是否来源于骨髓细胞.结果 异系移植组移植动脉新生内膜中α-SMA表达阳性平滑肌细胞大量增生,致动脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄;动脉壁新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著高于同系移植组(P＜0.01),而异系移植组之间差异无显著性意义(P＞0.05).PCR扩增显示,嵌合体异系移植组和雄性异系移植组一致,在相对分子量为225 bp处均有一条特异性扩增条带,而雌性异系移植组则无相应的核酸扩增条带;结果提示移植物动脉新生内膜平滑肌细胞来源于骨髓细胞.结论 在动脉移植慢性排斥反应中,骨髓细胞分化为血管新生内膜平滑肌细胞,参与移植物动脉硬化的发生和发展.
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移植物动脉硬化免疫病理机制研究进展
同种异体移植物动脉的免疫应答,尤其是血管内皮和平滑肌细胞的免疫损伤,引起移植物动脉硬化的发生.T细胞、细胞因子、抗体等作用于移植物动脉引起血管细胞损伤和表型的变化,导致移植物血管内膜增厚和血管舒缩功能障碍.本文主要介绍移植物动脉硬化的免疫病理机制.
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趋化因子与心脏同种异体移植血管病变的研究进展
形成心脏同种异体移植血管病变的中心事件是免疫和非免疫因素导致内皮功能受损之后的炎症反应.近来,越来越多的研究表明趋化因子在心脏同种异体移植血管病变的发生中起重要作用.
关键词： 病理学与病理生理学 趋化因子 心脏同种异体移植血管病变 移植物动脉硬化 -
缺血损伤诱导同品系大鼠腹主动脉移植硬化实验研究
目的探索缺血损伤在同品系大鼠腹主动脉移植硬化中的作用.方法将90只大鼠随机分为3组:A组为同品系(Wistar to Wistar)移植缺血小于30分钟组;B组为同品系移植缺血4小时组;C组为异品系(SD to Wistar)移植缺血小于30分钟组.于移植术后15、30及60天切取植入的腹主动脉进行光镜和电镜检查,应用MIAS-300计算机图像分析系统自动测量移植腹主动脉管腔面积、内膜面积和中膜面积.结果 A组术后60天动脉内膜轻度增厚,但B组和C组术后60天均有明显管腔面积缩小和内膜增厚现象,与A组比较差异有显著性意义(P＜0.05).病理检查结果表明,B组和C组增生的内膜均由单核/巨噬细胞和平滑肌细胞构成,但前者无中膜层平滑肌坏死及弹力膜断裂现象.结论缺血/再灌注损伤是移植动脉硬化的一个重要因素.
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Fas-配体在移植物动脉硬化血管平滑肌细胞中的表达
目的为探讨移植物动脉硬化形成过程中,血管内膜和外膜增生的平滑肌细胞中是否有Fas-配体(Fas-L)表达. 方法健康纯系Wistar大白鼠为供者,306只;SD大白鼠为受者,162只,根据受者血管移植后有无明显排斥反应分为3组.急性排斥组:受者90只,分别于术后14天、28天、56天处死,每次处死30只;免疫耐受组:受者72只,分别于术后28天、56天、84天处死,每次处死24只;对照组:供者和受者均为Wistar大白鼠,受者72只,处死方法同免疫耐受组.采用同种异体大鼠胸主动脉腹腔移植模型.切取标本经处理后进行Masson染色和免疫组织化学染色,比较移植术后不同时间Fas-L在增生外膜和内膜平滑肌细胞上的表达水平. 结果术后14天、28天、56天急性排斥组外膜Fas-L的表达程度逐渐增高(P＜0.01),其在外膜增生的平滑肌细胞中表达比内膜更早且广泛.Fas-L在急性排斥组的表达程度和范围亦比免疫耐受组和对照组明显增高和广泛(P＜0.05). 结论在移植物动脉硬化形成过程中,Fas-L在增生平滑肌细胞中高度表达,其参与移植物动脉硬化的发生和发展.
