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体外瞬时转染TIMP-1基因促进成纤维细胞增殖
目的:探讨体外瞬时转染组织型金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)质粒对小鼠成纤维细胞细胞周期和增殖的影响.方法:构建表达小鼠TIMP-1的质粒,体外转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,以转染空质粒的NIH3T3细胞作对照,采用RT-PCR和Western印迹分析检测TIMP-1在基因和蛋白质水平的表达;采用BrdU法和MTT法检测细胞增殖能力和活力;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:转染TIMP-1质粒的NIH3T3细胞在24 h即有明显的TIMP-1 mRNA表达和蛋白质表达上调;与转染空质粒的NIH3T3细胞相比,转染TIMP-1质粒的NIH3T3细胞48 h的BrdU摄取率显著升高(P＜0.01),72 h的MTT摄取率显著升高(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示与转染空质粒的细胞相比,72 h时TIMP-1质粒转染组G0/G1期细胞显著减少(P＜0.01),S期细胞比例显著升高(P＜0.01).结论:体外瞬时转染TIMP-1质粒可以有效地使TIMP-1的基因和蛋白质水平在NIH3T3细胞高表达,TIMP-1高表达显著提高细胞BrdU和MTT摄取率,减少G0/G1期细胞比例,提高S期细胞比例,提示TIMP-1高表达能够促进成纤维细胞增殖,从而加速间质纤维化的进程.
关键词： 组织型金属蛋白酶抑制剂1 细胞增殖 成纤维细胞 细胞周期 -
氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的内皮细胞MMP-1、TIMP-1和ICAM-1表达的影响
目的 观察氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1、细胞间黏附分子1表达的影响,探讨他汀类药物降脂外抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度氟伐他汀和内脏脂肪素共同孵育24 h,用逆转录聚合酶链反应法检测基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达.结果 与正常对照组比较,内脏脂肪素组基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达显著升高,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达量下降.氟伐他汀干预后,基质金属蛋白酶1和细胞间黏附分子1的表达较内脏脂肪素组显著降低,组织型金属蛋白酶抑制剂1的表达增加.结论 氟伐他汀可能通过抑制内脏脂肪素的活性,影响血管内皮细胞基质金属蛋白酶1、组织型金属蛋白酶抑制剂1和细胞间黏附分子1的表达,由此稳定血管内皮环境,抑制内皮细胞炎症反应,起到抗动脉粥样硬化的作用.
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冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1及磷酸化c-Jun蛋白表达改变与冠状动脉病变特征的相关性
目的 结合冠状动脉造影结果 ,探讨冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平改变与冠状动脉病变特征的关系.方法 40例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者分为急性冠状动脉综合征组(n=24)和稳定型心绞痛组(n=16).另选取同期经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变患者15例为对照组.采用免疫印迹法分别检测外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平,计算基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值,并结合Gensini冠状动脉病变积分标准评价其与冠状动脉管腔病变程度的线性关系及其在反映冠状动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用.结果 ①急性冠状动脉综合征组基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1、磷酸化c-Jun蛋白表达水平及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值较稳定型心绞痛组和对照组明显增高(均P<0.001).②基质金属蛋白酶9、磷酸化c-Jun及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值与Gensini冠状动脉病变积分呈正相关(r分别为0.433、0.476和0.457,均P<0.01);组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平与Gensini冠状动脉病变积分无相关性.③磷酸化c-Jun与基质金属蛋白酶9蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.839,P<0.001).结论 ①急性冠状动脉综合征患者基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平较稳定型心绞痛患者明显增高,其比例严重失调,反映了急性冠状动脉综合征患者冠状动脉管腔病变程度更为复杂且血管壁具有更多易损斑块;②核转录因子c-Jun活化可能参与了动脉粥样硬化中基质金属蛋白酶9表达的调控.
