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复方积雪草有效组分对人肾小管上皮细胞补体C3表达的影响
目的:探讨复方积雪草有效组分-积雪草苷/大黄素干预肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HPTEC)补体C3mRNA及蛋白的表达水平.方法:采用HPTEC,模型组TNF-α10 ng/ml诱导,治疗组在TNF-α诱导的同时,以不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素进行干预,于24 h后分别提取细胞RNA及上清,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶链免疫方法(ELISA)分别检测HPTEC C3 mRNA和蛋白的表达.结果:正常HPTEC具有C3mRNA和蛋白表达,经TNF-α诱导后C3表达明显上调,用不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素干预后,C3mRNA及蛋白水平表达出现不同程度的下调,呈一定的剂量依赖关系和协同作用.结论:复方积雪草有效组分能够抑制炎性细胞因子TNF-α上调所致的肾局部C3过度产生.
关键词： 积雪草苷/大黄素 人肾近曲小管上皮细胞 肿瘤坏死因子-α 补体C3 -
消癥活络方药对TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的影响
目的 通过离体细胞实验研究消癥活络方药含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响.方法 体外培养人肾HK-2,应用不同浓度消癥活络方药含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达.结果 TGF-β1可刺激HK-2细胞增殖,消癥活络方药含药血清可明显抑制TGF-β1引起的HK-2细胞增殖.TGF-β1可引起HK-2细胞α-SMA及CTGF表达上调,消瘕活络方药含药血清可抑制其上调.结论 消癥活络方药对TGF-β1诱导的HK-2的增殖及α-SMA、CTGF的表达具有抑制作用,可拮抗TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化作用,抑制TGF-β1刺激HK-2分泌细胞外基质可能是其抗纤维化形成的机制之一.
关键词： 消癥活络方药 转化生长因子β1 人肾近曲小管上皮细胞 转分化 -
镉诱导HK-2细胞信号通路的蛋白磷酸化变化及缝隙连接蛋白43的作用
[目的]探讨人肾近曲小管上皮细胞在镉(CdCl2)染毒下的信号通路蛋白磷酸化变化及缝隙连接蛋白43(Cx43)的作用. [方法]选取人肾近曲小管上皮细胞系HK-2,给予1μmol/L浓度的CdCl2染毒l0d.采用RNA干扰(siRNA)下调Cx43表达,采用Western blot检测Cx43蛋白表达,采用蛋白磷酸化芯片分析细胞信号通路蛋白磷酸化改变.[结果]在CdCl2染毒HK-2细胞10d后,蛋白磷酸化发生变化的位点有61个,发生蛋白磷酸化改变的通路有ErbB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、T细胞受体以及B细胞受体信号通路,细胞增殖下降(P＜0.05),凋亡上升(P＜0.05);在未染毒时沉默Cx43后,相对于Cx43未沉默组,有56个磷酸化位点发生改变,发生蛋白磷酸化改变的通路有焦点黏连、ErbB、MAPK信号通路等,细胞增殖下降(P＜0.05),而细胞凋亡未发生变化(P＞0.05);而染毒后再短暂下调Cx43,相较于镉染毒组,有102个位点变化,而焦点黏连、ErbB、MAPK、凋亡和趋化因子信号通路相关蛋白磷酸化水平发生变化,细胞增殖未发生变化(P＞0.05),而细胞凋亡下降(P＜0.05). [结论]镉较长时间染毒HK-2细胞,可能会影响ErbB、MAPK、T细胞及B细胞受体信号通路,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡;Cx43表达下降可能会通过改变焦点黏连、ErbB、MAPK、凋亡和趋化因子等信号通路的蛋白磷酸化水平,对细胞增殖与凋亡进行调控.
关键词： 氯化镉 人肾近曲小管上皮细胞 蛋白磷酸化 缝隙连接蛋白43 siRNA -
葛根素对人肾近曲小管上皮细胞ABCG2表达影响
目的 探讨葛根素(Pur)对人肾近曲小管上皮细胞(HK2)内三磷酸腺苷结合盒转运体G2 (ABCG2)基因与蛋白表达的影响,阐明葛根素治疗痛风的可能机制.方法 体外培养HK2细胞,分为对照组与25、50、100、200 mg/L葛根素给药组.CCK-8法检测葛根素对HK2细胞的影响;检测ALP活性,观察HK2细胞内酶促反应状态;荧光定量PCR法、Western blotting法检测对照组与给药组HK2细胞内ABCG2基因蛋白表达.结果 葛根素对HK2细胞有促进增殖作用(P＜0.05);100 mg/L葛根素组ALP活性佳(P＜0.01).荧光定量PCR和Western blotting法检测结果显示,葛根素组HK2细胞内ABCG2基因及蛋白表达明显高于对照组,其中100 mg/L葛根素组HK2细胞内ABCG2为明显,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 葛根素能够增加HK2细胞内ABCG2基因蛋白的表达,这可能是葛根素调节痛风患者血尿酸水平的重要分子机制之一.
关键词： 葛根素 痛风 人肾近曲小管上皮细胞 三磷酸腺苷结合盒转运体G2 -
普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人肾近曲小管上皮细胞转分化的作用及机制研究
目的 研究普罗布考对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导的人肾近曲小管上皮细胞HK-2转分化的保护作用,并探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)及氧化应激在其中的作用和相互关系.方法 采用不同浓度Ox-LDL(0～100μg/ml)孵育HK-2细胞,并予普罗布考(20μmol/L)和LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(250μg/ml)干预.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞增殖情况,用DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性,生化比色法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度,Western blot检测E-钙粘素(cadherin)、α平滑肌动蛋白(α-smooth muscle aetin,α-SMA)、LOX-1、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide 2-phosphate reduced tetrasodium salt,NADPH)氧化酶4(NOX4)表达.结果 12.5～200 μg/ml浓度范围内的Ox-LDL对HK-2细胞的增殖无明显影响,25～100μg/ml的Ox-LDL以浓度依赖方式促进HK-2细胞LOX-1、α-SMA蛋白表达上升,E-cadherin下降.而多聚肌苷酸、普罗布考能使LOX-1、a-SMA蛋白表达抑制,E-cadherin表达上调.50μg/ml的Ox-LDL能促进NOX4表达上调,ROS活性增加(451.5μg/ml比839.8μg/ml,P＜0.05),NO含量略增加(46.0 μmol/L比46.2 μmol/L),但无统计学意义(P＞0.05).而多聚肌苷酸、普罗布考能使NOX4表达下调,ROS活性下降,但对NO浓度无明显影响.结论 Ox-LDL可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与其结合LOX-1促进氧化应激有关,而普罗布考可以通过降低LOX-1,抑制氧化应激损伤,从而延缓HK-2细胞转分化的进程.
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镉致人肾近曲小管上皮细胞氧化损伤及凋亡的实验研究
[目的]探讨氯化镉对人肾近曲小管上皮细胞脂质氧化损伤和凋亡的影响.[方法]将细胞分成对照组和实验组,采用MTS法测定细胞死亡率;采用分光光度计检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.[结果]随着氯化镉浓度的增高,细胞死亡率、LDH活力、MDA含量均升高,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),LDH活性和MDA含量与染毒剂量作相关分析,相关系数为分别为0.878、0.931,有明显的相关性(P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,40 μmol/L氯化镉对细胞凋亡的影响大,细胞凋亡率为39.41%.[结论]氯化镉可引起人肾近曲小管上皮细胞氧化损伤、细胞凋亡和坏死.
关键词： 人肾近曲小管上皮细胞 镉 脂质过氧化 凋亡 -
鱼胆毒素致肾小管上皮细胞损伤的药物干预研究
目的 观察不同药物对鱼胆毒素(鲤醇硫酸酯钠)致人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响.方法 从新鲜草鱼胆汁中提取鲤醇硫酸酯钠,通过体外培养HK-2细胞系,应用MTT法评价鲤醇硫酸酯钠对HK-2细胞增殖抑制作用,并观察丹参、地塞米松、氨氯地平、水飞蓟宾、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)多种药物对鲤醇硫酸酯钠染毒HK-2细胞的干预效果.结果 (1) HK-2细胞存活率随着鲤醇硫酸酯钠浓度的增加和时间的延长而降低;(2)丹参可促进HK-2细胞增殖,HK-2细胞经丹参预处理再鲤醇硫酸酯钠染毒24 h后,细胞存活率显著增加,并随丹参浓度的增加而增加(P＜0.01),但地塞米松、氨氯地平、水飞蓟宾、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)干预鲤醇硫酸酯钠染毒HK-2细胞后,其细胞存活率无明显增加.结论 丹参可有效降低鱼胆汁毒素致肾小管上皮细胞的损伤,提高细胞活力.
关键词： 鱼胆毒素 鲤醇硫酸酯钠 人肾近曲小管上皮细胞 药物干预 丹参
